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-基本情報
登録情報 | データベース: PDB / ID: 3j9s | ||||||
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タイトル | Single particle cryo-EM structure of rotavirus VP6 at 2.6 Angstrom resolution | ||||||
要素 | Intermediate capsid protein VP6 | ||||||
キーワード | VIRAL PROTEIN (ウイルスタンパク質) / rotavirus (ロタウイルス) / virus (ウイルス) | ||||||
機能・相同性 | 機能・相同性情報 viral intermediate capsid / T=13 icosahedral viral capsid / host cell surface receptor binding / fusion of virus membrane with host plasma membrane / エンベロープ (ウイルス) / structural molecule activity / metal ion binding 類似検索 - 分子機能 | ||||||
生物種 | Bovine rotavirus strain UK/G6 (ウイルス) | ||||||
手法 | 電子顕微鏡法 / 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 2.6 Å | ||||||
データ登録者 | Grant, T. / Grigorieff, N. | ||||||
引用 | ジャーナル: Elife / 年: 2015 タイトル: Measuring the optimal exposure for single particle cryo-EM using a 2.6 Å reconstruction of rotavirus VP6. 著者: Timothy Grant / Nikolaus Grigorieff / 要旨: Biological specimens suffer radiation damage when imaged in an electron microscope, ultimately limiting the attainable resolution. At a given resolution, an optimal exposure can be defined that ...Biological specimens suffer radiation damage when imaged in an electron microscope, ultimately limiting the attainable resolution. At a given resolution, an optimal exposure can be defined that maximizes the signal-to-noise ratio in the image. Using a 2.6 Å resolution single particle cryo-EM reconstruction of rotavirus VP6, determined from movies recorded with a total exposure of 100 electrons/Å(2), we obtained accurate measurements of optimal exposure values over a wide range of resolutions. At low and intermediate resolutions, our measured values are considerably higher than obtained previously for crystalline specimens, indicating that both images and movies should be collected with higher exposures than are generally used. We demonstrate a method of using our optimal exposure values to filter movie frames, yielding images with improved contrast that lead to higher resolution reconstructions. This 'high-exposure' technique should benefit cryo-EM work on all types of samples, especially those of relatively low-molecular mass. | ||||||
履歴 |
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-構造の表示
ムービー |
ムービービューア |
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構造ビューア | 分子: MolmilJmol/JSmol |
-ダウンロードとリンク
-ダウンロード
PDBx/mmCIF形式 | 3j9s.cif.gz | 79.2 KB | 表示 | PDBx/mmCIF形式 |
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PDB形式 | pdb3j9s.ent.gz | 60 KB | 表示 | PDB形式 |
PDBx/mmJSON形式 | 3j9s.json.gz | ツリー表示 | PDBx/mmJSON形式 | |
その他 | その他のダウンロード |
-検証レポート
アーカイブディレクトリ | https://data.pdbj.org/pub/pdb/validation_reports/j9/3j9s ftp://data.pdbj.org/pub/pdb/validation_reports/j9/3j9s | HTTPS FTP |
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-関連構造データ
-リンク
-集合体
登録構造単位 |
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対称性 | 点対称性: (シェーンフリース記号: C3 (3回回転対称)) |
-要素
#1: タンパク質 | 分子量: 44905.676 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 由来: (組換発現) Bovine rotavirus strain UK/G6 (ウイルス) 発現宿主: Chlorocebus sabaeus (オナガザル) / 参照: UniProt: P04509, UniProt: P18610*PLUS | ||
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#2: 化合物 | ChemComp-ZN / | ||
#3: 化合物 | ChemComp-CL / | ||
#4: 化合物 | #5: 水 | ChemComp-HOH / | |
-実験情報
-実験
実験 | 手法: 電子顕微鏡法 |
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EM実験 | 試料の集合状態: PARTICLE / 3次元再構成法: 単粒子再構成法 |
-試料調製
構成要素 | 名称: Bovine rotavirus VP6 / タイプ: VIRUS |
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試料 | 濃度: 2.5 mg/ml / 包埋: NO / シャドウイング: NO / 染色: NO / 凍結: YES |
試料支持 | 詳細: C-Flat 1.2/1.3 |
急速凍結 | 装置: FEI VITROBOT MARK II / 凍結剤: ETHANE / Temp: 120 K / 湿度: 80 % 詳細: Blot for 4-6 seconds before plunging into liquid ethane (FEI VITROBOT MARK II). 手法: Blot for 4-6 seconds |
-電子顕微鏡撮影
実験機器 | モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company |
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顕微鏡 | モデル: FEI TITAN KRIOS / 日付: 2014年8月13日 |
電子銃 | 電子線源: FIELD EMISSION GUN / 加速電圧: 300 kV / 照射モード: FLOOD BEAM |
電子レンズ | モード: BRIGHT FIELDBright-field microscopy / 倍率(公称値): 29000 X / 最大 デフォーカス(公称値): 2000 nm / 最小 デフォーカス(公称値): 400 nm / Cs: 2.7 mm |
試料ホルダ | 資料ホルダタイプ: FEI TITAN KRIOS AUTOGRID HOLDER |
撮影 | 電子線照射量: 100 e/Å2 / フィルム・検出器のモデル: GATAN K2 (4k x 4k) 詳細: 130 frames, 0.1 seconds per frame, 100 e/A2, super resolution |
放射波長 | 相対比: 1 |
-解析
EMソフトウェア |
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CTF補正 | 詳細: each particle | ||||||||||||||||||
対称性 | 点対称性: I (正20面体型対称) | ||||||||||||||||||
3次元再構成 | 手法: projection matching / 解像度: 2.6 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / 粒子像の数: 4000 / ピクセルサイズ(公称値): 1.023 Å / ピクセルサイズ(実測値): 1.023 Å 詳細: Final map is a 13-fold average of VP6 trimers from the asymmetric unit of the reconstruction of the whole capsid. Data at resolutions higher than 15A were not used for alignments. 対称性のタイプ: POINT | ||||||||||||||||||
原子モデル構築 | プロトコル: FLEXIBLE FIT / 空間: REAL 詳細: REFINEMENT PROTOCOL--flexible DETAILS--Model was refined by real space refinement using COOT and all restraints. | ||||||||||||||||||
原子モデル構築 | PDB-ID: 1QHD PDB chain-ID: A | ||||||||||||||||||
精密化ステップ | サイクル: LAST
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