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- EMDB-23638: Monomeric single-particle reconstruction of the Yeast gamma-TuSC -

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基本情報

登録情報
データベース: EMDB / ID: EMD-23638
タイトルMonomeric single-particle reconstruction of the Yeast gamma-TuSC
マップデータMonomeric gamma-TuSC single-particle reconstruction main map
試料
  • 複合体: Monomer of the Yeast gamma-TuSC
    • タンパク質・ペプチド: Tubulin gamma chain
    • タンパク質・ペプチド: Spindle pole body component SPC98
    • タンパク質・ペプチド: Spindle pole body component SPC97
  • リガンド: GUANOSINE-5'-DIPHOSPHATE
キーワードmicrotubule nucleation / CELL CYCLE (細胞周期)
機能・相同性
機能・相同性情報


inner plaque of spindle pole body / microtubule nucleation by spindle pole body / outer plaque of spindle pole body / gamma-tubulin small complex / regulation of microtubule nucleation / mitotic spindle pole body / equatorial microtubule organizing center / gamma-tubulin complex / meiotic spindle organization / microtubule nucleation ...inner plaque of spindle pole body / microtubule nucleation by spindle pole body / outer plaque of spindle pole body / gamma-tubulin small complex / regulation of microtubule nucleation / mitotic spindle pole body / equatorial microtubule organizing center / gamma-tubulin complex / meiotic spindle organization / microtubule nucleation / positive regulation of cytoplasmic translation / spindle pole body / gamma-tubulin binding / mitotic sister chromatid segregation / spindle assembly / cytoplasmic microtubule organization / mitotic spindle organization / meiotic cell cycle / structural constituent of cytoskeleton / spindle / 紡錘体 / mitotic cell cycle / 微小管 / GTP binding / 細胞核 / 細胞質
類似検索 - 分子機能
チューブリン / Gamma tubulin complex component, C-terminal / Gamma-tubulin complex component, C-terminal domain superfamily / Gamma tubulin complex component C-terminal / Gamma-tubulin complex component protein / Gamma tubulin complex component protein, N-terminal / Gamma tubulin complex component N-terminal / チューブリン / Tubulin, C-terminal / Tubulin C-terminal domain ...チューブリン / Gamma tubulin complex component, C-terminal / Gamma-tubulin complex component, C-terminal domain superfamily / Gamma tubulin complex component C-terminal / Gamma-tubulin complex component protein / Gamma tubulin complex component protein, N-terminal / Gamma tubulin complex component N-terminal / チューブリン / Tubulin, C-terminal / Tubulin C-terminal domain / Tubulin, conserved site / Tubulin subunits alpha, beta, and gamma signature. / Tubulin/FtsZ family, C-terminal domain / Tubulin/FtsZ-like, C-terminal domain / Tubulin/FtsZ, C-terminal / Tubulin/FtsZ, 2-layer sandwich domain / Tubulin/FtsZ family, GTPase domain / Tubulin/FtsZ family, GTPase domain / Tubulin/FtsZ, GTPase domain / Tubulin/FtsZ, GTPase domain superfamily
類似検索 - ドメイン・相同性
Spindle pole body component SPC97 / Tubulin gamma chain / Spindle pole body component SPC98
類似検索 - 構成要素
生物種Saccharomyces cerevisiae (パン酵母) / Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) (パン酵母)
手法単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 3.7 Å
データ登録者Brilot AF / Lyon AS
資金援助 米国, 13件
OrganizationGrant number
Howard Hughes Medical Institute (HHMI)David Agard 米国
National Institutes of Health/National Institute of General Medical Sciences (NIH/NIGMS)R01 GM031627 米国
National Institutes of Health/National Institute of General Medical Sciences (NIH/NIGMS)R35 GM118099 米国
National Institutes of Health/National Institute of General Medical Sciences (NIH/NIGMS)P01 GM105537 米国
National Institutes of Health/National Institute of General Medical Sciences (NIH/NIGMS)P41 GM103533 米国
National Institutes of Health/National Institute of General Medical Sciences (NIH/NIGMS)GM083960 米国
National Institutes of Health/National Institute of General Medical Sciences (NIH/NIGMS)GM109824 米国
National Science Foundation (NSF, United States)1144247 米国
National Institutes of Health/Office of the Director1S10OD020054 米国
National Institutes of Health/Office of the Director1S10OD021741 米国
National Institutes of Health/National Institute of General Medical Sciences (NIH/NIGMS)R01 GM124149 米国
National Institutes of Health/National Institute of General Medical Sciences (NIH/NIGMS)P30 GM124169 米国
Department of Energy (DOE, United States)DE-AC02-05CH11231 米国
引用ジャーナル: Elife / : 2021
タイトル: CM1-driven assembly and activation of yeast γ-tubulin small complex underlies microtubule nucleation.
著者: Axel F Brilot / Andrew S Lyon / Alex Zelter / Shruthi Viswanath / Alison Maxwell / Michael J MacCoss / Eric G Muller / Andrej Sali / Trisha N Davis / David A Agard /
要旨: Microtubule (MT) nucleation is regulated by the γ-tubulin ring complex (γTuRC), conserved from yeast to humans. In , γTuRC is composed of seven identical γ-tubulin small complex (γTuSC) sub- ...Microtubule (MT) nucleation is regulated by the γ-tubulin ring complex (γTuRC), conserved from yeast to humans. In , γTuRC is composed of seven identical γ-tubulin small complex (γTuSC) sub-assemblies, which associate helically to template MT growth. γTuRC assembly provides a key point of regulation for the MT cytoskeleton. Here, we combine crosslinking mass spectrometry, X-ray crystallography, and cryo-EM structures of both monomeric and dimeric γTuSCs, and open and closed helical γTuRC assemblies in complex with Spc110p to elucidate the mechanisms of γTuRC assembly. γTuRC assembly is substantially aided by the evolutionarily conserved CM1 motif in Spc110p spanning a pair of adjacent γTuSCs. By providing the highest resolution and most complete views of any γTuSC assembly, our structures allow phosphorylation sites to be mapped, surprisingly suggesting that they are mostly inhibitory. A comparison of our structures with the CM1 binding site in the human γTuRC structure at the interface between GCP2 and GCP6 allows for the interpretation of significant structural changes arising from CM1 helix binding to metazoan γTuRC.
履歴
登録2021年3月17日-
ヘッダ(付随情報) 公開2021年5月12日-
マップ公開2021年5月12日-
更新2024年3月6日-
現状2024年3月6日処理サイト: RCSB / 状態: 公開

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構造の表示

ムービー
  • 表面図(断面を密度値に従い着色)
  • 表面レベル: 2.5
  • UCSF Chimeraによる作画
  • ダウンロード
  • 表面図(円筒半径に従い着色)
  • 表面レベル: 2.5
  • UCSF Chimeraによる作画
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  • あてはめたモデルとの重ね合わせ
  • 原子モデル: PDB-7m2z
  • 表面レベル: 2.5
  • UCSF Chimeraによる作画
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ムービービューア
構造ビューアEMマップ:
SurfViewMolmilJmol/JSmol
添付画像

ダウンロードとリンク

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マップ

ファイルダウンロード / ファイル: emd_23638.map.gz / 形式: CCP4 / 大きさ: 824 MB / タイプ: IMAGE STORED AS FLOATING POINT NUMBER (4 BYTES)
注釈Monomeric gamma-TuSC single-particle reconstruction main map
ボクセルのサイズX=Y=Z: 0.6267 Å
密度
表面レベル登録者による: 2.5 / ムービー #1: 2.5
最小 - 最大-2.2619312 - 7.1546426
平均 (標準偏差)-0.005090851 (±0.1951187)
対称性空間群: 1
詳細

EMDB XML:

マップ形状
Axis orderXYZ
Origin000
サイズ600600600
Spacing600600600
セルA=B=C: 376.02 Å
α=β=γ: 90.0 °

CCP4マップ ヘッダ情報:

modeImage stored as Reals
Å/pix. X/Y/Z0.62670.62670.6267
M x/y/z600600600
origin x/y/z0.0000.0000.000
length x/y/z376.020376.020376.020
α/β/γ90.00090.00090.000
MAP C/R/S123
start NC/NR/NS000
NC/NR/NS600600600
D min/max/mean-2.2627.155-0.005

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添付データ

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ハーフマップ: Monomeric gamma-TuSC single-particle reconstruction half map 1

ファイルemd_23638_half_map_1.map
注釈Monomeric gamma-TuSC single-particle reconstruction half map 1
投影像・断面図
ZYX

投影像

断面 (1/2)
密度ヒストグラム

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ハーフマップ: Monomeric gamma-TuSC single-particle reconstruction half map 2

ファイルemd_23638_half_map_2.map
注釈Monomeric gamma-TuSC single-particle reconstruction half map 2
投影像・断面図
ZYX

投影像

断面 (1/2)
密度ヒストグラム

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試料の構成要素

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全体 : Monomer of the Yeast gamma-TuSC

全体名称: Monomer of the Yeast gamma-TuSC
要素
  • 複合体: Monomer of the Yeast gamma-TuSC
    • タンパク質・ペプチド: Tubulin gamma chain
    • タンパク質・ペプチド: Spindle pole body component SPC98
    • タンパク質・ペプチド: Spindle pole body component SPC97
  • リガンド: GUANOSINE-5'-DIPHOSPHATE

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超分子 #1: Monomer of the Yeast gamma-TuSC

超分子名称: Monomer of the Yeast gamma-TuSC / タイプ: complex / ID: 1 / 親要素: 0 / 含まれる分子: #1-#3
由来(天然)生物種: Saccharomyces cerevisiae (パン酵母) / 細胞中の位置: Spindle Pole Body
分子量理論値: 300 KDa

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分子 #1: Tubulin gamma chain

分子名称: Tubulin gamma chain / タイプ: protein_or_peptide / ID: 1 / コピー数: 2 / 光学異性体: LEVO
由来(天然)生物種: Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) (パン酵母)
: ATCC 204508 / S288c
分子量理論値: 52.671188 KDa
組換発現生物種: Spodoptera frugiperda (ツマジロクサヨトウ)
配列文字列: MGGEIITLQA GQCGNHVGKF LWSQLAKEHA IGTDGLSQLP DSSTERDDDT KPFFRENSRN KFTPRAIMMD SEPSVIADVE NTFRGFFDP RNTWVASDGA SAGNSWANGY DIGTRNQDDI LNKIDKEIDS TDNFEGFQLL HSVAGGTGSG LGSNLLEALC D RYPKKILT ...文字列:
MGGEIITLQA GQCGNHVGKF LWSQLAKEHA IGTDGLSQLP DSSTERDDDT KPFFRENSRN KFTPRAIMMD SEPSVIADVE NTFRGFFDP RNTWVASDGA SAGNSWANGY DIGTRNQDDI LNKIDKEIDS TDNFEGFQLL HSVAGGTGSG LGSNLLEALC D RYPKKILT TYSVFPARSS EVVVQSYNTI LALRRLIEDS DATVVFDNAS LLNISGKVFR NPNIDLQHTN QLISTIISSV TN SIRFPSY MYSSMSSIYS TLIPSPELHF LSPSFTPFTS DYIHDDIAHK GHSSYDVMLD LLDPSNSLVS TAMNNPTYFN VYN TIIGNV EPRQISRAMT KLQQRIKFPS WSSSAMHVNI GRRSPYLPLQ PNENEVSGMM LSNMSTVVNV FENACNTFDK VFAK GAFLN NYNVGDLFQS MQNVQDEFAE SREVVQSLME DYVAAEQDSY LDDVLVDDEN MVGELEEDLD ADGDHKLV

UniProtKB: Tubulin gamma chain

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分子 #2: Spindle pole body component SPC98

分子名称: Spindle pole body component SPC98 / タイプ: protein_or_peptide / ID: 2 / コピー数: 1 / 光学異性体: LEVO
由来(天然)生物種: Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) (パン酵母)
: ATCC 204508 / S288c
分子量理論値: 98.336211 KDa
組換発現生物種: Spodoptera frugiperda (ツマジロクサヨトウ)
配列文字列: MELEPTLFGI IEALAPQLLS QSHLQTFVSD VVNLLRSSTK SATQLGPLID FYKLQSLDSP ETTIMWHKIE KFLDALFGIQ NTDDMVKYL SVFQSLLPSN YRAKIVQKSS GLNMENLANH EHLLSPVRAP SIYTEASFEN MDRFSERRSM VSSPNRYVPS S TYSSVTLR ...文字列:
MELEPTLFGI IEALAPQLLS QSHLQTFVSD VVNLLRSSTK SATQLGPLID FYKLQSLDSP ETTIMWHKIE KFLDALFGIQ NTDDMVKYL SVFQSLLPSN YRAKIVQKSS GLNMENLANH EHLLSPVRAP SIYTEASFEN MDRFSERRSM VSSPNRYVPS S TYSSVTLR QLSNPYYVNT IPEEDILKYV SYTLLATTSA LFPFDHEQIQ IPSKIPNFES GLLHLIFEAG LLYQSLGYKV EK FRMLNIS PMKKALIIEI SEELQNYTAF VNNLVSSGTV VSLKSLYREI YENIIRLRIY CRFTEHLEEL SGDTFLIELN IFK SHGDLT IRKIATNLFN SMISLYYEYL MNWLTKGLLR ATYGEFFIAE NTDTNGTDDD FIYHIPIEFN QERVPAFIPK ELAY KIFMI GKSYIFLEKY CKEVQWTNEF SKKYHVLYQS NSYRGISTNF FEIINDQYSE IVNHTNQILN QKFHYRDVVF ALKNI LLMG KSDFMDALIE KANDILATPS DSLPNYKLTR VLQEAVQLSS LRHLMNSPRN SSVINGLDAR VLDLGHGSVG WDVFTL DYI LYPPLSLVLN VNRPFGRKEY LRIFNFLWRF KKNNYFYQKE MLKSNDIIRS FKKIRGYNPL IRDIINKLSR ISILRTQ FQ QFNSKMESYY LNCIIEENFK EMTRKLQRTE NKSQNQFDLI RLNNGTIELN GILTPKAEVL TKSSSSKPQK HAIEKTLN I DELESVHNTF LTNILSHKLF ATNTSEISVG DYSGQPYPTS LVLLLNSVYE FVKVYCNLND IGYEIFIKMN LNDHEASNG LLGKFNTNLK EIVSQYKNFK DRLYIFRADL KNDGDEELFL LSKSLR

UniProtKB: Spindle pole body component SPC98

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分子 #3: Spindle pole body component SPC97

分子名称: Spindle pole body component SPC97 / タイプ: protein_or_peptide / ID: 3 / コピー数: 1 / 光学異性体: LEVO
由来(天然)生物種: Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) (パン酵母)
: ATCC 204508 / S288c
分子量理論値: 96.940594 KDa
組換発現生物種: Spodoptera frugiperda (ツマジロクサヨトウ)
配列文字列: MEIKEVDDRA ELLRYTNNIP LLGKLVNHQP LWSTNPKLKS FSLEKISAPD QRRVQEALVV KDLLNVLIGL EGTYIRYFND YEPSDPETP IEFKIAKKMD PSFKTFSRRI VRYGKQYMIL TRAYEKWSDT SFGMVLQRFA YEIRRFLEDV YLKTLVERLE R DFNKVPNF ...文字列:
MEIKEVDDRA ELLRYTNNIP LLGKLVNHQP LWSTNPKLKS FSLEKISAPD QRRVQEALVV KDLLNVLIGL EGTYIRYFND YEPSDPETP IEFKIAKKMD PSFKTFSRRI VRYGKQYMIL TRAYEKWSDT SFGMVLQRFA YEIRRFLEDV YLKTLVERLE R DFNKVPNF SIRELEQIIN ETEVNKQMEL LYNIYEEIFR EIEERRTNQS SQEDFNNFMD SMKNESSLHL RLMVAFDTTV YP VPKGGAI LKIFQQKILE NLGDRSSVMF LKKLLNNISQ DYCTMLYEWL TQGILNDPYQ EFMTYDDLEG KTDNIFDTRD RAW DTQYFI RKDVLLRDCD SEEDKNLLFK MLRTGILLKV VRASLQIPTI PSNSSDITIQ EINDFADLME GSNLELYVDK CYSR ANEIF LKLFFQGYDL INVLKHLQQI FLGYQSGHNV LKFLTKNMGE LTKHYRNDNN ANYDKLLQNF ELERQSENPN NLMRQ LLMI QFDTETLPQV LSHYLQIYPE VPENNSANDD SDPLMHANNF KNMNAILFDE LSKERTGAYH GSNLELYTPK SAIYHL KFD INIPYPLNII ISRTCMIKYQ IILRYQLVLQ YHSRLLDETW MDLNKTPSWK YRGYSHTVKR RIVRATRVLH AKMNHFI KT IMEYFNQNVI DKEVYSLEKC YRNPTLAVAI QNELEGGLTN IMTNRCLSDL IPLQLQIFDI VYKFCKFIKS MRAKLCQL D PVLYEKHKSG MMKTLNEGYR TNNGGQEDVG YQEDAALELI QKLIEYISNA SSIFRKCLIN FTQELSTEKF DFYDSSSVD AAGIERVLYS IVPPRSASAS SQR

UniProtKB: Spindle pole body component SPC97

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分子 #4: GUANOSINE-5'-DIPHOSPHATE

分子名称: GUANOSINE-5'-DIPHOSPHATE / タイプ: ligand / ID: 4 / コピー数: 2 / : GDP
分子量理論値: 443.201 Da
Chemical component information

ChemComp-GDP:
GUANOSINE-5'-DIPHOSPHATE / GDP / GDP, エネルギー貯蔵分子*YM / グアノシン二リン酸

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実験情報

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構造解析

手法クライオ電子顕微鏡法
解析単粒子再構成法
試料の集合状態particle

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試料調製

濃度0.3 mg/mL
緩衝液pH: 7.5
構成要素:
濃度名称
40.0 mMHEPES-KOH
100.0 mMPotassium Chloride
2.0 mMMagnesium Chloride
1.0 mMEGTA
1.0 mMGDP
2.5 %v/vGlycerolグリセリン
グリッドモデル: Quantifoil R1.2/1.3 / 材質: COPPER / 支持フィルム - 材質: CARBON / 支持フィルム - トポロジー: HOLEY ARRAY / 前処理 - タイプ: GLOW DISCHARGE / 前処理 - 時間: 30 sec.
凍結凍結剤: ETHANE / チャンバー内湿度: 100 % / チャンバー内温度: 293 K / 装置: FEI VITROBOT MARK IV / 詳細: Whatman #1 Filter papers used..
詳細Sample was a mixture of monomers and dimers.

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電子顕微鏡法

顕微鏡FEI POLARA 300
電子線加速電圧: 300 kV / 電子線源: FIELD EMISSION GUN
電子光学系C2レンズ絞り径: 100.0 µm / 最大 デフォーカス(補正後): 5.0 µm / 最小 デフォーカス(補正後): 3.0 µm / 倍率(補正後): 39891 / 照射モード: FLOOD BEAM / 撮影モード: BRIGHT FIELDBright-field microscopy / Cs: 2.0 mm / 最大 デフォーカス(公称値): 1.0 µm / 最小 デフォーカス(公称値): 0.4 µm / 倍率(公称値): 31000
試料ステージ試料ホルダーモデル: OTHER / ホルダー冷却材: NITROGEN
撮影フィルム・検出器のモデル: GATAN K2 SUMMIT (4k x 4k)
検出モード: SUPER-RESOLUTION / デジタル化 - 画像ごとのフレーム数: 3-100 / 平均露光時間: 20.0 sec. / 平均電子線量: 76.0 e/Å2
実験機器
モデル: Tecnai Polara / 画像提供: FEI Company

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画像解析

粒子像選択選択した数: 3210917 / 詳細: cisTEM picking
初期モデルモデルのタイプ: INSILICO MODEL
In silico モデル: Particle coordinates were semi-automatically picked from filtered and binned images using the e2boxer swarm tool (Tang et al., 2007). Particles were extracted using Relion ...In silico モデル: Particle coordinates were semi-automatically picked from filtered and binned images using the e2boxer swarm tool (Tang et al., 2007). Particles were extracted using Relion (Scheres, 2012) with a box size of 384 physical pixels resampled to 96 pixels for initial processing. A dataset of ~50,000 particles from 217 micrographs was used to generate 300 2D classes using Relion 1.3. 23 classes were selected and used in the generation of a gamma-TuSC monomer initial model using the e2initialmodel.py function in EMAN2.
初期 角度割当タイプ: PROJECTION MATCHING / ソフトウェア - 名称: cisTEM (ver. 1.0 beta)
最終 3次元分類クラス数: 3 / 平均メンバー数/クラス: 220924 / ソフトウェア - 名称: cisTEM (ver. 1.0 Beta)
最終 角度割当タイプ: PROJECTION MATCHING / ソフトウェア - 名称: cisTEM (ver. 1.0 Beta) / 詳細: Projection matching in cisTEM
最終 再構成使用したクラス数: 1 / 想定した対称性 - 点群: C1 (非対称) / アルゴリズム: FOURIER SPACE / 解像度のタイプ: BY AUTHOR / 解像度: 3.7 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / ソフトウェア - 名称: cisTEM (ver. 1.0 Beta) / 使用した粒子像数: 398841

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原子モデル構築 1

精密化空間: REAL / プロトコル: OTHER / 温度因子: 164
得られたモデル

PDB-7m2z:
Monomeric single-particle reconstruction of the Yeast gamma-TuSC

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万見について

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お知らせ

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2022年2月9日: EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

  • EMDBのヘッダファイルのバージョン3が、公式のフォーマットとなりました。
  • これまでは公式だったバージョン1.9は、アーカイブから削除されます。

関連情報:EMDBヘッダ

外部リンク:wwPDBはEMDBデータモデルのバージョン3へ移行します

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2020年8月12日: 新型コロナ情報

新型コロナ情報

URL: https://pdbj.org/emnavi/covid19.php

新ページ: EM Navigatorに新型コロナウイルスの特設ページを開設しました。

関連情報:Covid-19情報 / 2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

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2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

新型コロナウイルスの構造データ

関連情報:万見生物種 / 2020年8月12日: 新型コロナ情報

外部リンク:COVID-19特集ページ - PDBj / 今月の分子2020年2月:コロナウイルスプロテーアーゼ

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2019年1月31日: EMDBのIDの桁数の変更

EMDBのIDの桁数の変更

  • EMDBエントリに付与されているアクセスコード(EMDB-ID)は4桁の数字(例、EMD-1234)でしたが、間もなく枯渇します。これまでの4桁のID番号は4桁のまま変更されませんが、4桁の数字を使い切った後に発行されるIDは5桁以上の数字(例、EMD-12345)になります。5桁のIDは2019年の春頃から発行される見通しです。
  • EM Navigator/万見では、接頭語「EMD-」は省略されています。

関連情報:Q: 「EMD」とは何ですか? / 万見/EM NavigatorにおけるID/アクセスコードの表記

外部リンク:EMDB Accession Codes are Changing Soon! / PDBjへお問い合わせ

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2017年7月12日: PDB大規模アップデート

PDB大規模アップデート

  • 新バージョンのPDBx/mmCIF辞書形式に基づくデータがリリースされました。
  • 今回の更新はバージョン番号が4から5になる大規模なもので、全エントリデータの書き換えが行われる「Remediation」というアップデートに該当します。
  • このバージョンアップで、電子顕微鏡の実験手法に関する多くの項目の書式が改定されました(例:em_softwareなど)。
  • EM NavigatorとYorodumiでも、この改定に基づいた表示内容になります。

外部リンク:wwPDB Remediation / OneDepデータ基準に準拠した、より強化された内容のモデル構造ファイルが、PDBアーカイブで公開されました。

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万見 (Yorodumi)

幾万の構造データを、幾万の視点から

  • 万見(Yorodumi)は、EMDB/PDB/SASBDBなどの構造データを閲覧するためのページです。
  • EM Navigatorの詳細ページの後継、Omokage検索のフロントエンドも兼ねています。

関連情報:EMDB / PDB / SASBDB / 3つのデータバンクの比較 / 万見検索 / 2016年8月31日: 新しいEM Navigatorと万見 / 万見文献 / Jmol/JSmol / 機能・相同性情報 / 新しいEM Navigatorと万見の変更点

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