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-基本情報
登録情報 | データベース: PDB / ID: 7uzw | |||||||||||||||
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タイトル | Staphylococcus epidermidis RP62a CRISPR effector subcomplex | |||||||||||||||
要素 |
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キーワード | RNA BINDING PROTEIN/RNA / Type IIIA CRISPR / effector complex / RNA BINDING PROTEIN / RNA BINDING PROTEIN-RNA complex | |||||||||||||||
機能・相同性 | 機能・相同性情報 exonuclease activity / endonuclease activity / defense response to virus / RNA binding / ATP binding / metal ion binding 類似検索 - 分子機能 | |||||||||||||||
生物種 | Staphylococcus epidermidis RP62A (表皮ブドウ球菌) | |||||||||||||||
手法 | 電子顕微鏡法 / 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 3.55 Å | |||||||||||||||
データ登録者 | Smith, E.M. / Ferrell, S.H. / Tokars, V.L. / Mondragon, A. | |||||||||||||||
資金援助 | 米国, 4件
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引用 | ジャーナル: Structure / 年: 2022 タイトル: Structures of an active type III-A CRISPR effector complex. 著者: Eric M Smith / Sé Ferrell / Valerie L Tokars / Alfonso Mondragón / 要旨: Clustered regularly interspaced short palindromic repeats (CRISPR) and their CRISPR-associated proteins (Cas) provide many prokaryotes with an adaptive immune system against invading genetic material. ...Clustered regularly interspaced short palindromic repeats (CRISPR) and their CRISPR-associated proteins (Cas) provide many prokaryotes with an adaptive immune system against invading genetic material. Type III CRISPR systems are unique in that they can degrade both RNA and DNA. In response to invading nucleic acids, they produce cyclic oligoadenylates that act as secondary messengers, activating cellular nucleases that aid in the immune response. Here, we present seven single-particle cryo-EM structures of the type III-A Staphylococcus epidermidis CRISPR effector complex. The structures reveal the intact S. epidermidis effector complex in an apo, ATP-bound, cognate target RNA-bound, and non-cognate target RNA-bound states and illustrate how the effector complex binds and presents crRNA. The complexes bound to target RNA capture the type III-A effector complex in a post-RNA cleavage state. The ATP-bound structures give details about how ATP binds to Cas10 to facilitate cyclic oligoadenylate production. | |||||||||||||||
履歴 |
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-構造の表示
構造ビューア | 分子: MolmilJmol/JSmol |
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-ダウンロードとリンク
-ダウンロード
PDBx/mmCIF形式 | 7uzw.cif.gz | 327.8 KB | 表示 | PDBx/mmCIF形式 |
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PDB形式 | pdb7uzw.ent.gz | 269 KB | 表示 | PDB形式 |
PDBx/mmJSON形式 | 7uzw.json.gz | ツリー表示 | PDBx/mmJSON形式 | |
その他 | その他のダウンロード |
-検証レポート
アーカイブディレクトリ | https://data.pdbj.org/pub/pdb/validation_reports/uz/7uzw ftp://data.pdbj.org/pub/pdb/validation_reports/uz/7uzw | HTTPS FTP |
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-関連構造データ
関連構造データ | 26920MC 7uzxC 7uzyC 7uzzC 7v00C 7v01C 7v02C M: このデータのモデリングに利用したマップデータ C: 同じ文献を引用 (文献) |
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類似構造データ | 類似検索 - 機能・相同性F&H 検索 |
-リンク
-集合体
登録構造単位 |
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1 |
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-要素
#1: タンパク質 | 分子量: 24033.975 Da / 分子数: 5 / 由来タイプ: 天然 由来: (天然) Staphylococcus epidermidis RP62A (表皮ブドウ球菌) 株: ATCC 35984 / RP62A / 参照: UniProt: Q5HK91 #2: タンパク質 | | 分子量: 34551.938 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 由来: (天然) Staphylococcus epidermidis RP62A (表皮ブドウ球菌) 株: ATCC 35984 / RP62A / 参照: UniProt: Q5HK92 #3: タンパク質 | | 分子量: 87685.781 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 由来: (天然) Staphylococcus epidermidis RP62A (表皮ブドウ球菌) 株: ATCC 35984 / RP62A / 参照: UniProt: Q5HK89 #4: RNA鎖 | | 分子量: 13862.377 Da / 分子数: 1 / Fragment: Repeat plus Spacer sequence 1 / 由来タイプ: 天然 由来: (天然) Staphylococcus epidermidis RP62A (表皮ブドウ球菌) 株: ATCC 35984 / RP62A |
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-実験情報
-実験
実験 | 手法: 電子顕微鏡法 |
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EM実験 | 試料の集合状態: PARTICLE / 3次元再構成法: 単粒子再構成法 |
-試料調製
構成要素 | 名称: Staphylococcus epidermidis RP62a CRISPR effector subcomplex タイプ: COMPLEX / Entity ID: all / 由来: NATURAL | ||||||||||||||||||||
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分子量 | 実験値: NO | ||||||||||||||||||||
由来(天然) | 生物種: Staphylococcus epidermidis RP62A (表皮ブドウ球菌) 株: RP62a | ||||||||||||||||||||
緩衝液 | pH: 8 | ||||||||||||||||||||
緩衝液成分 |
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試料 | 濃度: 3.2 mg/ml / 包埋: NO / シャドウイング: NO / 染色: NO / 凍結: YES | ||||||||||||||||||||
試料支持 | 詳細: cryo-EM grids were prepared by glow discharging for 10 seconds at 15 mA in a Pelco easiGlow glow discharger. グリッドの材料: COPPER / グリッドのサイズ: 400 divisions/in. / グリッドのタイプ: C-flat-1.2/1.3 | ||||||||||||||||||||
急速凍結 | 装置: FEI VITROBOT MARK IV / 凍結剤: ETHANE / 湿度: 95 % / 凍結前の試料温度: 277 K 詳細: 3 ul of the protein-RNA complex were added to the grid and allowed to incubate for 10 seconds. After incubation the grid was blotted in a Vitrobot Mark IV (FEI Thermo Fischer) (humidity 95% ...詳細: 3 ul of the protein-RNA complex were added to the grid and allowed to incubate for 10 seconds. After incubation the grid was blotted in a Vitrobot Mark IV (FEI Thermo Fischer) (humidity 95% and temperature 4 C) for 3 seconds with a force of 0 before plunge freezing in liquid ethane. |
-電子顕微鏡撮影
実験機器 | モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company |
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顕微鏡 | モデル: TFS KRIOS |
電子銃 | 電子線源: FIELD EMISSION GUN / 加速電圧: 300 kV / 照射モード: OTHER |
電子レンズ | モード: BRIGHT FIELD / 倍率(補正後): 44454 X / 最大 デフォーカス(公称値): 2500 nm / 最小 デフォーカス(公称値): 1500 nm / アライメント法: COMA FREE |
試料ホルダ | 凍結剤: NITROGEN 試料ホルダーモデル: FEI TITAN KRIOS AUTOGRID HOLDER |
撮影 | 電子線照射量: 49.5 e/Å2 / フィルム・検出器のモデル: GATAN K3 (6k x 4k) / 実像数: 2455 |
-解析
EMソフトウェア |
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CTF補正 | タイプ: PHASE FLIPPING AND AMPLITUDE CORRECTION | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
粒子像の選択 | 選択した粒子像数: 2368249 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
対称性 | 点対称性: C1 (非対称) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
3次元再構成 | 解像度: 3.55 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / 粒子像の数: 205747 / アルゴリズム: FOURIER SPACE / 対称性のタイプ: POINT | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
原子モデル構築 | プロトコル: OTHER / 空間: REAL | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
原子モデル構築 |
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