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-基本情報
登録情報 | データベース: PDB / ID: 6n1q | ||||||||||||||||||
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タイトル | Dihedral oligomeric complex of GyrA N-terminal fragment, solved by cryoEM in D2 symmetry | ||||||||||||||||||
要素 | DNA gyrase subunit A | ||||||||||||||||||
キーワード | ISOMERASE / topoisomerase / oligomeric complex / gyrase | ||||||||||||||||||
機能・相同性 | 機能・相同性情報 DNA topoisomerase type II (double strand cut, ATP-hydrolyzing) complex / DNA negative supercoiling activity / DNA topoisomerase type II (double strand cut, ATP-hydrolyzing) activity / DNA topoisomerase (ATP-hydrolysing) / DNA topological change / DNA-templated DNA replication / chromosome / DNA binding / ATP binding / cytoplasm 類似検索 - 分子機能 | ||||||||||||||||||
生物種 | Streptococcus pneumoniae G54 (肺炎レンサ球菌) | ||||||||||||||||||
手法 | 電子顕微鏡法 / 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 5.16 Å | ||||||||||||||||||
データ登録者 | Soczek, K.M. / Grant, T. / Rosenthal, P.B. / Mondragon, A. | ||||||||||||||||||
資金援助 | 米国, 英国, 5件
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引用 | ジャーナル: Elife / 年: 2018 タイトル: CryoEM structures of open dimers of gyrase A in complex with DNA illuminate mechanism of strand passage. 著者: Katarzyna M Soczek / Tim Grant / Peter B Rosenthal / Alfonso Mondragón / 要旨: Gyrase is a unique type IIA topoisomerase that uses ATP hydrolysis to maintain the negatively supercoiled state of bacterial DNA. In order to perform its function, gyrase undergoes a sequence of ...Gyrase is a unique type IIA topoisomerase that uses ATP hydrolysis to maintain the negatively supercoiled state of bacterial DNA. In order to perform its function, gyrase undergoes a sequence of conformational changes that consist of concerted gate openings, DNA cleavage, and DNA strand passage events. Structures where the transported DNA molecule (T-segment) is trapped by the A subunit have not been observed. Here we present the cryoEM structures of two oligomeric complexes of open gyrase A dimers and DNA. The protein subunits in these complexes were solved to 4 Å and 5.2 Å resolution. One of the complexes traps a linear DNA molecule, a putative T-segment, which interacts with the open gyrase A dimers in two states, representing steps either prior to or after passage through the DNA-gate. The structures locate the T-segment in important intermediate conformations of the catalytic cycle and provide insights into gyrase-DNA interactions and mechanism. | ||||||||||||||||||
履歴 |
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-構造の表示
ムービー |
ムービービューア |
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構造ビューア | 分子: MolmilJmol/JSmol |
-ダウンロードとリンク
-ダウンロード
PDBx/mmCIF形式 | 6n1q.cif.gz | 747.2 KB | 表示 | PDBx/mmCIF形式 |
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PDB形式 | pdb6n1q.ent.gz | 623.5 KB | 表示 | PDB形式 |
PDBx/mmJSON形式 | 6n1q.json.gz | ツリー表示 | PDBx/mmJSON形式 | |
その他 | その他のダウンロード |
-検証レポート
文書・要旨 | 6n1q_validation.pdf.gz | 998 KB | 表示 | wwPDB検証レポート |
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文書・詳細版 | 6n1q_full_validation.pdf.gz | 1.1 MB | 表示 | |
XML形式データ | 6n1q_validation.xml.gz | 109.8 KB | 表示 | |
CIF形式データ | 6n1q_validation.cif.gz | 163.5 KB | 表示 | |
アーカイブディレクトリ | https://data.pdbj.org/pub/pdb/validation_reports/n1/6n1q ftp://data.pdbj.org/pub/pdb/validation_reports/n1/6n1q | HTTPS FTP |
-関連構造データ
-リンク
-集合体
登録構造単位 |
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1 |
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-要素
#1: タンパク質 | 分子量: 57977.578 Da / 分子数: 8 / 断片: UNP residues 20-506 / 由来タイプ: 組換発現 由来: (組換発現) Streptococcus pneumoniae G54 (肺炎レンサ球菌) 株: G / 遺伝子: gyrA_1, gyrA, ERS409327_01712 / プラスミド: pMCSG7 / 発現宿主: Escherichia coli BL21(DE3) (大腸菌) 参照: UniProt: A0A0Y2BJX7, UniProt: Q8DPM2*PLUS, EC: 5.99.1.3 |
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-実験情報
-実験
実験 | 手法: 電子顕微鏡法 |
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EM実験 | 試料の集合状態: PARTICLE / 3次元再構成法: 単粒子再構成法 |
-試料調製
構成要素 | 名称: Complex of DNA Gyrase A subunit in D2 symmetry / タイプ: COMPLEX / Entity ID: all / 由来: RECOMBINANT | ||||||||||||||||||||
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分子量 | 値: 0.46 MDa / 実験値: NO | ||||||||||||||||||||
由来(天然) | 生物種: Streptococcus pneumoniae G54 (肺炎レンサ球菌) | ||||||||||||||||||||
由来(組換発現) | 生物種: Escherichia coli BL21(DE3) (大腸菌) / プラスミド: pMCSG7 | ||||||||||||||||||||
緩衝液 | pH: 7.5 | ||||||||||||||||||||
緩衝液成分 |
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試料 | 包埋: NO / シャドウイング: NO / 染色: NO / 凍結: YES | ||||||||||||||||||||
試料支持 | グリッドの材料: COPPER / グリッドのサイズ: 400 divisions/in. / グリッドのタイプ: C-flat-1.2/1.3 4C | ||||||||||||||||||||
急速凍結 | 装置: FEI VITROBOT MARK IV / 凍結剤: ETHANE / 湿度: 100 % / 凍結前の試料温度: 277 K |
-電子顕微鏡撮影
顕微鏡 | モデル: JEOL 3200FS |
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電子銃 | 電子線源: FIELD EMISSION GUN / 加速電圧: 300 kV / 照射モード: OTHER |
電子レンズ | モード: BRIGHT FIELD / 倍率(公称値): 30000 X / 倍率(補正後): 40323 X / Calibrated defocus min: 1000 nm / 最大 デフォーカス(補正後): 3000 nm / Cs: 2 mm / C2レンズ絞り径: 50 µm / アライメント法: COMA FREE |
試料ホルダ | 凍結剤: NITROGEN 試料ホルダーモデル: GATAN 626 SINGLE TILT LIQUID NITROGEN CRYO TRANSFER HOLDER 最高温度: 100 K / 最低温度: 100 K |
撮影 | 平均露光時間: 12 sec. / 電子線照射量: 62 e/Å2 / 検出モード: COUNTING フィルム・検出器のモデル: GATAN K2 SUMMIT (4k x 4k) 実像数: 718 |
電子光学装置 | エネルギーフィルター名称: In-column Omega Filter エネルギーフィルタースリット幅: 20 eV |
画像スキャン | サンプリングサイズ: 5 µm / 横: 3710 / 縦: 3838 / 動画フレーム数/画像: 40 / 利用したフレーム数/画像: 1-40 |
-解析
EMソフトウェア |
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CTF補正 | タイプ: PHASE FLIPPING AND AMPLITUDE CORRECTION | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
粒子像の選択 | 選択した粒子像数: 387297 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
対称性 | 点対称性: D2 (2回x2回 2面回転対称) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
3次元再構成 | 解像度: 5.16 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / 粒子像の数: 112656 / アルゴリズム: FOURIER SPACE / クラス平均像の数: 1 / 対称性のタイプ: POINT | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
原子モデル構築 | プロトコル: FLEXIBLE FIT / 空間: REAL / Target criteria: correlation coefficient | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
原子モデル構築 | PDB-ID: 4Z2C PDB chain-ID: A / Accession code: 4Z2C / Pdb chain residue range: 2-486 / Source name: PDB / タイプ: experimental model |