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-基本情報
登録情報 | データベース: EMDB / ID: EMD-15923 | |||||||||
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タイトル | Human replisome prepared in the presence of a fork DNA substrate containing a 60 nucleotide lagging strand. Off DNA. | |||||||||
マップデータ | Human replisome prepared in the presence of a fork DNA substrate containing a 60 nucleotide lagging strand. Off DNA. Locally filtered | |||||||||
試料 |
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キーワード | human / replication / priming / polymerase | |||||||||
生物種 | Homo sapiens (ヒト) | |||||||||
手法 | 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 3.6 Å | |||||||||
データ登録者 | Jones ML / Yeeles JTP | |||||||||
資金援助 | 英国, 1件
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引用 | ジャーナル: Mol Cell / 年: 2023 タイトル: How Pol α-primase is targeted to replisomes to prime eukaryotic DNA replication. 著者: Morgan L Jones / Valentina Aria / Yasemin Baris / Joseph T P Yeeles / 要旨: During eukaryotic DNA replication, Pol α-primase generates primers at replication origins to start leading-strand synthesis and every few hundred nucleotides during discontinuous lagging-strand ...During eukaryotic DNA replication, Pol α-primase generates primers at replication origins to start leading-strand synthesis and every few hundred nucleotides during discontinuous lagging-strand replication. How Pol α-primase is targeted to replication forks to prime DNA synthesis is not fully understood. Here, by determining cryoelectron microscopy (cryo-EM) structures of budding yeast and human replisomes containing Pol α-primase, we reveal a conserved mechanism for the coordination of priming by the replisome. Pol α-primase binds directly to the leading edge of the CMG (CDC45-MCM-GINS) replicative helicase via a complex interaction network. The non-catalytic PRIM2/Pri2 subunit forms two interfaces with CMG that are critical for in vitro DNA replication and yeast cell growth. These interactions position the primase catalytic subunit PRIM1/Pri1 directly above the exit channel for lagging-strand template single-stranded DNA (ssDNA), revealing why priming occurs efficiently only on the lagging-strand template and elucidating a mechanism for Pol α-primase to overcome competition from RPA to initiate primer synthesis. | |||||||||
履歴 |
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-構造の表示
添付画像 |
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-ダウンロードとリンク
-EMDBアーカイブ
マップデータ | emd_15923.map.gz | 7.8 MB | EMDBマップデータ形式 | |
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ヘッダ (付随情報) | emd-15923-v30.xml emd-15923.xml | 19.3 KB 19.3 KB | 表示 表示 | EMDBヘッダ |
画像 | emd_15923.png | 120.4 KB | ||
その他 | emd_15923_additional_1.map.gz emd_15923_additional_2.map.gz emd_15923_half_map_1.map.gz emd_15923_half_map_2.map.gz | 118.1 MB 63 MB 116 MB 116 MB | ||
アーカイブディレクトリ | http://ftp.pdbj.org/pub/emdb/structures/EMD-15923 ftp://ftp.pdbj.org/pub/emdb/structures/EMD-15923 | HTTPS FTP |
-検証レポート
文書・要旨 | emd_15923_validation.pdf.gz | 857.1 KB | 表示 | EMDB検証レポート |
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文書・詳細版 | emd_15923_full_validation.pdf.gz | 856.6 KB | 表示 | |
XML形式データ | emd_15923_validation.xml.gz | 14 KB | 表示 | |
CIF形式データ | emd_15923_validation.cif.gz | 16.5 KB | 表示 | |
アーカイブディレクトリ | https://ftp.pdbj.org/pub/emdb/validation_reports/EMD-15923 ftp://ftp.pdbj.org/pub/emdb/validation_reports/EMD-15923 | HTTPS FTP |
-関連構造データ
-リンク
EMDBのページ | EMDB (EBI/PDBe) / EMDataResource |
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-マップ
ファイル | ダウンロード / ファイル: emd_15923.map.gz / 形式: CCP4 / 大きさ: 125 MB / タイプ: IMAGE STORED AS FLOATING POINT NUMBER (4 BYTES) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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注釈 | Human replisome prepared in the presence of a fork DNA substrate containing a 60 nucleotide lagging strand. Off DNA. Locally filtered | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
投影像・断面図 | 画像のコントロール
画像は Spider により作成 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
ボクセルのサイズ | X=Y=Z: 1.07 Å | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
密度 |
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対称性 | 空間群: 1 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
詳細 | EMDB XML:
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-添付データ
-追加マップ: Human replisome prepared in the presence of a...
ファイル | emd_15923_additional_1.map | ||||||||||||
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注釈 | Human replisome prepared in the presence of a fork DNA substrate containing a 60 nucleotide lagging strand. Off DNA. Sharpened | ||||||||||||
投影像・断面図 |
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密度ヒストグラム |
-追加マップ: Human replisome prepared in the presence of a...
ファイル | emd_15923_additional_2.map | ||||||||||||
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注釈 | Human replisome prepared in the presence of a fork DNA substrate containing a 60 nucleotide lagging strand. Off DNA. Unsharpened | ||||||||||||
投影像・断面図 |
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密度ヒストグラム |
-ハーフマップ: Human replisome prepared in the presence of a...
ファイル | emd_15923_half_map_1.map | ||||||||||||
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注釈 | Human replisome prepared in the presence of a fork DNA substrate containing a 60 nucleotide lagging strand. Off DNA. Half map B | ||||||||||||
投影像・断面図 |
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密度ヒストグラム |
-ハーフマップ: Human replisome prepared in the presence of a...
ファイル | emd_15923_half_map_2.map | ||||||||||||
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注釈 | Human replisome prepared in the presence of a fork DNA substrate containing a 60 nucleotide lagging strand. Off DNA. Half map A | ||||||||||||
投影像・断面図 |
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密度ヒストグラム |
-試料の構成要素
-全体 : Human replisome bound by pol alpha, engaged on a fork DNA substra...
全体 | 名称: Human replisome bound by pol alpha, engaged on a fork DNA substrate with a 60 nucleotide lagging strand. |
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要素 |
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-超分子 #1: Human replisome bound by pol alpha, engaged on a fork DNA substra...
超分子 | 名称: Human replisome bound by pol alpha, engaged on a fork DNA substrate with a 60 nucleotide lagging strand. タイプ: complex / ID: 1 / 親要素: 0 / 含まれる分子: #1-#21 |
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由来(天然) | 生物種: Homo sapiens (ヒト) |
-実験情報
-構造解析
手法 | クライオ電子顕微鏡法 |
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解析 | 単粒子再構成法 |
試料の集合状態 | particle |
-試料調製
緩衝液 | pH: 7.6 |
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凍結 | 凍結剤: ETHANE |
-電子顕微鏡法
顕微鏡 | FEI TITAN KRIOS |
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撮影 | フィルム・検出器のモデル: GATAN K3 BIOQUANTUM (6k x 4k) 平均電子線量: 37.8 e/Å2 |
電子線 | 加速電圧: 300 kV / 電子線源: FIELD EMISSION GUN |
電子光学系 | 照射モード: FLOOD BEAM / 撮影モード: BRIGHT FIELD / 最大 デフォーカス(公称値): 3.0 µm / 最小 デフォーカス(公称値): 1.5 µm |
実験機器 | モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company |
-画像解析
初期モデル | モデルのタイプ: INSILICO MODEL |
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最終 再構成 | 解像度のタイプ: BY AUTHOR / 解像度: 3.6 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / 使用した粒子像数: 74940 |
初期 角度割当 | タイプ: ANGULAR RECONSTITUTION |
最終 角度割当 | タイプ: ANGULAR RECONSTITUTION |