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-基本情報
登録情報 | データベース: EMDB / ID: EMD-10659 | ||||||||||||
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タイトル | Influenza C virus polymerase complex without chicken ANP32A - Subclass 2 | ||||||||||||
マップデータ | LocScale map | ||||||||||||
試料 |
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キーワード | Influenza Polymerase / ANP32 / replication / RNA-dependent RNA polymerase / VIRAL PROTEIN | ||||||||||||
機能・相同性 | 機能・相同性情報 cap snatching / viral transcription / symbiont-mediated suppression of host mRNA transcription via inhibition of RNA polymerase II activity / 7-methylguanosine mRNA capping / virion component / endonuclease activity / host cell cytoplasm / 加水分解酵素; エステル加水分解酵素 / RNA-directed RNA polymerase / viral translational frameshifting ...cap snatching / viral transcription / symbiont-mediated suppression of host mRNA transcription via inhibition of RNA polymerase II activity / 7-methylguanosine mRNA capping / virion component / endonuclease activity / host cell cytoplasm / 加水分解酵素; エステル加水分解酵素 / RNA-directed RNA polymerase / viral translational frameshifting / viral RNA genome replication / RNA-dependent RNA polymerase activity / nucleotide binding / DNA-templated transcription / host cell nucleus / RNA binding / metal ion binding 類似検索 - 分子機能 | ||||||||||||
生物種 | Influenza C virus (C/Johannesburg/1/66) (インフルエンザウイルス) / Synthetic construct (人工物) / synthetic construct (人工物) / Influenza C virus (strain C/Johannesburg/1/1966) (インフルエンザウイルス) | ||||||||||||
手法 | 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 3.4 Å | ||||||||||||
データ登録者 | Keown JR / Carrique L | ||||||||||||
資金援助 | 英国, 3件
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引用 | ジャーナル: Nature / 年: 2020 タイトル: Host ANP32A mediates the assembly of the influenza virus replicase. 著者: Loïc Carrique / Haitian Fan / Alexander P Walker / Jeremy R Keown / Jane Sharps / Ecco Staller / Wendy S Barclay / Ervin Fodor / Jonathan M Grimes / 要旨: Aquatic birds represent a vast reservoir from which new pandemic influenza A viruses can emerge. Influenza viruses contain a negative-sense segmented RNA genome that is transcribed and replicated by ...Aquatic birds represent a vast reservoir from which new pandemic influenza A viruses can emerge. Influenza viruses contain a negative-sense segmented RNA genome that is transcribed and replicated by the viral heterotrimeric RNA polymerase (FluPol) in the context of viral ribonucleoprotein complexes. RNA polymerases of avian influenza A viruses (FluPolA) replicate viral RNA inefficiently in human cells because of species-specific differences in acidic nuclear phosphoprotein 32 (ANP32), a family of essential host proteins for FluPol activity. Host-adaptive mutations, particularly a glutamic-acid-to-lysine mutation at amino acid residue 627 (E627K) in the 627 domain of the PB2 subunit, enable avian FluPolA to overcome this restriction and efficiently replicate viral RNA in the presence of human ANP32 proteins. However, the molecular mechanisms of genome replication and the interplay with ANP32 proteins remain largely unknown. Here we report cryo-electron microscopy structures of influenza C virus polymerase (FluPolC) in complex with human and chicken ANP32A. In both structures, two FluPolC molecules form an asymmetric dimer bridged by the N-terminal leucine-rich repeat domain of ANP32A. The C-terminal low-complexity acidic region of ANP32A inserts between the two juxtaposed PB2 627 domains of the asymmetric FluPolA dimer, suggesting a mechanism for how the adaptive PB2(E627K) mutation enables the replication of viral RNA in mammalian hosts. We propose that this complex represents a replication platform for the viral RNA genome, in which one of the FluPol molecules acts as a replicase while the other initiates the assembly of the nascent replication product into a viral ribonucleoprotein complex. | ||||||||||||
履歴 |
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-構造の表示
ムービー |
ムービービューア |
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構造ビューア | EMマップ: SurfViewMolmilJmol/JSmol |
添付画像 |
-ダウンロードとリンク
-EMDBアーカイブ
マップデータ | emd_10659.map.gz | 40 MB | EMDBマップデータ形式 | |
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ヘッダ (付随情報) | emd-10659-v30.xml emd-10659.xml | 27.6 KB 27.6 KB | 表示 表示 | EMDBヘッダ |
FSC (解像度算出) | emd_10659_fsc.xml | 9.9 KB | 表示 | FSCデータファイル |
画像 | emd_10659.png | 152.2 KB | ||
Filedesc metadata | emd-10659.cif.gz | 8 KB | ||
その他 | emd_10659_additional_1.map.gz emd_10659_half_map_1.map.gz emd_10659_half_map_2.map.gz | 48.5 MB 65.3 MB 65.3 MB | ||
アーカイブディレクトリ | http://ftp.pdbj.org/pub/emdb/structures/EMD-10659 ftp://ftp.pdbj.org/pub/emdb/structures/EMD-10659 | HTTPS FTP |
-検証レポート
文書・要旨 | emd_10659_validation.pdf.gz | 766.6 KB | 表示 | EMDB検証レポート |
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文書・詳細版 | emd_10659_full_validation.pdf.gz | 766.1 KB | 表示 | |
XML形式データ | emd_10659_validation.xml.gz | 17.1 KB | 表示 | |
CIF形式データ | emd_10659_validation.cif.gz | 22.5 KB | 表示 | |
アーカイブディレクトリ | https://ftp.pdbj.org/pub/emdb/validation_reports/EMD-10659 ftp://ftp.pdbj.org/pub/emdb/validation_reports/EMD-10659 | HTTPS FTP |
-関連構造データ
-リンク
EMDBのページ | EMDB (EBI/PDBe) / EMDataResource |
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-マップ
ファイル | ダウンロード / ファイル: emd_10659.map.gz / 形式: CCP4 / 大きさ: 83.7 MB / タイプ: IMAGE STORED AS FLOATING POINT NUMBER (4 BYTES) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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注釈 | LocScale map | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
投影像・断面図 | 画像のコントロール
画像は Spider により作成 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
ボクセルのサイズ | X=Y=Z: 1.37 Å | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
密度 |
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対称性 | 空間群: 1 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
詳細 | EMDB XML:
CCP4マップ ヘッダ情報:
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-添付データ
-追加マップ: RELION 3.1 locally filtered map
ファイル | emd_10659_additional_1.map | ||||||||||||
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注釈 | RELION 3.1 locally filtered map | ||||||||||||
投影像・断面図 |
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密度ヒストグラム |
-ハーフマップ: #2
ファイル | emd_10659_half_map_1.map | ||||||||||||
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投影像・断面図 |
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密度ヒストグラム |
-ハーフマップ: #1
ファイル | emd_10659_half_map_2.map | ||||||||||||
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投影像・断面図 |
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密度ヒストグラム |
-試料の構成要素
-全体 : Influenza C virus polymerase in complex with chicken ANP32A
全体 | 名称: Influenza C virus polymerase in complex with chicken ANP32A |
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要素 |
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-超分子 #1: Influenza C virus polymerase in complex with chicken ANP32A
超分子 | 名称: Influenza C virus polymerase in complex with chicken ANP32A タイプ: complex / ID: 1 / 親要素: 0 / 含まれる分子: all |
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由来(天然) | 生物種: Influenza C virus (C/Johannesburg/1/66) (インフルエンザウイルス) |
-超分子 #2: Influenza C virus polymerases
超分子 | 名称: Influenza C virus polymerases / タイプ: complex / ID: 2 / 親要素: 1 / 含まれる分子: #2-#4 |
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由来(天然) | 生物種: Influenza C virus (C/Johannesburg/1/66) (インフルエンザウイルス) |
-超分子 #4: Influenza viral RNA (vRNA) promoter 47mer
超分子 | 名称: Influenza viral RNA (vRNA) promoter 47mer / タイプ: complex / ID: 4 / 親要素: 1 / 含まれる分子: #1 / 詳細: Synthetic RNA |
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由来(天然) | 生物種: Synthetic construct (人工物) |
-分子 #1: RNA (5'-R(*AP*GP*UP*AP*GP*AP*AP*AP*CP*AP*AP*GP*GP*GP*CP*CP*CP*UP*...
分子 | 名称: RNA (5'-R(*AP*GP*UP*AP*GP*AP*AP*AP*CP*AP*AP*GP*GP*GP*CP*CP*CP*UP*GP*C)-3') タイプ: rna / ID: 1 / コピー数: 1 |
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由来(天然) | 生物種: synthetic construct (人工物) |
分子量 | 理論値: 14.901737 KDa |
配列 | 文字列: AGUAGAAACA AGGGUAUUUU UCUUUACUAG UCUACCCUGC UUUUGCU |
-分子 #2: Polymerase acidic protein
分子 | 名称: Polymerase acidic protein / タイプ: protein_or_peptide / ID: 2 / コピー数: 2 / 光学異性体: LEVO EC番号: 加水分解酵素; エステル加水分解酵素 |
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由来(天然) | 生物種: Influenza C virus (strain C/Johannesburg/1/1966) (インフルエンザウイルス) 株: C/Johannesburg/1/1966 |
分子量 | 理論値: 82.025531 KDa |
組換発現 | 生物種: Spodoptera frugiperda (ツマジロクサヨトウ) |
配列 | 文字列: MSKTFAEIAE AFLEPEAVRI AKEAVEEYGD HERKIIQIGI HFQVCCMFCD EYLSTNGSDR FVLIEGRKRG TAVSLQNELC KSYDLEPLP FLCDIFDREE KQFVEIGITR KADDSYFQSK FGKLGNSCKI FVFSYDGRLD KNCEGPMEEQ KLRIFSFLAT A ADFLRKEN ...文字列: MSKTFAEIAE AFLEPEAVRI AKEAVEEYGD HERKIIQIGI HFQVCCMFCD EYLSTNGSDR FVLIEGRKRG TAVSLQNELC KSYDLEPLP FLCDIFDREE KQFVEIGITR KADDSYFQSK FGKLGNSCKI FVFSYDGRLD KNCEGPMEEQ KLRIFSFLAT A ADFLRKEN MFNEIFLPDN EETIIEMKKG KTFLELRDES VPLPFQTYEQ MKDYCEKFKG NPRELASKVS QMQSNIKLPI KH YEQNKFR QIRLPKGPMA PYTHKFLMEE AWMFTKISDP ERSRAGEILI DFFKKGNLSA IRPKDKPLQG KYPIHYKNLW NQI KAAIAD RTMVINENDH SEFLGGIGRA SKKIPEISLT QDVITTEGLK QSENKLPEPR SFPRWFNAEW MWAIKDSDLT GWVP MAEYP PADNELEDYA EHLNKTMEGV LQGTNCAREM GKCILTVGAL MTECRLFPGK IKVVPIYARS KERKSMQEGL PVPSE MDCL FGICVKSKSH LNKDDGMYTI ITFEFSIREP NLEKHQKYTV FEAGHTTVRM KKGESVIGRE VPLYLYCRTT ALSKIK NDW LSKARRCFIT TMDTVETICL RESAKAEENL VEKTLNEKQM WIGKKNGELI AQPLREALRV QLVQQFYFCI YNDSQLE GF CNEQKKILMA LEGDKKNKSS FGFNPEGLLE KIEECLINNP MCLFMAQRLN ELVIEASKRG AKFFKTD UniProtKB: Polymerase acidic protein |
-分子 #3: RNA-directed RNA polymerase catalytic subunit
分子 | 名称: RNA-directed RNA polymerase catalytic subunit / タイプ: protein_or_peptide / ID: 3 / コピー数: 2 / 光学異性体: LEVO / EC番号: RNA-directed RNA polymerase |
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由来(天然) | 生物種: Influenza C virus (strain C/Johannesburg/1/1966) (インフルエンザウイルス) 株: C/Johannesburg/1/1966 |
分子量 | 理論値: 86.145945 KDa |
組換発現 | 生物種: Spodoptera frugiperda (ツマジロクサヨトウ) |
配列 | 文字列: MEINPYLMFL NNDVTSLIST TYPYTGPPPM SHGSSTKYTL ETIKRTYDYS RTSVEKTSKV FNIPRRKFCN CLEDKDELVK PTGNVDISS LLGLAEMMEK RMGEGFFKHC VMEAETEILK MHFSRLTEGR QTYDWTSERN MPAATALQLT VDAIKETEGP F KGTTMLEY ...文字列: MEINPYLMFL NNDVTSLIST TYPYTGPPPM SHGSSTKYTL ETIKRTYDYS RTSVEKTSKV FNIPRRKFCN CLEDKDELVK PTGNVDISS LLGLAEMMEK RMGEGFFKHC VMEAETEILK MHFSRLTEGR QTYDWTSERN MPAATALQLT VDAIKETEGP F KGTTMLEY CNKMIEMLDW KEIKFKKVKT VVRREKDKRS GKEIKTKVPV MGIDSIKHDE FLIRALTINT MAKDGERGKL QR RAIATPG MIVRPFSKIV ETVAQKICEK LKESGLPVGG NEKKAKLKTT VTSLNARMNS DQFAVNITGD NSKWNECQQP EAY LALLAY ITKDSSDLMK DLCSVAPVLF CNKFVKLGQG IRLSNKRKTK EVIIKAEKMG KYKNLMREEY KNLFEPLEKY IQKD VCFLP GGMLMGMFNM LSTVLGVSTL CYMDEELKAK GCFWTGLQSS DDFVLFAVAS NWSNIHWTIR RFNAVCKLIG INMSL EKSY GSLPELFEFT SMFFDGEFVS NLAMELPAFT TAGVNEGVDF TAAMSIIKTN MINNSLSPST ALMALRICLQ EFRATY RVH PWDSRVKGGR MKIINEFIKT IENKDGLLIA DGGKLMNNIS TLHIPEEVLK FEKMDEQYRN RVFNPKNPFT NFDKTID IF RAHGPIRVEE NEAVVSTHSF RTRANRTLLN TDMRAMMAEE KRYQMVCDMF KSVFESADIN PPIGAMSIGE AIEEKLLE R AKMKRDIGAI EDSEYEEIKD IIRDAKKARL ESR UniProtKB: RNA-directed RNA polymerase catalytic subunit |
-分子 #4: Polymerase basic protein 2
分子 | 名称: Polymerase basic protein 2 / タイプ: protein_or_peptide / ID: 4 / コピー数: 2 / 光学異性体: LEVO |
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由来(天然) | 生物種: Influenza C virus (strain C/Johannesburg/1/1966) (インフルエンザウイルス) 株: C/Johannesburg/1/1966 |
分子量 | 理論値: 87.949422 KDa |
組換発現 | 生物種: Spodoptera frugiperda (ツマジロクサヨトウ) |
配列 | 文字列: MSLLLTIAKE YKRLCQDAKA AQMMTVGTVS NYTTFKKWTT SRKEKNPSLR MRWAMSSKFP IIANKRMLEE AQIPKEHNNV ALWEDTEDV SKRDHVLASA SCINYWNFCG PCVNNSEVIK EVYKSRFGRL ERRKEIMWKE LRFTLVDRQR RRVDTQPVEQ R LRTGEIKD ...文字列: MSLLLTIAKE YKRLCQDAKA AQMMTVGTVS NYTTFKKWTT SRKEKNPSLR MRWAMSSKFP IIANKRMLEE AQIPKEHNNV ALWEDTEDV SKRDHVLASA SCINYWNFCG PCVNNSEVIK EVYKSRFGRL ERRKEIMWKE LRFTLVDRQR RRVDTQPVEQ R LRTGEIKD LQMWTLFEDE APLASKFILD NYGLVKEMRS KFANKPLNKE VVAHMLEKQF NPESRFLPVF GAIRPERMEL IH ALGGETW IQEANTAGIS NVDQRKNDIR AVCRKVCLAA NASIMNAKSK LVEYIKSTSM RIGETERKLE ELILETDDVS PEV TLCKSA LGGQLGKTLS FGPMLLKKIS GSGVKVKDTV YIQGVRAVQF EYWSEQEEFY GEYKSATALF SRKERSLEWI TIGG GINED RKRLLAMCMI FCRDGDYFKD APATITMADL STKLGREIPY QYVMMNWIQK SEDNLEALLY SRGIVETNPG KMGSS MGID GSKRAIKSLR AVTIQSGKID MPESKEKIHL ELSDNLEAFD SSGRIVATIL DLPSDKKVTF QDVSFQHPDL AVLRDE KTA ITKGYEALIK RLGTGDNDIP SLIAKKDYLS LYNLPEVKLM APLIRPNRKG VYSRVARKLV STQVTTGHYS LHELIKV LP FTYFAPKQGM FEGRLFFSND SFVEPGVNNN VFSWSKADSS KIYCHGIAIR VPLVVGDEHM DTSLALLEGF SVCENDPR A PMVTRQDLID VGFGQKVRLF VGQGSVRTFK RTASQRAASS DVNKNVKKIK MSN UniProtKB: Polymerase basic protein 2 |
-実験情報
-構造解析
手法 | クライオ電子顕微鏡法 |
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解析 | 単粒子再構成法 |
試料の集合状態 | particle |
-試料調製
濃度 | 0.28 mg/mL | ||||||||||||
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緩衝液 | pH: 7.5 構成要素:
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グリッド | モデル: Quantifoil R2/1 / 材質: GOLD / メッシュ: 200 / 前処理 - タイプ: GLOW DISCHARGE / 前処理 - 時間: 120 sec. / 前処理 - 雰囲気: AIR / 前処理 - 気圧: 101.325 kPa | ||||||||||||
凍結 | 凍結剤: ETHANE / チャンバー内湿度: 100 % / チャンバー内温度: 294 K / 装置: FEI VITROBOT MARK IV |
-電子顕微鏡法
顕微鏡 | FEI TITAN KRIOS |
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特殊光学系 | エネルギーフィルター - 名称: GIF Bioquantum / エネルギーフィルター - スリット幅: 20 eV |
撮影 | フィルム・検出器のモデル: GATAN K2 SUMMIT (4k x 4k) 検出モード: COUNTING / デジタル化 - 画像ごとのフレーム数: 1-44 / 撮影したグリッド数: 1 / 実像数: 3678 / 平均露光時間: 11.0 sec. / 平均電子線量: 38.8 e/Å2 詳細: Single specimen tilt of 30 degrees for around two third of the images |
電子線 | 加速電圧: 300 kV / 電子線源: FIELD EMISSION GUN |
電子光学系 | C2レンズ絞り径: 50.0 µm / 照射モード: FLOOD BEAM / 撮影モード: BRIGHT FIELD / Cs: 2.7 mm / 最大 デフォーカス(公称値): 3.5 µm / 最小 デフォーカス(公称値): 2.0 µm / 倍率(公称値): 105000 |
試料ステージ | 試料ホルダーモデル: FEI TITAN KRIOS AUTOGRID HOLDER ホルダー冷却材: NITROGEN |
実験機器 | モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company |
+画像解析
-原子モデル構築 1
精密化 | 空間: REAL / プロトコル: RIGID BODY FIT |
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得られたモデル | PDB-6xzd: |