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-基本情報
登録情報 | データベース: PDB / ID: 8ois | ||||||||||||
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タイトル | 28S human mitochondrial small ribosomal subunit with mtRF1 and P-site tRNA | ||||||||||||
要素 |
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キーワード | RIBOSOME / human mitochondrial ribosome / release factor mtRF1 / non-canonical stop codon | ||||||||||||
機能・相同性 | 機能・相同性情報 translation release factor activity / mitochondrial ribosome binding / mitochondrial translational termination / mitochondrial ribosome assembly / Mitochondrial translation elongation / Mitochondrial translation termination / Mitochondrial translation initiation / translation release factor activity, codon specific / positive regulation of mitochondrial translation / mitochondrial large ribosomal subunit ...translation release factor activity / mitochondrial ribosome binding / mitochondrial translational termination / mitochondrial ribosome assembly / Mitochondrial translation elongation / Mitochondrial translation termination / Mitochondrial translation initiation / translation release factor activity, codon specific / positive regulation of mitochondrial translation / mitochondrial large ribosomal subunit / negative regulation of mitotic nuclear division / mitochondrial ribosome / mitochondrial small ribosomal subunit / mitochondrial translation / positive regulation of proteolysis / ribosomal small subunit binding / Mitochondrial protein degradation / apoptotic signaling pathway / fibrillar center / small ribosomal subunit rRNA binding / cell junction / regulation of translation / ribosomal small subunit assembly / small ribosomal subunit / nuclear membrane / cell population proliferation / tRNA binding / mitochondrial inner membrane / rRNA binding / ribosome / structural constituent of ribosome / mitochondrial matrix / translation / protein domain specific binding / intracellular membrane-bounded organelle / mRNA binding / synapse / nucleolus / GTP binding / mitochondrion / RNA binding / nucleoplasm / nucleus / plasma membrane / cytosol / cytoplasm 類似検索 - 分子機能 | ||||||||||||
生物種 | Homo sapiens (ヒト) | ||||||||||||
手法 | 電子顕微鏡法 / 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 3 Å | ||||||||||||
データ登録者 | Saurer, M. / Leibundgut, M. / Scaiola, A. / Schoenhut, T. / Ban, N. | ||||||||||||
資金援助 | スイス, European Union, 3件
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引用 | ジャーナル: Science / 年: 2023 タイトル: Molecular basis of translation termination at noncanonical stop codons in human mitochondria. 著者: Martin Saurer / Marc Leibundgut / Hima Priyanka Nadimpalli / Alain Scaiola / Tanja Schönhut / Richard G Lee / Stefan J Siira / Oliver Rackham / René Dreos / Tea Lenarčič / Eva Kummer / ...著者: Martin Saurer / Marc Leibundgut / Hima Priyanka Nadimpalli / Alain Scaiola / Tanja Schönhut / Richard G Lee / Stefan J Siira / Oliver Rackham / René Dreos / Tea Lenarčič / Eva Kummer / David Gatfield / Aleksandra Filipovska / Nenad Ban / 要旨: The genetic code that specifies the identity of amino acids incorporated into proteins during protein synthesis is almost universally conserved. Mitochondrial genomes feature deviations from the ...The genetic code that specifies the identity of amino acids incorporated into proteins during protein synthesis is almost universally conserved. Mitochondrial genomes feature deviations from the standard genetic code, including the reassignment of two arginine codons to stop codons. The protein required for translation termination at these noncanonical stop codons to release the newly synthesized polypeptides is not currently known. In this study, we used gene editing and ribosomal profiling in combination with cryo-electron microscopy to establish that mitochondrial release factor 1 (mtRF1) detects noncanonical stop codons in human mitochondria by a previously unknown mechanism of codon recognition. We discovered that binding of mtRF1 to the decoding center of the ribosome stabilizes a highly unusual conformation in the messenger RNA in which the ribosomal RNA participates in specific recognition of the noncanonical stop codons. | ||||||||||||
履歴 |
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-構造の表示
構造ビューア | 分子: MolmilJmol/JSmol |
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-ダウンロードとリンク
-ダウンロード
PDBx/mmCIF形式 | 8ois.cif.gz | 1.8 MB | 表示 | PDBx/mmCIF形式 |
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PDB形式 | pdb8ois.ent.gz | 表示 | PDB形式 | |
PDBx/mmJSON形式 | 8ois.json.gz | ツリー表示 | PDBx/mmJSON形式 | |
その他 | その他のダウンロード |
-検証レポート
文書・要旨 | 8ois_validation.pdf.gz | 765.2 KB | 表示 | wwPDB検証レポート |
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文書・詳細版 | 8ois_full_validation.pdf.gz | 778.7 KB | 表示 | |
XML形式データ | 8ois_validation.xml.gz | 131.6 KB | 表示 | |
CIF形式データ | 8ois_validation.cif.gz | 233.6 KB | 表示 | |
アーカイブディレクトリ | https://data.pdbj.org/pub/pdb/validation_reports/oi/8ois ftp://data.pdbj.org/pub/pdb/validation_reports/oi/8ois | HTTPS FTP |
-関連構造データ
関連構造データ | 16898MC 8oinC 8oipC 8oiqC 8oirC 8oitC C: 同じ文献を引用 (文献) M: このデータのモデリングに利用したマップデータ |
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類似構造データ | 類似検索 - 機能・相同性F&H 検索 |
-リンク
-集合体
登録構造単位 |
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1 |
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-要素
-39S ribosomal protein ... , 2種, 2分子 BXBd
#1: タンパク質 | 分子量: 33584.996 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Homo sapiens (ヒト) / 細胞株: HEK293 EBNA / 参照: UniProt: P49406 |
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#2: タンパク質 | 分子量: 15160.433 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Homo sapiens (ヒト) / 細胞株: HEK293 EBNA / 参照: UniProt: Q7Z7F7 |
-RNA鎖 , 3種, 3分子 AAAGAI
#3: RNA鎖 | 分子量: 306547.531 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 詳細: NCBI Reference Sequence: NC_012920.1 + one C at 3'-end (encoded but not annotated as part of the sequence), a A103>G and A791>G as found in e.g. GenBank: OM714795.1 由来: (天然) Homo sapiens (ヒト) / 細胞株: HEK293 EBNA / 参照: GenBank: OM714795.1 |
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#9: RNA鎖 | 分子量: 22692.508 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 詳細: NCBI Reference Sequence: NC_012920.1 + aminoacylated CCA-end 由来: (天然) Homo sapiens (ヒト) / 細胞株: HEK293 EBNA / 参照: GenBank: NC_012920.1 |
#11: RNA鎖 | 分子量: 7329.883 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 詳細: Sequence as observed in the cryo-EM density map. / 由来: (天然) Homo sapiens (ヒト) / 細胞株: HEK293 EBNA |
+28S ribosomal protein ... , 27種, 27分子 ABACAEAFAHAJAKALAMANAOAPAQARASATAUAVAWAXAYAZAbAdAgAiAj
-タンパク質 , 4種, 4分子 ADAaAcAe
#6: タンパク質 | 分子量: 22395.326 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Homo sapiens (ヒト) / 細胞株: HEK293 EBNA / 参照: UniProt: Q9NWT8 |
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#29: タンパク質 | 分子量: 56258.391 Da / 分子数: 1 / Mutation: 311GGQ313 > AAQ / 由来タイプ: 天然 詳細: Human mitochondrial release factor 1 (mtRF1), containing a 311GGQ>AAQ mutation, a C-terminal linker (GGSGGSGGSGGSGGSGG) and a 3xFLAG-tag (DYKDHDGDYKDHDIDYKDDDDK), expressed from a pcDNA3.1(+) ...詳細: Human mitochondrial release factor 1 (mtRF1), containing a 311GGQ>AAQ mutation, a C-terminal linker (GGSGGSGGSGGSGGSGG) and a 3xFLAG-tag (DYKDHDGDYKDHDIDYKDDDDK), expressed from a pcDNA3.1(+) plasmid in HEK293 EBNA cells.,Human mitochondrial release factor 1 (mtRF1), containing a 311GGQ>AAQ mutation, a C-terminal linker (GGSGGSGGSGGSGGSGG) and a 3xFLAG-tag (DYKDHDGDYKDHDIDYKDDDDK), expressed from a pcDNA3.1(+) plasmid in HEK293 EBNA cells. 由来: (天然) Homo sapiens (ヒト) / 細胞株: HEK293 EBNA / 参照: UniProt: O75570 |
#31: タンパク質 | 分子量: 13540.856 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Homo sapiens (ヒト) / 細胞株: HEK293 EBNA / 参照: UniProt: Q96BP2 |
#33: タンパク質 | 分子量: 78648.547 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Homo sapiens (ヒト) / 細胞株: HEK293 EBNA / 参照: UniProt: Q96EY7 |
-非ポリマー , 8種, 152分子
#37: 化合物 | ChemComp-K / #38: 化合物 | ChemComp-MG / #39: 化合物 | ChemComp-MET / | #40: 化合物 | ChemComp-ZN / | #41: 化合物 | #42: 化合物 | ChemComp-ATP / | #43: 化合物 | ChemComp-GDP / | #44: 水 | ChemComp-HOH / | |
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-詳細
研究の焦点であるリガンドがあるか | N |
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-実験情報
-実験
実験 | 手法: 電子顕微鏡法 |
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EM実験 | 試料の集合状態: PARTICLE / 3次元再構成法: 単粒子再構成法 |
-試料調製
構成要素 | 名称: 28S human mitochondrial small ribosomal subunit with mtRF1, mRNA, and P-site tRNA タイプ: RIBOSOME 詳細: 28S human mitochondrial small ribosomal subunit in complex with mtRF1(AAQ)-3xFLAG, human methionine-tRNA(Met), and an mRNA containing a non-canonical stop codon, purified from HEK293 EBNA cells. Entity ID: #1-#36 / 由来: NATURAL | ||||||||||||||||||||||||||||||
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分子量 |
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由来(天然) |
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由来(組換発現) |
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緩衝液 | pH: 7.5 | ||||||||||||||||||||||||||||||
緩衝液成分 |
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試料 | 包埋: NO / シャドウイング: NO / 染色: NO / 凍結: YES 詳細: Affinity-purified 55S mitoribosome. Refinement focused on 28S small subunit. | ||||||||||||||||||||||||||||||
試料支持 | グリッドの材料: COPPER / グリッドのタイプ: Quantifoil R2/2 | ||||||||||||||||||||||||||||||
急速凍結 | 装置: FEI VITROBOT MARK IV / 凍結剤: ETHANE-PROPANE / 湿度: 100 % / 凍結前の試料温度: 277.15 K |
-電子顕微鏡撮影
実験機器 | モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company |
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顕微鏡 | モデル: FEI TITAN KRIOS |
電子銃 | 電子線源: FIELD EMISSION GUN / 加速電圧: 300 kV / 照射モード: FLOOD BEAM |
電子レンズ | モード: BRIGHT FIELD / 倍率(公称値): 81000 X / 最大 デフォーカス(公称値): 3000 nm / 最小 デフォーカス(公称値): 600 nm / Cs: 2.7 mm / C2レンズ絞り径: 100 µm / アライメント法: COMA FREE |
試料ホルダ | 凍結剤: NITROGEN 試料ホルダーモデル: FEI TITAN KRIOS AUTOGRID HOLDER |
撮影 | 電子線照射量: 60 e/Å2 / フィルム・検出器のモデル: GATAN K3 (6k x 4k) / 撮影したグリッド数: 2 / 実像数: 43882 |
電子光学装置 | エネルギーフィルタースリット幅: 20 eV |
-解析
EMソフトウェア |
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画像処理 | 詳細: Micrographs were motion corrected and CTF parameters were estimated using Cryosparc. | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
CTF補正 | タイプ: PHASE FLIPPING AND AMPLITUDE CORRECTION | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
粒子像の選択 | 選択した粒子像数: 5423665 詳細: Particles were picked with blob picker in Cryosparc. | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
3次元再構成 | 解像度: 3 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / 粒子像の数: 41288 / 対称性のタイプ: POINT | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
原子モデル構築 | プロトコル: FLEXIBLE FIT / 空間: REAL | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
原子モデル構築 | 3D fitting-ID: 1
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