+データを開く
-基本情報
登録情報 | データベース: PDB / ID: 7oqy | ||||||
---|---|---|---|---|---|---|---|
タイトル | Cryo-EM structure of the cellular negative regulator TFS4 bound to the archaeal RNA polymerase | ||||||
要素 |
| ||||||
キーワード | TRANSCRIPTION / negative regulator / inhibitor / Archaea / Sso TFS4 / trancript cleavage factor | ||||||
機能・相同性 | 機能・相同性情報 3 iron, 4 sulfur cluster binding / RNA polymerase III activity / RNA polymerase II activity / RNA polymerase I activity / DNA-directed RNA polymerase complex / DNA-templated transcription initiation / ribonucleoside binding / DNA-directed 5'-3' RNA polymerase activity / DNA-directed RNA polymerase / defense response to virus ...3 iron, 4 sulfur cluster binding / RNA polymerase III activity / RNA polymerase II activity / RNA polymerase I activity / DNA-directed RNA polymerase complex / DNA-templated transcription initiation / ribonucleoside binding / DNA-directed 5'-3' RNA polymerase activity / DNA-directed RNA polymerase / defense response to virus / protein dimerization activity / negative regulation of DNA-templated transcription / nucleotide binding / DNA-templated transcription / magnesium ion binding / DNA binding / zinc ion binding / metal ion binding / cytoplasm 類似検索 - 分子機能 | ||||||
生物種 | Sulfolobus acidocaldarius DSM 639 (好気性・好酸性) Saccharolobus solfataricus (古細菌) | ||||||
手法 | 電子顕微鏡法 / 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 2.61 Å | ||||||
データ登録者 | Pilotto, S. / Fouqueau, T. / Lukoyanova, N. / Sheppard, C. / Lucas-Staat, S. / Diaz-Santin, L.M. / Matelska, D. / Prangishvili, D. / Cheung, A.C.M. / Werner, F. | ||||||
資金援助 | 英国, 1件
| ||||||
引用 | ジャーナル: Nat Commun / 年: 2021 タイトル: Structural basis of RNA polymerase inhibition by viral and host factors. 著者: Simona Pilotto / Thomas Fouqueau / Natalya Lukoyanova / Carol Sheppard / Soizick Lucas-Staat / Luis Miguel Díaz-Santín / Dorota Matelska / David Prangishvili / Alan C M Cheung / Finn Werner / 要旨: RNA polymerase inhibition plays an important role in the regulation of transcription in response to environmental changes and in the virus-host relationship. Here we present the high-resolution ...RNA polymerase inhibition plays an important role in the regulation of transcription in response to environmental changes and in the virus-host relationship. Here we present the high-resolution structures of two such RNAP-inhibitor complexes that provide the structural bases underlying RNAP inhibition in archaea. The Acidianus two-tailed virus encodes the RIP factor that binds inside the DNA-binding channel of RNAP, inhibiting transcription by occlusion of binding sites for nucleic acid and the transcription initiation factor TFB. Infection with the Sulfolobus Turreted Icosahedral Virus induces the expression of the host factor TFS4, which binds in the RNAP funnel similarly to eukaryotic transcript cleavage factors. However, TFS4 allosterically induces a widening of the DNA-binding channel which disrupts trigger loop and bridge helix motifs. Importantly, the conformational changes induced by TFS4 are closely related to inactivated states of RNAP in other domains of life indicating a deep evolutionary conservation of allosteric RNAP inhibition. | ||||||
履歴 |
|
-構造の表示
ムービー |
ムービービューア |
---|---|
構造ビューア | 分子: MolmilJmol/JSmol |
-ダウンロードとリンク
-ダウンロード
PDBx/mmCIF形式 | 7oqy.cif.gz | 629.6 KB | 表示 | PDBx/mmCIF形式 |
---|---|---|---|---|
PDB形式 | pdb7oqy.ent.gz | 507.2 KB | 表示 | PDB形式 |
PDBx/mmJSON形式 | 7oqy.json.gz | ツリー表示 | PDBx/mmJSON形式 | |
その他 | その他のダウンロード |
-検証レポート
文書・要旨 | 7oqy_validation.pdf.gz | 1.2 MB | 表示 | wwPDB検証レポート |
---|---|---|---|---|
文書・詳細版 | 7oqy_full_validation.pdf.gz | 1.3 MB | 表示 | |
XML形式データ | 7oqy_validation.xml.gz | 97.6 KB | 表示 | |
CIF形式データ | 7oqy_validation.cif.gz | 151.5 KB | 表示 | |
アーカイブディレクトリ | https://data.pdbj.org/pub/pdb/validation_reports/oq/7oqy ftp://data.pdbj.org/pub/pdb/validation_reports/oq/7oqy | HTTPS FTP |
-関連構造データ
-リンク
-集合体
登録構造単位 |
|
---|---|
1 |
|
-要素
-DNA-directed RNA polymerase subunit ... , 10種, 10分子 ABCDEHKLNP
#1: タンパク質 | 分子量: 99929.055 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 詳細: DNA-dependent RNA polymerase subunit RPOA' (RPO1N) 由来: (天然) Sulfolobus acidocaldarius DSM 639 (好気性・好酸性) Plasmid details: genetically manipulated to insert an additional copy of Rpo8 with a hexa-his tag at the C-terminus 参照: UniProt: P11512, DNA-directed RNA polymerase |
---|---|
#2: タンパク質 | 分子量: 126647.102 Da / 分子数: 1 / Mutation: V772I natural variant / 由来タイプ: 天然 / 詳細: DNA-dependent RNA polymerase subunit RPOB (RPO2) 由来: (天然) Sulfolobus acidocaldarius DSM 639 (好気性・好酸性) Plasmid details: genetically manipulated to insert an additional copy of Rpo8 with a hexa-his tag at the C-terminus 株: ATCC 33909 / DSM 639 / JCM 8929 / NBRC 15157 / NCIMB 11770 参照: UniProt: P11513, DNA-directed RNA polymerase |
#3: タンパク質 | 分子量: 44507.430 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 詳細: DNA-dependent RNA polymerase subunit RPOA'' (RPO1C) 由来: (天然) Sulfolobus acidocaldarius DSM 639 (好気性・好酸性) Plasmid details: genetically manipulated to insert an additional copy of Rpo8 with a hexa-his tag at the C-terminus 参照: UniProt: P11514, DNA-directed RNA polymerase |
#4: タンパク質 | 分子量: 29858.752 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 詳細: DNA-dependent RNA polymerase subunit RPOD (RPO3) 由来: (天然) Sulfolobus acidocaldarius DSM 639 (好気性・好酸性) Plasmid details: genetically manipulated to insert an additional copy of Rpo8 with a hexa-his tag at the C-terminus 参照: UniProt: P39471, DNA-directed RNA polymerase |
#5: タンパク質 | 分子量: 20496.750 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 詳細: DNA-dependent RNA polymerase subunit RPOE (RPO7) 由来: (天然) Sulfolobus acidocaldarius DSM 639 (好気性・好酸性) Plasmid details: genetically manipulated to insert an additional copy of Rpo8 with a hexa-his tag at the C-terminus 参照: UniProt: P39466, DNA-directed RNA polymerase |
#8: タンパク質 | 分子量: 9477.059 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 詳細: DNA-dependent RNA polymerase subunit RPOH (RPO5) 由来: (天然) Sulfolobus acidocaldarius DSM 639 (好気性・好酸性) Plasmid details: genetically manipulated to insert an additional copy of Rpo8 with a hexa-his tag at the C-terminus 参照: UniProt: P11521, DNA-directed RNA polymerase |
#9: タンパク質 | 分子量: 10251.990 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 詳細: DNA-dependent RNA polymerase subunit RPOK (RPO6) 由来: (天然) Sulfolobus acidocaldarius DSM 639 (好気性・好酸性) Plasmid details: genetically manipulated to insert an additional copy of Rpo8 with a hexa-his tag at the C-terminus 参照: UniProt: P39463, DNA-directed RNA polymerase |
#10: タンパク質 | 分子量: 10061.791 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 詳細: DNA-dependent RNA polymerase subunit RPOL (RPO11) 由来: (天然) Sulfolobus acidocaldarius DSM 639 (好気性・好酸性) Plasmid details: genetically manipulated to insert an additional copy of Rpo8 with a hexa-his tag at the C-terminus 参照: UniProt: P46217, DNA-directed RNA polymerase |
#11: タンパク質 | 分子量: 7673.108 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 詳細: DNA-dependent RNA polymerase subunit RPON (RPO10) 由来: (天然) Sulfolobus acidocaldarius DSM 639 (好気性・好酸性) Plasmid details: genetically manipulated to insert an additional copy of Rpo8 with a hexa-his tag at the C-terminus 参照: UniProt: P39472, DNA-directed RNA polymerase |
#12: タンパク質・ペプチド | 分子量: 5662.912 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 詳細: DNA-dependent RNA polymerase subunit RPOP (RPO12) 由来: (天然) Sulfolobus acidocaldarius DSM 639 (好気性・好酸性) Plasmid details: genetically manipulated to insert an additional copy of Rpo8 with a hexa-his tag at the C-terminus 株: ATCC 33909 / DSM 639 / JCM 8929 / NBRC 15157 / NCIMB 11770 参照: UniProt: Q4JAE8, DNA-directed RNA polymerase |
-DNA-directed RNA polymerase, subunit ... , 3種, 3分子 FGY
#6: タンパク質 | 分子量: 13070.987 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 詳細: DNA-dependent RNA polymerase subunit RPOF (RPO4) 由来: (天然) Sulfolobus acidocaldarius DSM 639 (好気性・好酸性) Plasmid details: genetically manipulated to insert an additional copy of Rpo8 with a hexa-his tag at the C-terminus 参照: UniProt: Q4JB12, DNA-directed RNA polymerase |
---|---|
#7: タンパク質 | 分子量: 15292.758 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 詳細: DNA-dependent RNA polymerase subunit RPOG (RPO8) 由来: (組換発現) Sulfolobus acidocaldarius DSM 639 (好気性・好酸性) 遺伝子: rpoG, Saci_0661 Plasmid details: genetically manipulated to insert an additional copy of Rpo8 with a hexa-his tag at the C-terminus 発現宿主: Sulfolobus acidocaldarius DSM 639 (好気性・好酸性) 参照: UniProt: Q4JAY4, DNA-directed RNA polymerase |
#14: タンパク質 | 分子量: 10422.411 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 詳細: DNA-directed RNA polymerase subunit RpoM-2 (TFS4) 由来: (組換発現) Saccharolobus solfataricus (strain ATCC 35092 / DSM 1617 / JCM 11322 / P2) (古細菌) 株: ATCC 35092 / DSM 1617 / JCM 11322 / P2 / 遺伝子: rpoM-2, SSO9221 / プラスミド: pET21a+ 詳細 (発現宿主): Cloned within NdeI and XhoI restriction sites with a stop codon at the end of the protein sequence 発現宿主: Escherichia coli (大腸菌) / 株 (発現宿主): DE3 Rosetta2 / 参照: UniProt: Q97X43, DNA-directed RNA polymerase |
-タンパク質 , 1種, 1分子 Q
#13: タンパク質 | 分子量: 12331.662 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 詳細: DNA-dependent RNA polymerase subunit RPO13 由来: (天然) Sulfolobus acidocaldarius DSM 639 (好気性・好酸性) Plasmid details: genetically manipulated to insert an additional copy of Rpo8 with a hexa-his tag at the C-terminus 参照: UniProt: Q4JAJ6 |
---|
-非ポリマー , 3種, 10分子
#15: 化合物 | ChemComp-MG / | ||
---|---|---|---|
#16: 化合物 | ChemComp-ZN / #17: 化合物 | ChemComp-F3S / | |
-詳細
研究の焦点であるリガンドがあるか | N |
---|
-実験情報
-実験
実験 | 手法: 電子顕微鏡法 |
---|---|
EM実験 | 試料の集合状態: PARTICLE / 3次元再構成法: 単粒子再構成法 |
-試料調製
構成要素 | 名称: TFS4 bound to the RNA polymerase / タイプ: COMPLEX / Entity ID: #1-#14 / 由来: MULTIPLE SOURCES | ||||||||||||||||||||||||||||||
---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
分子量 | 値: 0.414 MDa / 実験値: YES | ||||||||||||||||||||||||||||||
由来(天然) | 生物種: Sulfolobus acidocaldarius DSM 639 (好気性・好酸性) | ||||||||||||||||||||||||||||||
緩衝液 | pH: 7 | ||||||||||||||||||||||||||||||
緩衝液成分 |
| ||||||||||||||||||||||||||||||
試料 | 濃度: 0.4 mg/ml / 包埋: NO / シャドウイング: NO / 染色: NO / 凍結: YES 詳細: the sample was applied twice on the grid before vetrification | ||||||||||||||||||||||||||||||
試料支持 | 詳細: the grid was coated with graphene oxide after to be glow discharged and before applying the sample グリッドの材料: GOLD / グリッドのサイズ: 300 divisions/in. / グリッドのタイプ: UltrAuFoil R1.2/1.3 | ||||||||||||||||||||||||||||||
急速凍結 | 装置: FEI VITROBOT MARK IV / 凍結剤: ETHANE / 湿度: 94 % / 凍結前の試料温度: 277 K |
-電子顕微鏡撮影
実験機器 | モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company |
---|---|
顕微鏡 | モデル: FEI TITAN KRIOS |
電子銃 | 電子線源: FIELD EMISSION GUN / 加速電圧: 300 kV / 照射モード: FLOOD BEAM |
電子レンズ | モード: BRIGHT FIELD / 倍率(公称値): 81000 X / 最大 デフォーカス(公称値): 2500 nm / 最小 デフォーカス(公称値): 1000 nm / Cs: 2.7 mm |
試料ホルダ | 凍結剤: NITROGEN 試料ホルダーモデル: FEI TITAN KRIOS AUTOGRID HOLDER |
撮影 | 平均露光時間: 2 sec. / 電子線照射量: 45.2 e/Å2 / フィルム・検出器のモデル: GATAN K3 (6k x 4k) / 撮影したグリッド数: 1 / 実像数: 1760 詳細: images were collected as movie-stacks of 40 frames in super resolution mode |
電子光学装置 | エネルギーフィルター名称: GIF Bioquantum / エネルギーフィルタースリット幅: 20 eV |
-解析
ソフトウェア | 名称: PHENIX / バージョン: 1.19.2_4158: / 分類: 精密化 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
EMソフトウェア |
| |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
画像処理 | 詳細: All images were binned 2x, aligned and summed by using MotionCor2 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
CTF補正 | タイプ: PHASE FLIPPING AND AMPLITUDE CORRECTION | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
粒子像の選択 | 選択した粒子像数: 1161535 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
対称性 | 点対称性: C1 (非対称) | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
3次元再構成 | 解像度: 2.61 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / 粒子像の数: 350682 / クラス平均像の数: 2 / 対称性のタイプ: POINT | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
原子モデル構築 | プロトコル: RIGID BODY FIT / 空間: REAL / Target criteria: CC | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
原子モデル構築 | PDB-ID: 7OK0 Accession code: 7OK0 / Source name: PDB / タイプ: experimental model | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
拘束条件 |
|