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-基本情報
登録情報 | データベース: EMDB / ID: EMD-4974 | |||||||||||||||||||||
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タイトル | Cryo-EM structure of the activated Drs2p-Cdc50p | |||||||||||||||||||||
マップデータ | ||||||||||||||||||||||
試料 |
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機能・相同性 | 機能・相同性情報 oxaloacetate decarboxylase (Na+ extruding) / decarboxylation-driven active transmembrane transporter activity / Cdc50p-Drs2p complex / actin cortical patch localization / aminophospholipid translocation / pyruvate carboxylase activity / Ion transport by P-type ATPases / phosphatidylcholine flippase activity / post-Golgi vesicle-mediated transport / oxaloacetate decarboxylase activity ...oxaloacetate decarboxylase (Na+ extruding) / decarboxylation-driven active transmembrane transporter activity / Cdc50p-Drs2p complex / actin cortical patch localization / aminophospholipid translocation / pyruvate carboxylase activity / Ion transport by P-type ATPases / phosphatidylcholine flippase activity / post-Golgi vesicle-mediated transport / oxaloacetate decarboxylase activity / phosphatidylserine flippase activity / ATPase-coupled intramembrane lipid transporter activity / phospholipid-translocating ATPase complex / phosphatidylserine floppase activity / phosphatidylethanolamine flippase activity / P-type phospholipid transporter / endocytic recycling / retrograde transport, endosome to Golgi / phosphatidylinositol-4-phosphate binding / phospholipid translocation / sodium ion transport / Neutrophil degranulation / intracellular protein transport / trans-Golgi network / endocytosis / late endosome membrane / endosome membrane / Golgi apparatus / magnesium ion binding / endoplasmic reticulum / ATP hydrolysis activity / ATP binding / plasma membrane / cytosol 類似検索 - 分子機能 | |||||||||||||||||||||
生物種 | Saccharomyces cerevisiae S288C (パン酵母) / Klebsiella pneumoniae (肺炎桿菌) / Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) (パン酵母) | |||||||||||||||||||||
手法 | 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 2.9 Å | |||||||||||||||||||||
データ登録者 | Timcenko M / Lyons JA / Januliene D / Ulstrup JJ / Dieudonne T / Montigny C / Ash MR / Karlsen JL / Boesen T / Kuhlbrandt W ...Timcenko M / Lyons JA / Januliene D / Ulstrup JJ / Dieudonne T / Montigny C / Ash MR / Karlsen JL / Boesen T / Kuhlbrandt W / Lenoir G / Moeller A / Nissen P | |||||||||||||||||||||
資金援助 | デンマーク, フランス, 6件
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引用 | ジャーナル: Nature / 年: 2019 タイトル: Structure and autoregulation of a P4-ATPase lipid flippase. 著者: Milena Timcenko / Joseph A Lyons / Dovile Januliene / Jakob J Ulstrup / Thibaud Dieudonné / Cédric Montigny / Miriam-Rose Ash / Jesper Lykkegaard Karlsen / Thomas Boesen / Werner ...著者: Milena Timcenko / Joseph A Lyons / Dovile Januliene / Jakob J Ulstrup / Thibaud Dieudonné / Cédric Montigny / Miriam-Rose Ash / Jesper Lykkegaard Karlsen / Thomas Boesen / Werner Kühlbrandt / Guillaume Lenoir / Arne Moeller / Poul Nissen / 要旨: Type 4 P-type ATPases (P4-ATPases) are lipid flippases that drive the active transport of phospholipids from exoplasmic or luminal leaflets to cytosolic leaflets of eukaryotic membranes. The ...Type 4 P-type ATPases (P4-ATPases) are lipid flippases that drive the active transport of phospholipids from exoplasmic or luminal leaflets to cytosolic leaflets of eukaryotic membranes. The molecular architecture of P4-ATPases and the mechanism through which they recognize and transport lipids have remained unknown. Here we describe the cryo-electron microscopy structure of the P4-ATPase Drs2p-Cdc50p, a Saccharomyces cerevisiae lipid flippase that is specific to phosphatidylserine and phosphatidylethanolamine. Drs2p-Cdc50p is autoinhibited by the C-terminal tail of Drs2p, and activated by the lipid phosphatidylinositol-4-phosphate (PtdIns4P or PI4P). We present three structures that represent the complex in an autoinhibited, an intermediate and a fully activated state. The analysis highlights specific features of P4-ATPases and reveals sites of autoinhibition and PI4P-dependent activation. We also observe a putative lipid translocation pathway in this flippase that involves a conserved PISL motif in transmembrane segment 4 and polar residues of transmembrane segments 2 and 5, in particular Lys1018, in the centre of the lipid bilayer. | |||||||||||||||||||||
履歴 |
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-構造の表示
ムービー |
ムービービューア |
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構造ビューア | EMマップ: SurfViewMolmilJmol/JSmol |
添付画像 |
-ダウンロードとリンク
-EMDBアーカイブ
マップデータ | emd_4974.map.gz | 4.5 MB | EMDBマップデータ形式 | |
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ヘッダ (付随情報) | emd-4974-v30.xml emd-4974.xml | 23.9 KB 23.9 KB | 表示 表示 | EMDBヘッダ |
FSC (解像度算出) | emd_4974_fsc.xml | 9.1 KB | 表示 | FSCデータファイル |
画像 | emd_4974.png | 110.5 KB | ||
マスクデータ | emd_4974_msk_1.map | 64 MB | マスクマップ | |
その他 | emd_4974_additional.map.gz emd_4974_half_map_1.map.gz emd_4974_half_map_2.map.gz | 4.8 MB 49.7 MB 49.7 MB | ||
アーカイブディレクトリ | http://ftp.pdbj.org/pub/emdb/structures/EMD-4974 ftp://ftp.pdbj.org/pub/emdb/structures/EMD-4974 | HTTPS FTP |
-検証レポート
文書・要旨 | emd_4974_validation.pdf.gz | 386.6 KB | 表示 | EMDB検証レポート |
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文書・詳細版 | emd_4974_full_validation.pdf.gz | 385.7 KB | 表示 | |
XML形式データ | emd_4974_validation.xml.gz | 15 KB | 表示 | |
アーカイブディレクトリ | https://ftp.pdbj.org/pub/emdb/validation_reports/EMD-4974 ftp://ftp.pdbj.org/pub/emdb/validation_reports/EMD-4974 | HTTPS FTP |
-関連構造データ
-リンク
EMDBのページ | EMDB (EBI/PDBe) / EMDataResource |
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「今月の分子」の関連する項目 |
-マップ
ファイル | ダウンロード / ファイル: emd_4974.map.gz / 形式: CCP4 / 大きさ: 64 MB / タイプ: IMAGE STORED AS FLOATING POINT NUMBER (4 BYTES) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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投影像・断面図 | 画像のコントロール
画像は Spider により作成 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
ボクセルのサイズ | X=Y=Z: 1.077 Å | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
密度 |
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対称性 | 空間群: 1 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
詳細 | EMDB XML:
CCP4マップ ヘッダ情報:
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-添付データ
-マスク #1
ファイル | emd_4974_msk_1.map | ||||||||||||
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投影像・断面図 |
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密度ヒストグラム |
-追加マップ: #1
ファイル | emd_4974_additional.map | ||||||||||||
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投影像・断面図 |
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密度ヒストグラム |
-ハーフマップ: #2
ファイル | emd_4974_half_map_1.map | ||||||||||||
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投影像・断面図 |
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密度ヒストグラム |
-ハーフマップ: #1
ファイル | emd_4974_half_map_2.map | ||||||||||||
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投影像・断面図 |
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密度ヒストグラム |
-試料の構成要素
-全体 : Binary complex of Drs2p-Cdc50p with the regulatory lipid PI4P
全体 | 名称: Binary complex of Drs2p-Cdc50p with the regulatory lipid PI4P |
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要素 |
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-超分子 #1: Binary complex of Drs2p-Cdc50p with the regulatory lipid PI4P
超分子 | 名称: Binary complex of Drs2p-Cdc50p with the regulatory lipid PI4P タイプ: complex / ID: 1 / 親要素: 0 / 含まれる分子: #1-#2 詳細: C-terminus removed by proteolytic cleavage of an engineered site. |
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由来(天然) | 生物種: Saccharomyces cerevisiae S288C (パン酵母) |
組換発現 | 生物種: Saccharomyces cerevisiae S288C (パン酵母) / 組換プラスミド: pYedp60 |
-分子 #1: Probable phospholipid-transporting ATPase DRS2,Oxaloacetate decar...
分子 | 名称: Probable phospholipid-transporting ATPase DRS2,Oxaloacetate decarboxylase alpha chain タイプ: protein_or_peptide / ID: 1 詳細: Residues 1-104 removed after proteolysis with thrombin Residues 1252-1364 removed after proteolysis with thrombin 1248-1253 - added an addition thrombin cleavage site D560 described by ...詳細: Residues 1-104 removed after proteolysis with thrombin Residues 1252-1364 removed after proteolysis with thrombin 1248-1253 - added an addition thrombin cleavage site D560 described by Aspartate beryllium trifluoride (BFD) engineered C-terminal GGGG-LVPRGS-BAD-ta,Residues 1-104 removed after proteolysis with thrombin Residues 1252-1364 removed after proteolysis with thrombin 1248-1253 - added an addition thrombin cleavage site D560 described by Aspartate beryllium trifluoride (BFD) engineered C-terminal GGGG-LVPRGS-BAD-ta コピー数: 1 / 光学異性体: LEVO / EC番号: P-type phospholipid transporter |
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由来(天然) | 生物種: Klebsiella pneumoniae (肺炎桿菌) |
分子量 | 理論値: 164.240359 KDa |
組換発現 | 生物種: Saccharomyces cerevisiae S288C (パン酵母) |
配列 | 文字列: MNDDRETPPK RKPGEDDTLF DIDFLDDTTS HSGSRSKVTN SHANANYIPP SHVLPEETID LDADDDNIEN DVHENLFMSN NHDDQTSWN ANRFDSDAYQ PQSLRAVKPP GLFARFGNGL KNAFTFKRKK GPESFEMNHY NAVTNNELDD NYLDSRNKFN I KILFNRYI ...文字列: MNDDRETPPK RKPGEDDTLF DIDFLDDTTS HSGSRSKVTN SHANANYIPP SHVLPEETID LDADDDNIEN DVHENLFMSN NHDDQTSWN ANRFDSDAYQ PQSLRAVKPP GLFARFGNGL KNAFTFKRKK GPESFEMNHY NAVTNNELDD NYLDSRNKFN I KILFNRYI LRKNVGDAEG NGEPRVIHIN DSLANSSFGY SDNHISTTKY NFATFLPKFL FQEFSKYANL FFLCTSAIQQ VP HVSPTNR YTTIGTLLVV LIVSAMKECI EDIKRANSDK ELNNSTAEIF SEAHDDFVEK RWIDIRVGDI IRVKSEEPIP ADT IILSSS EPEGLCYIET ANLDGETNLK IKQSRVETAK FIDVKTLKNM NGKVVSEQPN SSLYTYEGTM TLNDRQIPLS PDQM ILRGA TLRNTAWIFG LVIFTGHETK LLRNATATPI KRTAVEKIIN RQIIALFTVL IVLILISSIG NVIMSTADAK HLSYL YLEG TNKAGLFFKD FLTFWILFSN LVPISLFVTV ELIKYYQAFM IGSDLDLYYE KTDTPTVVRT SSLVEELGQI EYIFS (BFD)KTG TLTRNIMEFK SCSIAGHCYI DKIPEDKTAT VEDGIEVGYR KFDDLKKKLN DPSDEDSPII NDFLTLLATC HT VIPEFQS DGSIKYQAAS PDEGALVQGG ADLGYKFIIR KPNSVTVLLE ETGEEKEYQL LNICEFNSTR KRMSAIFRFP DGS IKLFCK GADTVILERL DDEANQYVEA TMRHLEDYAS EGLRTLCLAM RDISEGEYEE WNSIYNEAAT TLDNRAEKLD EAAN LIEKN LILIGATAIE DKLQDGVPET IHTLQEAGIK IWVLTGDRQE TAINIGMSCR LLSEDMNLLI INEETRDDTE RNLLE KINA LNEHQLSTHD MNTLALVIDG KSLGFALEPE LEDYLLTVAK LCKAVICCRV SPLQKALVVK MVKRKSSSLL LAIGDG AND VSMIQAAHVG VGISGMEGMQ AARSADIAVG QFKFLKKLLL VHGSWSYQRI SVAILYSFYK NTALYMTQFW YVFANAF SG QSIMESWTMS FYNLFFTVWP PFVIGVFDQF VSSRLLERYP QLYKLGQKGQ FFSVYIFWGW IINGFFHSAI VFIGTILI Y RYGFALNMHG ELADHWSWGV TVYTTSVIIV LGKAALVTNQ WTKFTLIAIP GSLLFWLIFF PIYASIFPHA NISREYYGV VKHTYGSGVF WLTLIVLPIF ALVRDFLWKY YKRMYEPETY HVIQEMQKYN ISLVPRGSDS RPHVQQFQNA IRKVRQVQRM KKQRGFAFS QAEEGGQEKI VRMYDTTQKR GKYGELQDAS ANPFNDNNGL GSNDFESAEP FIENPFADGN QNSNRFSSSR D DISFDIGG GGLVPRGSGG TAAAPGPAPA PAPASAPAAA APAGAGTPVT APLAGTIWKV LASEGQTVAA GEVLLILEAM KM ETEIRAA QAGTVRGIAV KAGDAVAVGD TLM |
-分子 #2: Cell division control protein 50
分子 | 名称: Cell division control protein 50 / タイプ: protein_or_peptide / ID: 2 / 詳細: engineered C-terminal GGGG-LVPRGS-GG-10xHistag / コピー数: 1 / 光学異性体: LEVO |
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由来(天然) | 生物種: Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) (パン酵母) |
分子量 | 理論値: 47.371797 KDa |
組換発現 | 生物種: Saccharomyces cerevisiae S288C (パン酵母) |
配列 | 文字列: MVSLFKRGKA PPLTKEGPTS KKPPNTAFRQ QRLKAWQPIL SPQSVLPLLI FVACIFTPIG IGLIVSATKV QDLTIDYSHC DTKASTTAF EDIPKKYIKY HFKSKVENKP QWRLTENENG EQSCELQFEI PNDIKKSIFI YYKITNFYQN HRRYVQSFDT K QILGEPIK ...文字列: MVSLFKRGKA PPLTKEGPTS KKPPNTAFRQ QRLKAWQPIL SPQSVLPLLI FVACIFTPIG IGLIVSATKV QDLTIDYSHC DTKASTTAF EDIPKKYIKY HFKSKVENKP QWRLTENENG EQSCELQFEI PNDIKKSIFI YYKITNFYQN HRRYVQSFDT K QILGEPIK KDDLDTSCSP IRSREDKIIY PCGLIANSMF NDTFSQVLSG IDDTEDYNLT NKHISWSIDR HRFKTTKYNA SD IVPPPNW MKKYPDGYTD ENLPDIHTWE EFQVWMRTAA FPKFYKLTLK NESASLPKGK YQMNIELNYP ISLFGGTKSF VLT TNGAIG GRNMSLGVLY LIVAGLCALF GIIFLVKLIF QPRAMGDHTY LNFDDEENED YEDVHAENTT LREILGGGGL VPRG SGGHH HHHHHHHH |
-分子 #5: MAGNESIUM ION
分子 | 名称: MAGNESIUM ION / タイプ: ligand / ID: 5 / コピー数: 1 / 式: MG |
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分子量 | 理論値: 24.305 Da |
-分子 #6: (2R)-1-{[(R)-hydroxy{[(1R,2R,3R,4R,5S,6R)-2,3,5,6-tetrahydroxy-4-...
分子 | 名称: (2R)-1-{[(R)-hydroxy{[(1R,2R,3R,4R,5S,6R)-2,3,5,6-tetrahydroxy-4-(phosphonooxy)cyclohexyl]oxy}phosphoryl]oxy}-3-(octadecanoyloxy)propan-2-yl (5Z,8Z,11Z,14Z)-icosa-5,8,11,14-tetraenoate タイプ: ligand / ID: 6 / コピー数: 1 / 式: 2Y5 |
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分子量 | 理論値: 967.108 Da |
Chemical component information | ChemComp-2Y5: |
-分子 #7: water
分子 | 名称: water / タイプ: ligand / ID: 7 / コピー数: 2 / 式: HOH |
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分子量 | 理論値: 18.015 Da |
Chemical component information | ChemComp-HOH: |
-実験情報
-構造解析
手法 | クライオ電子顕微鏡法 |
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解析 | 単粒子再構成法 |
試料の集合状態 | particle |
-試料調製
濃度 | 0.6 mg/mL |
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緩衝液 | pH: 7 |
グリッド | モデル: C-flat-1.2/1.3 / 材質: COPPER / メッシュ: 400 / 支持フィルム - 材質: CARBON / 支持フィルム - トポロジー: HOLEY / 前処理 - タイプ: GLOW DISCHARGE / 詳細: 15mA |
凍結 | 凍結剤: ETHANE / チャンバー内湿度: 100 % / チャンバー内温度: 278 K / 装置: FEI VITROBOT MARK IV |
詳細 | 1mM beryllium fluoride 0.1 mg/mL Brain PI4P in DDM |
-電子顕微鏡法
顕微鏡 | FEI TITAN KRIOS |
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撮影 | フィルム・検出器のモデル: GATAN K2 QUANTUM (4k x 4k) 検出モード: COUNTING / 平均露光時間: 8.0 sec. / 平均電子線量: 56.0 e/Å2 |
電子線 | 加速電圧: 300 kV / 電子線源: FIELD EMISSION GUN |
電子光学系 | 照射モード: FLOOD BEAM / 撮影モード: BRIGHT FIELD |
実験機器 | モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company |