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-基本情報
登録情報 | データベース: EMDB / ID: EMD-4660 | ||||||||||||
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タイトル | Influenza B virus (B/Panama/45) polymerase Hetermotrimer in complex with 3'5' cRNA promoter | ||||||||||||
マップデータ | None | ||||||||||||
試料 |
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キーワード | Influenza A / RNA polymerase / Influenza polymerase / Influenza dimer / RDRP / RNA BINDING PROTEIN | ||||||||||||
機能・相同性 | 機能・相同性情報 cap snatching / viral transcription / symbiont-mediated suppression of host mRNA transcription via inhibition of RNA polymerase II activity / 7-methylguanosine mRNA capping / virion component / endonuclease activity / host cell cytoplasm / 加水分解酵素; エステル加水分解酵素 / RNA-directed RNA polymerase / viral translational frameshifting ...cap snatching / viral transcription / symbiont-mediated suppression of host mRNA transcription via inhibition of RNA polymerase II activity / 7-methylguanosine mRNA capping / virion component / endonuclease activity / host cell cytoplasm / 加水分解酵素; エステル加水分解酵素 / RNA-directed RNA polymerase / viral translational frameshifting / viral RNA genome replication / RNA-dependent RNA polymerase activity / nucleotide binding / DNA-templated transcription / host cell nucleus / RNA binding / metal ion binding 類似検索 - 分子機能 | ||||||||||||
生物種 | Influenza B virus (B/Panama/45/1990) (B型インフルエンザウイルス) / Influenza A virus (A型インフルエンザウイルス) / Influenza B virus (strain B/Panama/45/1990) (B型インフルエンザウイルス) | ||||||||||||
手法 | 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 4.1 Å | ||||||||||||
データ登録者 | Keown JR / Carrique L | ||||||||||||
資金援助 | 英国, 3件
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引用 | ジャーナル: Nature / 年: 2019 タイトル: Structures of influenza A virus RNA polymerase offer insight into viral genome replication. 著者: Haitian Fan / Alexander P Walker / Loïc Carrique / Jeremy R Keown / Itziar Serna Martin / Dimple Karia / Jane Sharps / Narin Hengrung / Els Pardon / Jan Steyaert / Jonathan M Grimes / Ervin Fodor / 要旨: Influenza A viruses are responsible for seasonal epidemics, and pandemics can arise from the transmission of novel zoonotic influenza A viruses to humans. Influenza A viruses contain a segmented ...Influenza A viruses are responsible for seasonal epidemics, and pandemics can arise from the transmission of novel zoonotic influenza A viruses to humans. Influenza A viruses contain a segmented negative-sense RNA genome, which is transcribed and replicated by the viral-RNA-dependent RNA polymerase (FluPol) composed of PB1, PB2 and PA subunits. Although the high-resolution crystal structure of FluPol of bat influenza A virus has previously been reported, there are no complete structures available for human and avian FluPol. Furthermore, the molecular mechanisms of genomic viral RNA (vRNA) replication-which proceeds through a complementary RNA (cRNA) replicative intermediate, and requires oligomerization of the polymerase-remain largely unknown. Here, using crystallography and cryo-electron microscopy, we determine the structures of FluPol from human influenza A/NT/60/1968 (H3N2) and avian influenza A/duck/Fujian/01/2002 (H5N1) viruses at a resolution of 3.0-4.3 Å, in the presence or absence of a cRNA or vRNA template. In solution, FluPol forms dimers of heterotrimers through the C-terminal domain of the PA subunit, the thumb subdomain of PB1 and the N1 subdomain of PB2. The cryo-electron microscopy structure of monomeric FluPol bound to the cRNA template reveals a binding site for the 3' cRNA at the dimer interface. We use a combination of cell-based and in vitro assays to show that the interface of the FluPol dimer is required for vRNA synthesis during replication of the viral genome. We also show that a nanobody (a single-domain antibody) that interferes with FluPol dimerization inhibits the synthesis of vRNA and, consequently, inhibits virus replication in infected cells. Our study provides high-resolution structures of medically relevant FluPol, as well as insights into the replication mechanisms of the viral RNA genome. In addition, our work identifies sites in FluPol that could be targeted in the development of antiviral drugs. | ||||||||||||
履歴 |
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-構造の表示
ムービー |
ムービービューア |
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構造ビューア | EMマップ: SurfViewMolmilJmol/JSmol |
添付画像 |
-ダウンロードとリンク
-EMDBアーカイブ
マップデータ | emd_4660.map.gz | 60 MB | EMDBマップデータ形式 | |
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ヘッダ (付随情報) | emd-4660-v30.xml emd-4660.xml | 22.2 KB 22.2 KB | 表示 表示 | EMDBヘッダ |
FSC (解像度算出) | emd_4660_fsc.xml | 9.2 KB | 表示 | FSCデータファイル |
画像 | emd_4660.png | 33 KB | ||
Filedesc metadata | emd-4660.cif.gz | 8.1 KB | ||
アーカイブディレクトリ | http://ftp.pdbj.org/pub/emdb/structures/EMD-4660 ftp://ftp.pdbj.org/pub/emdb/structures/EMD-4660 | HTTPS FTP |
-検証レポート
文書・要旨 | emd_4660_validation.pdf.gz | 287.2 KB | 表示 | EMDB検証レポート |
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文書・詳細版 | emd_4660_full_validation.pdf.gz | 286.4 KB | 表示 | |
XML形式データ | emd_4660_validation.xml.gz | 11 KB | 表示 | |
アーカイブディレクトリ | https://ftp.pdbj.org/pub/emdb/validation_reports/EMD-4660 ftp://ftp.pdbj.org/pub/emdb/validation_reports/EMD-4660 | HTTPS FTP |
-関連構造データ
関連構造データ | 6qwlMC 4661C 4663C 4664C 4666C 4986C 6qnwC 6qpfC 6qpgC 6qx3C 6qx8C 6qxeC 6rr7C M: このマップから作成された原子モデル C: 同じ文献を引用 (文献) |
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類似構造データ |
-リンク
EMDBのページ | EMDB (EBI/PDBe) / EMDataResource |
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-マップ
ファイル | ダウンロード / ファイル: emd_4660.map.gz / 形式: CCP4 / 大きさ: 64 MB / タイプ: IMAGE STORED AS FLOATING POINT NUMBER (4 BYTES) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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注釈 | None | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
投影像・断面図 | 画像のコントロール
画像は Spider により作成 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
ボクセルのサイズ | X=Y=Z: 1.08 Å | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
密度 |
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対称性 | 空間群: 1 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
詳細 | EMDB XML:
CCP4マップ ヘッダ情報:
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-添付データ
-試料の構成要素
-全体 : Influenza B (Panama/45) polymerase Hetermotrimer in complex with ...
全体 | 名称: Influenza B (Panama/45) polymerase Hetermotrimer in complex with 3'5' cRNA promoter |
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要素 |
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-超分子 #1: Influenza B (Panama/45) polymerase Hetermotrimer in complex with ...
超分子 | 名称: Influenza B (Panama/45) polymerase Hetermotrimer in complex with 3'5' cRNA promoter タイプ: complex / ID: 1 / 親要素: 0 / 含まれる分子: all 詳細: Sample was treated with 0.001% glutaraldehyde for 20 min on ice prior quenching with 100 mM Tris-HCl pH 7.5 and gel filtration. |
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分子量 | 理論値: 250 KDa |
-超分子 #2: Influenza B (Panama/45) polymerase Hetermotrimer in complex with ...
超分子 | 名称: Influenza B (Panama/45) polymerase Hetermotrimer in complex with 3'5' cRNA promoter タイプ: complex / ID: 2 / 親要素: 1 / 含まれる分子: #1-#3 詳細: Sample was treated with 0.001% glutaraldehyde for 20 min on ice prior quenching with 100 mM Tris-HCl pH 7.5 and gel filtration. |
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由来(天然) | 生物種: Influenza B virus (B/Panama/45/1990) (B型インフルエンザウイルス) |
-超分子 #3: Influenza B (Panama/45) polymerase Hetermotrimer in complex with ...
超分子 | 名称: Influenza B (Panama/45) polymerase Hetermotrimer in complex with 3'5' cRNA promoter タイプ: complex / ID: 3 / 親要素: 1 / 含まれる分子: #4-#5 詳細: Sample was treated with 0.001% glutaraldehyde for 20 min on ice prior quenching with 100 mM Tris-HCl pH 7.5 and gel filtration. |
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由来(天然) | 生物種: Influenza A virus (A型インフルエンザウイルス) |
-分子 #1: Polymerase acidic protein
分子 | 名称: Polymerase acidic protein / タイプ: protein_or_peptide / ID: 1 / コピー数: 1 / 光学異性体: LEVO EC番号: 加水分解酵素; エステル加水分解酵素 |
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由来(天然) | 生物種: Influenza B virus (strain B/Panama/45/1990) (B型インフルエンザウイルス) |
分子量 | 理論値: 83.161055 KDa |
組換発現 | 生物種: Spodoptera frugiperda (ツマジロクサヨトウ) |
配列 | 文字列: MDTFITRNFQ TTIIQKAKNT MAEFSEDPEL QPAMLFNICV HLEVCYVISD MNFLDEEGKS YTALEGQGKE QNLRPQYEVI EGMPRTIAW MVQRSLAQEH GIETPKYLAD LFDYKTKRFI EVGITKGLAD DYFWKKKEKL GNSMELMIFS YNQDYSLSNE S SLDEEGKG ...文字列: MDTFITRNFQ TTIIQKAKNT MAEFSEDPEL QPAMLFNICV HLEVCYVISD MNFLDEEGKS YTALEGQGKE QNLRPQYEVI EGMPRTIAW MVQRSLAQEH GIETPKYLAD LFDYKTKRFI EVGITKGLAD DYFWKKKEKL GNSMELMIFS YNQDYSLSNE S SLDEEGKG RVLSRLTELQ AELSLKNLWQ VLIGEEDVEK GIDFKLGQTI SRLRDISVPA GFSNFEGMRS YIDNIDPKGA IE RNLARMS PLVSATPKKL KWEDLRPIGP HIYNHELPEV PYNAFLLMSD ELGLANMTEG KSKKPKTLAK ECLEKYSTLR DQT DPILIM KSEKANENFL WKLWRDCVNT ISNEEMSNEL QKTNYAKWAT GDGLTYQKIM KEVAIDDETM CQEEPKIPNK CRVA AWVQT EMNLLSTLTS KRALDLPEIG PDVAPVEHVG SERRKYFVNE INYCKASTVM MKYVLFHTSL LNESNASMGK YKVIP ITNR VVNEKGESFD MLYGLAVKGQ SHLRGDTDVV TVVTFEFSST DPRVDSGKWP KYTVFRIGSL FVSGREKSVY LYCRVN GTN KIQMKWGMEA RRCLLQSMQQ MEAIVEQESS IQGYDMTKAC FKGDRVNSPK TFSIGTQEGK LVKGSFGKAL RVIFTKC LM HYVFGNAQLE GFSAESRRLL LLIQALKDRK GPWVFDLEGM YSGIEECISN NPWVIQSAYW FNEWLGFEKE GSKVLESV D EIMDE UniProtKB: Polymerase acidic protein |
-分子 #2: RNA-directed RNA polymerase catalytic subunit
分子 | 名称: RNA-directed RNA polymerase catalytic subunit / タイプ: protein_or_peptide / ID: 2 / コピー数: 1 / 光学異性体: LEVO / EC番号: RNA-directed RNA polymerase |
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由来(天然) | 生物種: Influenza B virus (strain B/Panama/45/1990) (B型インフルエンザウイルス) |
分子量 | 理論値: 84.37818 KDa |
組換発現 | 生物種: Spodoptera frugiperda (ツマジロクサヨトウ) |
配列 | 文字列: MNINPYFLFI DVPIQAAIST TFPYTGVPPY SHGTGTGHTI DTVIRTHEYS NKGKQYVSDV TGCTMVDPTN GPLPEDNEPS AYAQLDCVL EALDRMDEEH PGLFQAASQN AMEALMVTTV DKLTQGRQTF DWTVCRNQPA ATALNTTITS FRLNDLNGAD K GGLVPFCQ ...文字列: MNINPYFLFI DVPIQAAIST TFPYTGVPPY SHGTGTGHTI DTVIRTHEYS NKGKQYVSDV TGCTMVDPTN GPLPEDNEPS AYAQLDCVL EALDRMDEEH PGLFQAASQN AMEALMVTTV DKLTQGRQTF DWTVCRNQPA ATALNTTITS FRLNDLNGAD K GGLVPFCQ DIIDSLDKPE MTFFSVKNIK KKLPAKNRKG FLIKRIPMKV KDRITRVEYI KRALSLNTMT KDAERGKLKR RA IATAGIQ IRGFVLVVEN LAKNICENLE QSGLPVGGNE KKAKLSNAVA KMLSNCPPGG ISMTVTGDNT KWNECLNPRI FLA MTERIT RDSPIWFRDF CSIAPVLFSN KIARLGKGFM ITSKTKRLKA QIPCPDLFSI PLERYNEETR AKLKKLKPFF NEEG TASLS PGMMMGMFNM LSTVLGVAAL GIKNIGNKEY LWDGLQSSDD FALFVNAKDE ETCMEGINDF YRTCKLLGIN MSKKK SYCN ETGMFEFTSM FYRDGFVSNF AMEIPSFGVA GVNESADMAI GMTIIKNNMI NNGMGPATAQ TAIQLFIADY RYTYKC HRG DSKVEGKRMK IIKELWENTK GRDGLLVADG GPNIYNLRNL HIPEIVLKYN LMDPEYKGRL LHPQNPFVGH LSIEGIK EA DITPAHGPVK KMDYDAVSGT HSWRTKRNRS ILNTDQRNMI LEEQCYAKCC NLFEACFNSA SYRKPVGQHS MLEAMAHR L RMDARLDYES GRMSKDDFEK AMAHLGEIGY I UniProtKB: RNA-directed RNA polymerase catalytic subunit |
-分子 #3: Polymerase basic protein 2
分子 | 名称: Polymerase basic protein 2 / タイプ: protein_or_peptide / ID: 3 / コピー数: 1 / 光学異性体: LEVO |
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由来(天然) | 生物種: Influenza B virus (strain B/Panama/45/1990) (B型インフルエンザウイルス) |
分子量 | 理論値: 89.097453 KDa |
組換発現 | 生物種: Spodoptera frugiperda (ツマジロクサヨトウ) |
配列 | 文字列: MTLAKIELLK QLLRDNEAKT VLKQTTVDQY NIIRKFNTSR IEKNPSLRMK WAMCSNFPLA LTKGDMANRI PLEYKGIQLK TNAEDIGTK GQMCSIAAVT WWNTYGPIGD TEGFEKVYES FFLRKMRLDN ATWGRITFGP VERVRKRVLL NPLTKEMPPD E ASNVIMEI ...文字列: MTLAKIELLK QLLRDNEAKT VLKQTTVDQY NIIRKFNTSR IEKNPSLRMK WAMCSNFPLA LTKGDMANRI PLEYKGIQLK TNAEDIGTK GQMCSIAAVT WWNTYGPIGD TEGFEKVYES FFLRKMRLDN ATWGRITFGP VERVRKRVLL NPLTKEMPPD E ASNVIMEI LFPKEAGIPR ESTWIHRELI KEKREKLKGT MITPIVLAYM LERELVARRR FLPVAGATSA EFIEMLHCLQ GE NWRQIYH PGGNKLTESR SQSMIVACRK IIRRSIVASN PLELAVEIAN KTVIDTEPLK SCLTAIDGGD VACDIIRAAL GLK IRQRQR FGRLELKRIS GRGFKNDEEI LIGNGTIQKI GIWDGEEEFH VRCGECRGIL KKSKMRMEKL LINSAKKEDM KDLI ILCMV FSQDTRMFQG VRGEINFLNR AGQLLSPMYQ LQRYFLNRSN DLFDQWGYEE SPKASELHGI NELMNASDYT LKGVV VTKN VIDDFSSTET EKVSITKNLS LIKRTGEVIM GANDVSELES QAQLMITYDT PKMWEMGTTK ELVQNTYQWV LKNLVT LKA QFLLGKEDMF QWDAFEAFES IIPQKMAGQY SGFARAVLKQ MRDQEVMKTD QFIKLLPFCF SPPKLRSNGE PYQFLRL VL KGGGENFIEV RKGSPLFSYN PQTEVLTICG RMMSLKGKIE DEERNRSMGN AVLAGFLVSG KYDPDLGDFK TIEELEKL K PGEKANILLY QGKPVKVVKR KRYSALSNDI SQGIKRQRMT VESMGWALSA RENLYFQ UniProtKB: Polymerase basic protein 2 |
-分子 #4: 3' cRNA
分子 | 名称: 3' cRNA / タイプ: rna / ID: 4 / コピー数: 1 |
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由来(天然) | 生物種: Influenza A virus (A型インフルエンザウイルス) |
分子量 | 理論値: 4.683753 KDa |
配列 | 文字列: GGCCUUGUUU CUACU |
-分子 #5: 5' cRNA
分子 | 名称: 5' cRNA / タイプ: rna / ID: 5 / コピー数: 1 |
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由来(天然) | 生物種: Influenza A virus (A型インフルエンザウイルス) |
分子量 | 理論値: 4.531827 KDa |
配列 | 文字列: AGCAAAAGCA GGCC |
-実験情報
-構造解析
手法 | クライオ電子顕微鏡法 |
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解析 | 単粒子再構成法 |
試料の集合状態 | particle |
-試料調製
濃度 | 0.35 mg/mL | |||||||||
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緩衝液 | pH: 7.5 / 構成要素:
詳細: Sample was purified in 20 mM HEPES, pH 7.5, 150 mM NaCl with Tween 20 added to a final concentration 0f 0.05% prior to plunging grids. | |||||||||
グリッド | モデル: C-flat-2/1 / 材質: COPPER / メッシュ: 200 / 支持フィルム - 材質: CARBON / 支持フィルム - トポロジー: HOLEY / 前処理 - タイプ: GLOW DISCHARGE / 前処理 - 時間: 30 sec. / 前処理 - 雰囲気: AIR / 前処理 - 気圧: 101.325 kPa | |||||||||
凍結 | 凍結剤: ETHANE / チャンバー内湿度: 100 % / チャンバー内温度: 298 K / 装置: FEI VITROBOT MARK IV / 詳細: blot for 3.5 sec before plunging. |
-電子顕微鏡法
顕微鏡 | FEI TITAN KRIOS |
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撮影 | フィルム・検出器のモデル: GATAN K2 SUMMIT (4k x 4k) 検出モード: COUNTING / デジタル化 - 画像ごとのフレーム数: 1-28 / 撮影したグリッド数: 1 / 実像数: 4711 / 平均露光時間: 4.38 sec. / 平均電子線量: 1.1 e/Å2 |
電子線 | 加速電圧: 300 kV / 電子線源: FIELD EMISSION GUN |
電子光学系 | C2レンズ絞り径: 70.0 µm / 照射モード: FLOOD BEAM / 撮影モード: BRIGHT FIELD / Cs: 2.7 mm / 最大 デフォーカス(公称値): 2.5 µm / 最小 デフォーカス(公称値): 1.3 µm / 倍率(公称値): 130000 |
試料ステージ | 試料ホルダーモデル: FEI TITAN KRIOS AUTOGRID HOLDER ホルダー冷却材: NITROGEN |
実験機器 | モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company |