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-基本情報
登録情報 | データベース: EMDB / ID: EMD-45466 | |||||||||
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タイトル | CryoEM structure of CRISPR associated effector, CARF-Adenosine deaminase 1, Cad1, in cA6 (partial density) bound form with ATP (partial density). | |||||||||
マップデータ | structure of CRISPR associated effector, CARF-Adenosine deaminase 1, Cad1, in cA6 (partial density) bound form with ATP (partial density). | |||||||||
試料 |
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キーワード | Antiphage defense / CRISPR / Deamination / CARF-Adenosine deaminase / ATP / ANTIVIRAL PROTEIN / ANTIVIRAL PROTEIN-RNA complex | |||||||||
機能・相同性 | 機能・相同性情報 inosine biosynthetic process / adenosine catabolic process / adenosine deaminase activity 類似検索 - 分子機能 | |||||||||
生物種 | bacteroidale bacteria (バクテリア) / Bacteroidales bacterium (バクテリア) | |||||||||
手法 | 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 3.6 Å | |||||||||
データ登録者 | Majumder P / Patel DJ | |||||||||
資金援助 | 米国, 1件
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引用 | ジャーナル: Cell / 年: 2024 タイトル: The CRISPR-associated adenosine deaminase Cad1 converts ATP to ITP to provide antiviral immunity. 著者: Christian F Baca / Puja Majumder / James H Hickling / Linzhi Ye / Marianna Teplova / Sean F Brady / Dinshaw J Patel / Luciano A Marraffini / 要旨: Type III CRISPR systems provide immunity against genetic invaders through the production of cyclic oligo-adenylate (cA) molecules that activate effector proteins that contain CRISPR-associated ...Type III CRISPR systems provide immunity against genetic invaders through the production of cyclic oligo-adenylate (cA) molecules that activate effector proteins that contain CRISPR-associated Rossman fold (CARF) domains. Here, we characterized the function and structure of an effector in which the CARF domain is fused to an adenosine deaminase domain, CRISPR-associated adenosine deaminase 1 (Cad1). We show that upon binding of cA or cA to its CARF domain, Cad1 converts ATP to ITP, both in vivo and in vitro. Cryoelectron microscopy (cryo-EM) structural studies on full-length Cad1 reveal an hexameric assembly composed of a trimer of dimers, with bound ATP at inter-domain sites required for activity and ATP/ITP within deaminase active sites. Upon synthesis of cA during phage infection, Cad1 activation leads to a growth arrest of the host that prevents viral propagation. Our findings reveal that CRISPR-Cas systems employ a wide range of molecular mechanisms beyond nucleic acid degradation to provide adaptive immunity in prokaryotes. | |||||||||
履歴 |
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-構造の表示
添付画像 |
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-ダウンロードとリンク
-EMDBアーカイブ
マップデータ | emd_45466.map.gz | 254.9 MB | EMDBマップデータ形式 | |
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ヘッダ (付随情報) | emd-45466-v30.xml emd-45466.xml | 17.3 KB 17.3 KB | 表示 表示 | EMDBヘッダ |
FSC (解像度算出) | emd_45466_fsc.xml | 16.9 KB | 表示 | FSCデータファイル |
画像 | emd_45466.png | 68.2 KB | ||
Filedesc metadata | emd-45466.cif.gz | 6.4 KB | ||
その他 | emd_45466_half_map_1.map.gz emd_45466_half_map_2.map.gz | 475.4 MB 475.4 MB | ||
アーカイブディレクトリ | http://ftp.pdbj.org/pub/emdb/structures/EMD-45466 ftp://ftp.pdbj.org/pub/emdb/structures/EMD-45466 | HTTPS FTP |
-検証レポート
文書・要旨 | emd_45466_validation.pdf.gz | 830.8 KB | 表示 | EMDB検証レポート |
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文書・詳細版 | emd_45466_full_validation.pdf.gz | 830.4 KB | 表示 | |
XML形式データ | emd_45466_validation.xml.gz | 26.4 KB | 表示 | |
CIF形式データ | emd_45466_validation.cif.gz | 34.8 KB | 表示 | |
アーカイブディレクトリ | https://ftp.pdbj.org/pub/emdb/validation_reports/EMD-45466 ftp://ftp.pdbj.org/pub/emdb/validation_reports/EMD-45466 | HTTPS FTP |
-関連構造データ
関連構造データ | 9cdbMC 9c67C 9c68C 9c69C 9c6aC 9c6cC 9c6fC 9c77C M: このマップから作成された原子モデル C: 同じ文献を引用 (文献) |
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類似構造データ | 類似検索 - 機能・相同性F&H 検索 |
-リンク
EMDBのページ | EMDB (EBI/PDBe) / EMDataResource |
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「今月の分子」の関連する項目 |
-マップ
ファイル | ダウンロード / ファイル: emd_45466.map.gz / 形式: CCP4 / 大きさ: 512 MB / タイプ: IMAGE STORED AS FLOATING POINT NUMBER (4 BYTES) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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注釈 | structure of CRISPR associated effector, CARF-Adenosine deaminase 1, Cad1, in cA6 (partial density) bound form with ATP (partial density). | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
投影像・断面図 | 画像のコントロール
画像は Spider により作成 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
ボクセルのサイズ | X=Y=Z: 0.809 Å | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
密度 |
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対称性 | 空間群: 1 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
詳細 | EMDB XML:
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-添付データ
-ハーフマップ: Half Map A
ファイル | emd_45466_half_map_1.map | ||||||||||||
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注釈 | Half Map A | ||||||||||||
投影像・断面図 |
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密度ヒストグラム |
-ハーフマップ: Half Map B
ファイル | emd_45466_half_map_2.map | ||||||||||||
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注釈 | Half Map B | ||||||||||||
投影像・断面図 |
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密度ヒストグラム |
-試料の構成要素
-全体 : cA6 (partial density)-Cad1-ATP (partial density)
全体 | 名称: cA6 (partial density)-Cad1-ATP (partial density) |
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要素 |
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-超分子 #1: cA6 (partial density)-Cad1-ATP (partial density)
超分子 | 名称: cA6 (partial density)-Cad1-ATP (partial density) / タイプ: complex / ID: 1 / 親要素: 0 / 含まれる分子: #1-#2 詳細: Cad1 forms a trimer of dimers. In this structure partial density of bound cA6 is visible. ATP is present. |
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由来(天然) | 生物種: bacteroidale bacteria (バクテリア) |
分子量 | 理論値: 400 KDa |
-分子 #1: Adenosine deaminase domain-containing protein
分子 | 名称: Adenosine deaminase domain-containing protein / タイプ: protein_or_peptide / ID: 1 / コピー数: 6 / 光学異性体: LEVO |
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由来(天然) | 生物種: Bacteroidales bacterium (バクテリア) |
分子量 | 理論値: 67.264945 KDa |
組換発現 | 生物種: Escherichia coli (大腸菌) |
配列 | 文字列: MSRVLLCSAG HSSMVVPEAF HAVPEGFEEV HVFTTDSEKF NPVVLNDFFH SLPNVRFSIT KCHGLADILN ERDFEFYQEM LWQWYLTKM PDNELPYVCL SGGIKSMSAS LQKAATLFGA QSVFHVLADN NPRNIEEMFD ALQKGQIHFI EMGYEPGWAA L RRLKKILP ...文字列: MSRVLLCSAG HSSMVVPEAF HAVPEGFEEV HVFTTDSEKF NPVVLNDFFH SLPNVRFSIT KCHGLADILN ERDFEFYQEM LWQWYLTKM PDNELPYVCL SGGIKSMSAS LQKAATLFGA QSVFHVLADN NPRNIEEMFD ALQKGQIHFI EMGYEPGWAA L RRLKKILP INEGCSRDNF KPLISKSIEE ILSNVKIMAS DTGKSNQLPF PSLAILPPIA QQWLQLPLSA NDGAWIQNLP KV DLHCHLG GFATSGSLLD QVRGAASEPD LIDRTFSPQE IAGWPRSHKS ISLDKYMELG NANGSKLLKD KGCLIRQVEL LYQ SLVNDN VAYAEIRCSP NNYADKNKNR SAWVVLQDIN DTFTRLITEA KQKNQFYCHV NLLVIASRKF SGDLSDISKH LALA ITAMQ QGEGVCRIVG VDLAGFENKE TRASYYEHDF KAVHRCGLAV TAHAGENDDP EGIWQAVYSL HARRLGHALN LLEAP DLMR TVIERKIGVE MCPYANYQIK GFAPMPNFSA LYPLKKYLEA GILVSVNTDN IGISGANLSE NLLILADLCP GISRMD VLT IIRNSIETAF ISHDFRMELL KFFDRKIYDV CLISIKN UniProtKB: Adenosine deaminase domain-containing protein |
-分子 #2: RNA (5'-R(P*AP*AP*AP*AP*AP*A)-3')
分子 | 名称: RNA (5'-R(P*AP*AP*AP*AP*AP*A)-3') / タイプ: rna / ID: 2 / コピー数: 3 |
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由来(天然) | 生物種: Bacteroidales bacterium (バクテリア) |
分子量 | 理論値: 1.930277 KDa |
配列 | 文字列: AAAAAA |
-分子 #3: ADENOSINE-5'-TRIPHOSPHATE
分子 | 名称: ADENOSINE-5'-TRIPHOSPHATE / タイプ: ligand / ID: 3 / コピー数: 12 / 式: ATP |
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分子量 | 理論値: 507.181 Da |
Chemical component information | ChemComp-ATP: |
-分子 #4: MAGNESIUM ION
分子 | 名称: MAGNESIUM ION / タイプ: ligand / ID: 4 / コピー数: 6 / 式: MG |
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分子量 | 理論値: 24.305 Da |
-実験情報
-構造解析
手法 | クライオ電子顕微鏡法 |
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解析 | 単粒子再構成法 |
試料の集合状態 | particle |
-試料調製
濃度 | 1.7 mg/mL |
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緩衝液 | pH: 8 詳細: 25 mM Hepes pH 8, 500 mM NaCl, 2 mM Beta-Mercaptoethanol and 5 percentage glycerol |
グリッド | モデル: UltrAuFoil R1.2/1.3 / 材質: GOLD / メッシュ: 300 / 前処理 - タイプ: GLOW DISCHARGE / 前処理 - 時間: 60 sec. |
凍結 | 凍結剤: ETHANE / チャンバー内湿度: 100 % / チャンバー内温度: 277.15 K / 装置: FEI VITROBOT MARK IV / 詳細: Blot time 2.5 s, Wait time 12s, Blot force 0.. |
詳細 | Cad1 protein mixed with cA6 and ATP. Incubated overnight at 310.15 K. |
-電子顕微鏡法
顕微鏡 | FEI TITAN KRIOS |
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特殊光学系 | エネルギーフィルター - スリット幅: 20 eV |
撮影 | フィルム・検出器のモデル: GATAN K3 (6k x 4k) / 平均電子線量: 61.0 e/Å2 |
電子線 | 加速電圧: 300 kV / 電子線源: FIELD EMISSION GUN |
電子光学系 | 照射モード: FLOOD BEAM / 撮影モード: BRIGHT FIELD / Cs: 2.7 mm / 最大 デフォーカス(公称値): 2.4 µm / 最小 デフォーカス(公称値): 0.8 µm |
試料ステージ | ホルダー冷却材: NITROGEN |
実験機器 | モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company |
+画像解析
-原子モデル構築 1
初期モデル | Chain - Source name: AlphaFold / Chain - Initial model type: in silico model |
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精密化 | プロトコル: AB INITIO MODEL |
得られたモデル | PDB-9cdb: |