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基本情報
登録情報 | データベース: EMDB / ID: EMD-1200 | |||||||||
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タイトル | Automated cryoEM data acquisition and analysis of 284742 particles of GroEL. | |||||||||
![]() | This is a three-dimensional volume of GroEL reconstructed to 7.8 Angstroms resolution | |||||||||
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生物種 | ![]() ![]() | |||||||||
手法 | 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 7.8 Å | |||||||||
![]() | Stagg SM / Pulokas J / Fellmann D / Cheng A / Quispe JD / Mallick SP / Avila RM / Carragher B / Potter CS | |||||||||
![]() | ![]() タイトル: Automated cryoEM data acquisition and analysis of 284742 particles of GroEL. 著者: Scott M Stagg / Gabriel C Lander / James Pulokas / Denis Fellmann / Anchi Cheng / Joel D Quispe / Satya P Mallick / Radomir M Avila / Bridget Carragher / Clinton S Potter / ![]() 要旨: One of the goals in developing our automated electron microscopy data acquisition system, Leginon, was to improve both the ease of use and the throughput of the process of acquiring low dose images ...One of the goals in developing our automated electron microscopy data acquisition system, Leginon, was to improve both the ease of use and the throughput of the process of acquiring low dose images of macromolecular specimens embedded in vitreous ice. In this article, we demonstrate the potential of the Leginon system for high-throughput data acquisition by describing an experiment in which we acquired images of more than 280,000 particles of GroEL in a single 25 h session at the microscope. We also demonstrate the potential for an automated pipeline for molecular microscopy by showing that these particles can be subjected to completely automated procedures to reconstruct a three-dimensional (3D) density map to a resolution better than 8 A. In generating the 3D maps, we used a variety of metadata associated with the data acquisition and processing steps to sort and select the particles. These metadata provide a number of insights into factors that affect the quality of the acquired images and the resulting reconstructions. In particular, we show that the resolution of the reconstructed 3D density maps improves with decreasing ice thickness. These data provide a basis for assessing the capabilities of high-throughput macromolecular microscopy. | |||||||||
履歴 |
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構造の表示
ムービー |
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構造ビューア | EMマップ: ![]() ![]() ![]() |
添付画像 |
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ダウンロードとリンク
-EMDBアーカイブ
マップデータ | ![]() | 4.9 MB | ![]() | |
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ヘッダ (付随情報) | ![]() ![]() | 10.3 KB 10.3 KB | 表示 表示 | ![]() |
画像 | ![]() | 18.6 KB | ||
アーカイブディレクトリ | ![]() ![]() | HTTPS FTP |
-関連構造データ
類似構造データ | |
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電子顕微鏡画像生データ | ![]() |
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リンク
EMDBのページ | ![]() ![]() |
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マップ
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注釈 | This is a three-dimensional volume of GroEL reconstructed to 7.8 Angstroms resolution | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
ボクセルのサイズ | X=Y=Z: 2.263 Å | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
密度 |
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対称性 | 空間群: 1 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
詳細 | EMDB XML:
CCP4マップ ヘッダ情報:
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-添付データ
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試料の構成要素
-全体 : E.coli GroEL
全体 | 名称: E.coli GroEL |
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要素 |
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-超分子 #1000: E.coli GroEL
超分子 | 名称: E.coli GroEL / タイプ: sample / ID: 1000 / 集合状態: homotetradecamer / Number unique components: 1 |
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分子量 | 実験値: 800 KDa / 理論値: 800 KDa / 手法: Calculated molecular weight from sequence |
-分子 #1: GroEL
分子 | 名称: GroEL / タイプ: protein_or_peptide / ID: 1 / コピー数: 14 / 集合状態: homotetradecamer / 組換発現: Yes |
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由来(天然) | 生物種: ![]() ![]() |
分子量 | 実験値: 800 KDa / 理論値: 800 KDa |
組換発現 | 生物種: ![]() ![]() |
-実験情報
-構造解析
手法 | クライオ電子顕微鏡法 |
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![]() | 単粒子再構成法 |
試料の集合状態 | particle |
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試料調製
濃度 | 3.2 mg/mL |
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緩衝液 | pH: 7.5 / 詳細: 100mM Hepes, 10mM Mg(OAc)2, 10mM KOAc, 2mM DTT |
グリッド | 詳細: Protochips C-flat grid: holey carbon with 2um holes and 2um spacing 400 mesh copper grid |
凍結 | 凍結剤: ETHANE / チャンバー内湿度: 100 % / チャンバー内温度: 93 K / 装置: OTHER 詳細: Vitrification instrument: FEI Vitrobot. Grid plasma cleaned for 20s with Fischione 1020 plasma cleaner using 75% Argon 25% Oxygen mix. 手法: Temperature of chamber was 4 degrees C. 0 seconds drain time. Single blot. 0 mm offset. 4 ul sample applied to grid. Blot for 3.5 seconds before plunging. |
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電子顕微鏡法
顕微鏡 | FEI TECNAI F20 |
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温度 | 平均: 94 K |
アライメント法 | Legacy - 非点収差: objective lens astigmatism was corrected at 50,000X magnification |
日付 | 2005年5月19日 |
撮影 | カテゴリ: CCD フィルム・検出器のモデル: GATAN ULTRASCAN 4000 (4k x 4k) 実像数: 552 / 平均電子線量: 11.5 e/Å2 / ビット/ピクセル: 16 |
Tilt angle min | 0 |
Tilt angle max | 0 |
電子線 | 加速電圧: 120 kV / 電子線源: ![]() |
電子光学系 | 照射モード: FLOOD BEAM / 撮影モード: BRIGHT FIELD / Cs: 2 mm / 最大 デフォーカス(公称値): 2.28 µm / 最小 デフォーカス(公称値): 0.5 µm / 倍率(公称値): 50000 |
試料ステージ | 試料ホルダー: Gatan 626 side entry cryo-stage / 試料ホルダーモデル: GATAN LIQUID NITROGEN |
実験機器 | ![]() モデル: Tecnai F20 / 画像提供: FEI Company |
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画像解析
詳細 | The images were acquired using the Leginon automated data aquisition system. The particles were automatically selected using the Selexon package. The CTF was automatically estimated using the ACE package |
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CTF補正 | 詳細: Phase correction for each particle. Amplitude correction for the final volume |
最終 再構成 | 想定した対称性 - 点群: D7 (2回x7回 2面回転対称) アルゴリズム: OTHER / 解像度のタイプ: BY AUTHOR / 解像度: 7.8 Å / 解像度の算出法: FSC 0.5 CUT-OFF / ソフトウェア - 名称: EMAN / 使用した粒子像数: 158390 |
最終 2次元分類 | クラス数: 333 |