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-基本情報
登録情報 | データベース: EMDB / ID: EMD-31541 | ||||||||||||
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タイトル | CryoEM Structures of Reconstituted V-ATPase, Oxr1 bound V1 | ||||||||||||
マップデータ | |||||||||||||
試料 |
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キーワード | ATPase / proton pump / rotary motor enzyme / membrane protein / MOTOR PROTEIN | ||||||||||||
機能・相同性 | 機能・相同性情報 vacuole-mitochondrion membrane contact site / protein retention in Golgi apparatus / Insulin receptor recycling / Transferrin endocytosis and recycling / ROS and RNS production in phagocytes / protein-containing complex disassembly / Amino acids regulate mTORC1 / Golgi lumen acidification / proteasome storage granule assembly / pexophagy ...vacuole-mitochondrion membrane contact site / protein retention in Golgi apparatus / Insulin receptor recycling / Transferrin endocytosis and recycling / ROS and RNS production in phagocytes / protein-containing complex disassembly / Amino acids regulate mTORC1 / Golgi lumen acidification / proteasome storage granule assembly / pexophagy / endosomal lumen acidification / vacuolar proton-transporting V-type ATPase, V1 domain / vacuolar proton-transporting V-type ATPase complex / proton-transporting V-type ATPase complex / vacuolar acidification / fungal-type vacuole membrane / ATP metabolic process / Neutrophil degranulation / proton-transporting ATPase activity, rotational mechanism / proton transmembrane transport / transmembrane transport / intracellular calcium ion homeostasis / cytoplasmic stress granule / response to oxidative stress / membrane raft / Golgi membrane / mitochondrion / ATP binding / membrane / nucleus / cytoplasm 類似検索 - 分子機能 | ||||||||||||
生物種 | Saccharomyces cerevisiae S288c (パン酵母) / Saccharomyces cerevisiae S288C (パン酵母) | ||||||||||||
手法 | 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 3.8 Å | ||||||||||||
データ登録者 | Khan MM / Lee S | ||||||||||||
資金援助 | 米国, 3件
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引用 | ジャーナル: EMBO J / 年: 2022 タイトル: Oxidative stress protein Oxr1 promotes V-ATPase holoenzyme disassembly in catalytic activity-independent manner. 著者: Md Murad Khan / Seowon Lee / Sergio Couoh-Cardel / Rebecca A Oot / Hyunmin Kim / Stephan Wilkens / Soung-Hun Roh / 要旨: The vacuolar ATPase (V-ATPase) is a rotary motor proton pump that is regulated by an assembly equilibrium between active holoenzyme and autoinhibited V -ATPase and V proton channel subcomplexes. ...The vacuolar ATPase (V-ATPase) is a rotary motor proton pump that is regulated by an assembly equilibrium between active holoenzyme and autoinhibited V -ATPase and V proton channel subcomplexes. Here, we report cryo-EM structures of yeast V-ATPase assembled in vitro from lipid nanodisc reconstituted V and mutant V . Our analysis identified holoenzymes in three active rotary states, indicating that binding of V to V provides sufficient free energy to overcome V autoinhibition. Moreover, the structures suggest that the unequal spacing of V 's proton-carrying glutamic acid residues serves to alleviate the symmetry mismatch between V and V motors, a notion that is supported by mutagenesis experiments. We also uncover a structure of free V bound to Oxr1, a conserved but poorly characterized factor involved in the oxidative stress response. Biochemical experiments show that Oxr1 inhibits V -ATPase and causes disassembly of the holoenzyme, suggesting that Oxr1 plays a direct role in V-ATPase regulation. | ||||||||||||
履歴 |
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-構造の表示
ムービー |
ムービービューア |
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構造ビューア | EMマップ: SurfViewMolmilJmol/JSmol |
添付画像 |
-ダウンロードとリンク
-EMDBアーカイブ
マップデータ | emd_31541.map.gz | 185.5 MB | EMDBマップデータ形式 | |
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ヘッダ (付随情報) | emd-31541-v30.xml emd-31541.xml | 21.7 KB 21.7 KB | 表示 表示 | EMDBヘッダ |
画像 | emd_31541.png | 175.6 KB | ||
Filedesc metadata | emd-31541.cif.gz | 7.6 KB | ||
アーカイブディレクトリ | http://ftp.pdbj.org/pub/emdb/structures/EMD-31541 ftp://ftp.pdbj.org/pub/emdb/structures/EMD-31541 | HTTPS FTP |
-検証レポート
文書・要旨 | emd_31541_validation.pdf.gz | 554.9 KB | 表示 | EMDB検証レポート |
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文書・詳細版 | emd_31541_full_validation.pdf.gz | 554.5 KB | 表示 | |
XML形式データ | emd_31541_validation.xml.gz | 7.3 KB | 表示 | |
CIF形式データ | emd_31541_validation.cif.gz | 8.3 KB | 表示 | |
アーカイブディレクトリ | https://ftp.pdbj.org/pub/emdb/validation_reports/EMD-31541 ftp://ftp.pdbj.org/pub/emdb/validation_reports/EMD-31541 | HTTPS FTP |
-関連構造データ
-リンク
EMDBのページ | EMDB (EBI/PDBe) / EMDataResource |
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「今月の分子」の関連する項目 |
-マップ
ファイル | ダウンロード / ファイル: emd_31541.map.gz / 形式: CCP4 / 大きさ: 244.1 MB / タイプ: IMAGE STORED AS FLOATING POINT NUMBER (4 BYTES) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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投影像・断面図 | 画像のコントロール
画像は Spider により作成 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
ボクセルのサイズ | X=Y=Z: 1.08 Å | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
密度 |
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対称性 | 空間群: 1 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
詳細 | EMDB XML:
CCP4マップ ヘッダ情報:
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-添付データ
-試料の構成要素
+全体 : Oxr1 bound V1 subcomplex of Yeast Vacuolar ATPase
+超分子 #1: Oxr1 bound V1 subcomplex of Yeast Vacuolar ATPase
+超分子 #2: Yeast Vacuolar ATPase subunit C
+超分子 #3: Yeast V-type proton ATPase subunits
+分子 #1: V-type proton ATPase subunit C
+分子 #2: V-type proton ATPase subunit E
+分子 #3: V-type proton ATPase subunit G
+分子 #4: Yeast Vacuolar ATPase A subunit
+分子 #5: V-type proton ATPase subunit B
+分子 #6: V-type proton ATPase subunit D
+分子 #7: V-type proton ATPase subunit F
+分子 #8: Oxidation resistance protein 1
-実験情報
-構造解析
手法 | クライオ電子顕微鏡法 |
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解析 | 単粒子再構成法 |
試料の集合状態 | particle |
-試料調製
濃度 | 1 mg/mL |
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緩衝液 | pH: 7.4 |
グリッド | モデル: UltrAuFoil / 材質: GOLD / 前処理 - タイプ: GLOW DISCHARGE / 前処理 - 時間: 20 sec. / 前処理 - 雰囲気: AIR |
凍結 | 凍結剤: ETHANE / チャンバー内湿度: 90 % / チャンバー内温度: 277 K / 装置: HOMEMADE PLUNGER |
-電子顕微鏡法
顕微鏡 | TFS KRIOS |
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特殊光学系 | エネルギーフィルター - 名称: GIF Bioquantum / エネルギーフィルター - スリット幅: 20 eV |
撮影 | フィルム・検出器のモデル: GATAN K2 SUMMIT (4k x 4k) 検出モード: COUNTING / 実像数: 20447 / 平均露光時間: 10.0 sec. / 平均電子線量: 50.0 e/Å2 |
電子線 | 加速電圧: 300 kV / 電子線源: FIELD EMISSION GUN |
電子光学系 | 照射モード: FLOOD BEAM / 撮影モード: BRIGHT FIELD / 最大 デフォーカス(公称値): 2.5 µm / 最小 デフォーカス(公称値): 1.0 µm |
実験機器 | モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company |
-画像解析
初期モデル | モデルのタイプ: INSILICO MODEL |
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最終 再構成 | アルゴリズム: BACK PROJECTION / 解像度のタイプ: BY AUTHOR / 解像度: 3.8 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / ソフトウェア - 名称: cryoSPARC / 使用した粒子像数: 20447 |
初期 角度割当 | タイプ: MAXIMUM LIKELIHOOD |
最終 角度割当 | タイプ: MAXIMUM LIKELIHOOD / ソフトウェア - 名称: cryoSPARC |
-原子モデル構築 1
精密化 | 空間: REAL / プロトコル: FLEXIBLE FIT |
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得られたモデル | PDB-7fde: |