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-基本情報
登録情報 | データベース: PDB / ID: 6ulc | |||||||||
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タイトル | Structure of full-length, fully glycosylated, non-modified HIV-1 gp160 bound to PG16 Fab at a nominal resolution of 4.6 Angstrom | |||||||||
要素 |
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キーワード | VIRAL PROTEIN/IMMUNE SYSTEM / HIV-1 / ENV / gp160 / PG16 / VIRAL PROTEIN-IMMUNE SYSTEM complex | |||||||||
機能・相同性 | 機能・相同性情報 host cell endosome membrane / clathrin-dependent endocytosis of virus by host cell / virus-mediated perturbation of host defense response / fusion of virus membrane with host endosome membrane / viral envelope / apoptotic process / host cell plasma membrane / structural molecule activity / virion membrane / plasma membrane 類似検索 - 分子機能 | |||||||||
生物種 | Human immunodeficiency virus 1 (ヒト免疫不全ウイルス) Homo sapiens (ヒト) | |||||||||
手法 | 電子顕微鏡法 / 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 4.6 Å | |||||||||
データ登録者 | Pan, J. / Chen, B. / Harrison, S.C. | |||||||||
資金援助 | 米国, 2件
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引用 | ジャーナル: J Mol Biol / 年: 2020 タイトル: Cryo-EM Structure of Full-length HIV-1 Env Bound With the Fab of Antibody PG16. 著者: Junhua Pan / Hanqin Peng / Bing Chen / Stephen C Harrison / 要旨: The HIV-1 envelope protein (Env) is the target of neutralizing antibodies and the template for vaccine immunogen design. The dynamic conformational equilibrium of trimeric Env influences its ...The HIV-1 envelope protein (Env) is the target of neutralizing antibodies and the template for vaccine immunogen design. The dynamic conformational equilibrium of trimeric Env influences its antigenicity and potential immunogenicity. Antibodies that bind at the trimer apex stabilize a "closed" conformation characteristic of the most difficult to neutralize isolates. A goal of vaccine development is therefore to mimic the closed conformation in a designed immunogen. A disulfide-stabilized, trimeric Env ectodomain-the "SOSIP" construct-has many of the relevant properties; it is also particularly suitable for structure determination. Some single-molecule studies have, however, suggested that the SOSIP trimer is not a good representation of Env on the surface of a virion or an infected cell. We isolated Env (fully cleaved to gp120 and gp41) from the surface of expressing cells using tagged, apex-binding Fab PG16 and determined the structure of the PG16-Env complex by cryo-EM to an overall resolution of 4.6 Å. Placing the only purification tag on the Fab ensured that the isolated Env was continuously stabilized in its closed, native conformation. The Env structure in this complex corresponds closely to the SOSIP structures determined by both x-ray crystallography and cryo-EM. Although the membrane-interacting elements are not resolved in our reconstruction, we can make inferences about the connection between ectodomain and membrane-proximal external region (MPER) by reference to the published cryo-tomography structure of an Env "spike" and the NMR structure of the MPER-transmembrane segment. We discuss these results in view of the conflicting interpretations in the literature. | |||||||||
履歴 |
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-構造の表示
ムービー |
ムービービューア |
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構造ビューア | 分子: MolmilJmol/JSmol |
-ダウンロードとリンク
-ダウンロード
PDBx/mmCIF形式 | 6ulc.cif.gz | 471.4 KB | 表示 | PDBx/mmCIF形式 |
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PDB形式 | pdb6ulc.ent.gz | 382.1 KB | 表示 | PDB形式 |
PDBx/mmJSON形式 | 6ulc.json.gz | ツリー表示 | PDBx/mmJSON形式 | |
その他 | その他のダウンロード |
-検証レポート
文書・要旨 | 6ulc_validation.pdf.gz | 3 MB | 表示 | wwPDB検証レポート |
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文書・詳細版 | 6ulc_full_validation.pdf.gz | 3 MB | 表示 | |
XML形式データ | 6ulc_validation.xml.gz | 68.1 KB | 表示 | |
CIF形式データ | 6ulc_validation.cif.gz | 104.1 KB | 表示 | |
アーカイブディレクトリ | https://data.pdbj.org/pub/pdb/validation_reports/ul/6ulc ftp://data.pdbj.org/pub/pdb/validation_reports/ul/6ulc | HTTPS FTP |
-関連構造データ
-リンク
-集合体
登録構造単位 |
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1 |
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-要素
-タンパク質 , 2種, 6分子 ACEBDF
#1: タンパク質 | 分子量: 57173.941 Da / 分子数: 3 断片: signal peptide + UNP residues 28-503,signal peptide + UNP residues 28-503 由来タイプ: 組換発現 由来: (組換発現) Human immunodeficiency virus 1 (ヒト免疫不全ウイルス) 株: 92UG037.8 / 遺伝子: env / プラスミド: pVRC-IRES-Puro / 細胞株 (発現宿主): HEK293T / 発現宿主: Homo sapiens (ヒト) / 参照: UniProt: Q71014 #2: タンパク質 | 分子量: 40404.629 Da / 分子数: 3 / 断片: UNP residues 504-856 / 由来タイプ: 組換発現 由来: (組換発現) Human immunodeficiency virus 1 (ヒト免疫不全ウイルス) 遺伝子: env / プラスミド: pVRC-IRES-Puro / 細胞株 (発現宿主): HEK293T / 発現宿主: Homo sapiens (ヒト) / 参照: UniProt: Q71014 |
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-抗体 , 2種, 2分子 HL
#3: 抗体 | 分子量: 31952.703 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Homo sapiens (ヒト) / プラスミド: pVRC-IRES-Puro / 細胞株 (発現宿主): HEK293T / 発現宿主: Homo sapiens (ヒト) |
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#4: 抗体 | 分子量: 26424.229 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Homo sapiens (ヒト) / プラスミド: pVRC-IRES-Puro / 細胞株 (発現宿主): HEK293T / 発現宿主: Homo sapiens (ヒト) |
-糖 , 8種, 76分子
#5: 多糖 | beta-D-galactopyranose-(1-4)-2-acetamido-2-deoxy-beta-D-glucopyranose-(1-2)-alpha-D-mannopyranose- ...beta-D-galactopyranose-(1-4)-2-acetamido-2-deoxy-beta-D-glucopyranose-(1-2)-alpha-D-mannopyranose-(1-6)-beta-D-mannopyranose-(1-4)-2-acetamido-2-deoxy-beta-D-glucopyranose-(1-4)-2-acetamido-2-deoxy-beta-D-glucopyranose | ||||||||||||
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#6: 多糖 | #7: 多糖 | beta-D-mannopyranose-(1-4)-2-acetamido-2-deoxy-beta-D-glucopyranose-(1-4)-2-acetamido-2-deoxy-beta- ...beta-D-mannopyranose-(1-4)-2-acetamido-2-deoxy-beta-D-glucopyranose-(1-4)-2-acetamido-2-deoxy-beta-D-glucopyranose #8: 多糖 | 2-acetamido-2-deoxy-beta-D-glucopyranose-(1-4)-2-acetamido-2-deoxy-beta-D-glucopyranose #9: 多糖 | 2-acetamido-2-deoxy-beta-D-glucopyranose-(1-4)-[alpha-L-fucopyranose-(1-6)]2-acetamido-2-deoxy-beta- ...2-acetamido-2-deoxy-beta-D-glucopyranose-(1-4)-[alpha-L-fucopyranose-(1-6)]2-acetamido-2-deoxy-beta-D-glucopyranose | #10: 多糖 | alpha-D-mannopyranose-(1-3)-[alpha-D-mannopyranose-(1-6)]alpha-D-mannopyranose-(1-6)-[alpha-D- ...alpha-D-mannopyranose-(1-3)-[alpha-D-mannopyranose-(1-6)]alpha-D-mannopyranose-(1-6)-[alpha-D-mannopyranose-(1-3)]beta-D-mannopyranose-(1-4)-2-acetamido-2-deoxy-beta-D-glucopyranose-(1-4)-2-acetamido-2-deoxy-beta-D-glucopyranose | #11: 多糖 | beta-D-mannopyranose-(1-4)-2-acetamido-2-deoxy-beta-D-glucopyranose-(1-4)-[alpha-L-fucopyranose-(1- ...beta-D-mannopyranose-(1-4)-2-acetamido-2-deoxy-beta-D-glucopyranose-(1-4)-[alpha-L-fucopyranose-(1-6)]2-acetamido-2-deoxy-beta-D-glucopyranose | #12: 糖 | ChemComp-NAG / |
-詳細
研究の焦点であるリガンドがあるか | N |
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Has protein modification | Y |
-実験情報
-実験
実験 | 手法: 電子顕微鏡法 |
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EM実験 | 試料の集合状態: PARTICLE / 3次元再構成法: 単粒子再構成法 |
-試料調製
構成要素 |
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分子量 | 値: 0.53 MDa / 実験値: NO | ||||||||||||||||||||||||||||
由来(天然) |
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由来(組換発現) |
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緩衝液 | pH: 7.5 | ||||||||||||||||||||||||||||
緩衝液成分 |
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試料 | 濃度: 0.3 mg/ml / 包埋: NO / シャドウイング: NO / 染色: NO / 凍結: YES 詳細: This sample was monodisperse (stoichiometry of 3:1 gp160:Fab). | ||||||||||||||||||||||||||||
試料支持 | グリッドの材料: COPPER / グリッドのサイズ: 200 divisions/in. / グリッドのタイプ: Quantifoil R1.2/1.3 | ||||||||||||||||||||||||||||
急速凍結 | 装置: FEI VITROBOT MARK I / 凍結剤: ETHANE / 湿度: 100 % / 凍結前の試料温度: 293 K / 詳細: 4.2 second blot before plunging |
-電子顕微鏡撮影
実験機器 | モデル: Tecnai Polara / 画像提供: FEI Company |
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顕微鏡 | モデル: FEI POLARA 300 |
電子銃 | 電子線源: FIELD EMISSION GUN / 加速電圧: 300 kV / 照射モード: SPOT SCAN |
電子レンズ | モード: BRIGHT FIELD / 倍率(公称値): 29000 X / 倍率(補正後): 30488 X / 最大 デフォーカス(公称値): 3000 nm / 最小 デフォーカス(公称値): 1000 nm / Calibrated defocus min: 800 nm / Cs: 2.26 mm / C2レンズ絞り径: 50 µm / アライメント法: COMA FREE |
試料ホルダ | 凍結剤: NITROGEN / 試料ホルダーモデル: OTHER |
撮影 | 平均露光時間: 0.125 sec. / 電子線照射量: 40 e/Å2 / 検出モード: SUPER-RESOLUTION フィルム・検出器のモデル: GATAN K2 SUMMIT (4k x 4k) 撮影したグリッド数: 2 / 実像数: 8138 |
画像スキャン | サンプリングサイズ: 2.5 µm / 動画フレーム数/画像: 40 / 利用したフレーム数/画像: 1-40 |
-解析
ソフトウェア | 名称: PHENIX / バージョン: 1.16_3549: / 分類: 精密化 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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EMソフトウェア |
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CTF補正 | タイプ: NONE | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
対称性 | 点対称性: C1 (非対称) | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
3次元再構成 | 解像度: 4.6 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / 粒子像の数: 492995 / アルゴリズム: FOURIER SPACE / 対称性のタイプ: POINT | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
原子モデル構築 | B value: 300 / プロトコル: AB INITIO MODEL / 空間: REAL | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
拘束条件 |
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