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基本情報
登録情報 | データベース: PDB / ID: 8vr8 | ||||||||||||
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タイトル | Structure of Mycobacterium smegmatis 50S ribosomal subunit bound to HflX and chloramphenicol:50S-HflX-B-Clm | ||||||||||||
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![]() | RIBOSOME / ribosome splitting / Mycobacterium smegmatis 50S / HflX / disordered 23S rRNA helices / chloramphenicol / translation | ||||||||||||
機能・相同性 | ![]() large ribosomal subunit / transferase activity / ribosome binding / 5S rRNA binding / ribosomal large subunit assembly / large ribosomal subunit rRNA binding / cytosolic large ribosomal subunit / cytoplasmic translation / tRNA binding / negative regulation of translation ...large ribosomal subunit / transferase activity / ribosome binding / 5S rRNA binding / ribosomal large subunit assembly / large ribosomal subunit rRNA binding / cytosolic large ribosomal subunit / cytoplasmic translation / tRNA binding / negative regulation of translation / rRNA binding / ribosome / structural constituent of ribosome / translation / ribonucleoprotein complex / GTPase activity / mRNA binding / GTP binding / metal ion binding / cytoplasm 類似検索 - 分子機能 | ||||||||||||
生物種 | ![]() | ||||||||||||
手法 | 電子顕微鏡法 / 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 3.25 Å | ||||||||||||
![]() | Majumdar, S. / Koripella, R.K. / Sharma, M.R. / Manjari, S.R. / Banavali, N.K. / Agrawal, R.K. | ||||||||||||
資金援助 | ![]()
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![]() | ![]() タイトル: HflX-mediated drug resistance through ribosome splitting and rRNA disordering in mycobacteria. 著者: Soneya Majumdar / Amuliya Kashyap / Ravi K Koripella / Manjuli R Sharma / Kelley Hurst-Hess / Swati R Manjari / Nilesh K Banavali / Pallavi Ghosh / Rajendra K Agrawal / ![]() 要旨: HflX is a highly conserved ribosome-associated GTPase implicated in rescuing stalled ribosomes and mediating antibiotic resistance in several bacteria, including macrolide-lincosamide antibiotic ...HflX is a highly conserved ribosome-associated GTPase implicated in rescuing stalled ribosomes and mediating antibiotic resistance in several bacteria, including macrolide-lincosamide antibiotic resistance in mycobacteria. Mycobacterial HflXs carry a distinct N-terminal extension (NTE) and a small insertion, as compared to their eubacterial homologs. Here, we present several high-resolution cryo-EM structures of mycobacterial HflX in complex with the 70S ribosome and its 50S subunit, with and without antibiotics. These structures reveal a distinct mechanism for HflX-mediated ribosome splitting and antibiotic resistance in mycobacteria. Our findings indicate that the NTE of mycobacterial HflX induces persistent disordering of multiple 23S rRNA helices, facilitating the dissociation of the 70S ribosome and generating an inactive pool of 50S subunits. During this process, HflX undergoes a large conformational change that stabilizes its NTE. Mycobacterial HflX also acts as an anti-association factor by binding to predissociated 50S subunits. Our structures show that a mycobacteria-specific insertion in HflX reaches far into the peptidyl transferase center (PTC), such that it would overlap with the ribosome-bound macrolide antibiotics. However, in the presence of antibiotics, this insertion retracts, adjusts around, and interacts with the antibiotic molecules. These results suggest that mycobacterial HflX is agnostic to antibiotic presence in the PTC. It mediates antibiotic resistance by splitting antibiotic-stalled 70S ribosomes and inactivating the resulting 50S subunits. | ||||||||||||
履歴 |
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構造の表示
構造ビューア | 分子: ![]() ![]() |
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ダウンロードとリンク
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ダウンロード
PDBx/mmCIF形式 | ![]() | 2.3 MB | 表示 | ![]() |
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PDB形式 | ![]() | 1.8 MB | 表示 | ![]() |
PDBx/mmJSON形式 | ![]() | ツリー表示 | ![]() | |
その他 | ![]() |
-検証レポート
アーカイブディレクトリ | ![]() ![]() | HTTPS FTP |
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-関連構造データ
関連構造データ | ![]() 43477MC ![]() 8vioC ![]() 8vk0C ![]() 8vk7C ![]() 8vkiC ![]() 8vkwC ![]() 8vpkC ![]() 8vr4C ![]() 8vrlC C: 同じ文献を引用 ( M: このデータのモデリングに利用したマップデータ |
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類似構造データ | 類似検索 - 機能・相同性 ![]() |
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リンク
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集合体
登録構造単位 | ![]()
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1 |
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要素
+50S Ribosomal Protein ... , 27種, 27分子 23CDEGHIKLMOQRSTUVWXYZbcdef
-タンパク質 , 2種, 2分子 4N
#3: タンパク質 | 分子量: 50637.094 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 由来: (組換発現) ![]() 遺伝子: hflX, MSMEG_2736 発現宿主: ![]() ![]() 参照: UniProt: A0QVY1 |
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#14: タンパク質 | 分子量: 15774.240 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 由来: (天然) ![]() 参照: UniProt: A0QSD8 |
-RNA鎖 , 2種, 2分子 BA
#4: RNA鎖 | 分子量: 38061.816 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 由来: (天然) ![]() 参照: GenBank: 118168627 |
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#31: RNA鎖 | 分子量: 1012140.938 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 由来: (天然) ![]() 参照: GenBank: 118168627 |
-非ポリマー , 2種, 2分子 


#32: 化合物 | ChemComp-GCP / |
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#33: 化合物 | ChemComp-CLM / |
-詳細
研究の焦点であるリガンドがあるか | Y |
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Has protein modification | N |
-実験情報
-実験
実験 | 手法: 電子顕微鏡法 |
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EM実験 | 試料の集合状態: PARTICLE / 3次元再構成法: 単粒子再構成法 |
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試料調製
構成要素 | 名称: Mycobacterium smegmatis 50S ribosome bound to HflX-GMPPCP complex and Chloramphenicol タイプ: RIBOSOME / Entity ID: #1-#31 / 由来: NATURAL | |||||||||||||||||||||||||
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由来(天然) | 生物種: ![]() | |||||||||||||||||||||||||
緩衝液 | pH: 7.5 詳細: 20 mM HEPES-K at pH 7.5, 30 mM ammonium chloride, 10 mM magnesium chloride, and 5 mM beta-mercaptoethanol | |||||||||||||||||||||||||
緩衝液成分 |
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試料 | 包埋: NO / シャドウイング: NO / 染色: NO / 凍結: YES | |||||||||||||||||||||||||
試料支持 | グリッドの材料: COPPER / グリッドのサイズ: 300 divisions/in. / グリッドのタイプ: Quantifoil R1.2/1.3 | |||||||||||||||||||||||||
急速凍結 | 装置: FEI VITROBOT MARK IV / 凍結剤: ETHANE / 湿度: 100 % / 凍結前の試料温度: 277.15 K |
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電子顕微鏡撮影
実験機器 | ![]() モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company |
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顕微鏡 | モデル: TFS KRIOS |
電子銃 | 電子線源: ![]() |
電子レンズ | モード: BRIGHT FIELD / 倍率(公称値): 105000 X / 最大 デフォーカス(公称値): 2500 nm / 最小 デフォーカス(公称値): 800 nm / Cs: 2.7 mm |
試料ホルダ | 試料ホルダーモデル: FEI TITAN KRIOS AUTOGRID HOLDER |
撮影 | 電子線照射量: 70.14 e/Å2 / 検出モード: COUNTING フィルム・検出器のモデル: GATAN K2 SUMMIT (4k x 4k) 撮影したグリッド数: 1 / 実像数: 14374 |
画像スキャン | 動画フレーム数/画像: 50 / 利用したフレーム数/画像: 1-50 |
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解析
EMソフトウェア |
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CTF補正 | タイプ: PHASE FLIPPING AND AMPLITUDE CORRECTION | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
粒子像の選択 | 選択した粒子像数: 2117095 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
3次元再構成 | 解像度: 3.25 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / 粒子像の数: 116149 / 対称性のタイプ: POINT | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
原子モデル構築 | B value: 75.2 / プロトコル: FLEXIBLE FIT / 空間: REAL / Target criteria: Cross-correlation coefficient | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
原子モデル構築 |
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