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- 基本情報
基本情報
| 登録情報 | データベース: PDB / ID: 5u9f | |||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| タイトル | 3.2 A cryo-EM ArfA-RF2 ribosome rescue complex (Structure II) | |||||||||
|  要素 | 
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|  キーワード | RIBOSOME / ARFA RF2 ribosome rescue complex | |||||||||
| 機能・相同性 |  機能・相同性情報 translation release factor activity, codon specific / negative regulation of cytoplasmic translational initiation / stringent response / ribosomal large subunit binding / ornithine decarboxylase inhibitor activity / transcription antitermination factor activity, RNA binding / misfolded RNA binding / Group I intron splicing / RNA folding / transcriptional attenuation ...translation release factor activity, codon specific / negative regulation of cytoplasmic translational initiation / stringent response / ribosomal large subunit binding / ornithine decarboxylase inhibitor activity / transcription antitermination factor activity, RNA binding / misfolded RNA binding / Group I intron splicing / RNA folding / transcriptional attenuation / endoribonuclease inhibitor activity / positive regulation of ribosome biogenesis / RNA-binding transcription regulator activity / translational termination / negative regulation of cytoplasmic translation / four-way junction DNA binding / DnaA-L2 complex / translation repressor activity / negative regulation of translational initiation / regulation of mRNA stability / negative regulation of DNA-templated DNA replication initiation / rescue of stalled ribosome / mRNA regulatory element binding translation repressor activity / assembly of large subunit precursor of preribosome / positive regulation of RNA splicing / ribosome assembly / regulation of DNA-templated transcription elongation / transcription elongation factor complex / cytosolic ribosome assembly / response to reactive oxygen species / DNA endonuclease activity / transcription antitermination / translational initiation / regulation of cell growth / DNA-templated transcription termination / response to radiation / maintenance of translational fidelity / mRNA 5'-UTR binding / ribosome biogenesis / large ribosomal subunit / regulation of translation / ribosome binding / transferase activity / ribosomal small subunit biogenesis / ribosomal small subunit assembly / small ribosomal subunit / 5S rRNA binding / small ribosomal subunit rRNA binding / ribosomal large subunit assembly / cytosolic small ribosomal subunit / large ribosomal subunit rRNA binding / cytosolic large ribosomal subunit / cytoplasmic translation / tRNA binding / negative regulation of translation / rRNA binding / structural constituent of ribosome / ribosome / translation / ribonucleoprotein complex / viral translational frameshifting / response to antibiotic / negative regulation of DNA-templated transcription / mRNA binding / DNA binding / RNA binding / zinc ion binding / metal ion binding / membrane / cytoplasm / cytosol 類似検索 - 分子機能 | |||||||||
| 生物種 |   Escherichia coli (大腸菌) | |||||||||
| 手法 | 電子顕微鏡法 / 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 3.2 Å | |||||||||
|  データ登録者 | Demo, G. / Svidritskiy, E. / Madireddy, R. / Diaz-Avalos, R. / Grant, T. / Grigorieff, N. / Sousa, D. / Korostelev, A.A. | |||||||||
| 資金援助 |  米国, 2件 
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|  引用 |  ジャーナル: Elife / 年: 2017 タイトル: Mechanism of ribosome rescue by ArfA and RF2. 著者: Gabriel Demo / Egor Svidritskiy / Rohini Madireddy / Ruben Diaz-Avalos / Timothy Grant / Nikolaus Grigorieff / Duncan Sousa / Andrei A Korostelev /  要旨: ArfA rescues ribosomes stalled on truncated mRNAs by recruiting release factor RF2, which normally binds stop codons to catalyze peptide release. We report two 3.2 Å resolution cryo-EM structures - ...ArfA rescues ribosomes stalled on truncated mRNAs by recruiting release factor RF2, which normally binds stop codons to catalyze peptide release. We report two 3.2 Å resolution cryo-EM structures - determined from a single sample - of the 70S ribosome with ArfA•RF2 in the A site. In both states, the ArfA C-terminus occupies the mRNA tunnel downstream of the A site. One state contains a compact inactive RF2 conformation. Ordering of the ArfA N-terminus in the second state rearranges RF2 into an extended conformation that docks the catalytic GGQ motif into the peptidyl-transferase center. Our work thus reveals the structural dynamics of ribosome rescue. The structures demonstrate how ArfA 'senses' the vacant mRNA tunnel and activates RF2 to mediate peptide release without a stop codon, allowing stalled ribosomes to be recycled. | |||||||||
| 履歴 | 
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- 構造の表示
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| ムービー | 
 
  ムービービューア | 
|---|---|
| 構造ビューア | 分子:  Molmil  Jmol/JSmol | 
- ダウンロードとリンク
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| PDBx/mmCIF形式 |  5u9f.cif.gz | 3.8 MB | 表示 |  PDBx/mmCIF形式 | 
|---|---|---|---|---|
| PDB形式 |  pdb5u9f.ent.gz | 表示 |  PDB形式 | |
| PDBx/mmJSON形式 |  5u9f.json.gz | ツリー表示 |  PDBx/mmJSON形式 | |
| その他 |  その他のダウンロード | 
-検証レポート
| 文書・要旨 |  5u9f_validation.pdf.gz | 1.4 MB | 表示 |  wwPDB検証レポート | 
|---|---|---|---|---|
| 文書・詳細版 |  5u9f_full_validation.pdf.gz | 1.7 MB | 表示 | |
| XML形式データ |  5u9f_validation.xml.gz | 261.7 KB | 表示 | |
| CIF形式データ |  5u9f_validation.cif.gz | 430 KB | 表示 | |
| アーカイブディレクトリ |  https://data.pdbj.org/pub/pdb/validation_reports/u9/5u9f  ftp://data.pdbj.org/pub/pdb/validation_reports/u9/5u9f | HTTPS FTP | 
-関連構造データ
- リンク
リンク
- 集合体
集合体
| 登録構造単位 |  
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|---|---|
| 1 | 
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- 要素
要素
-RNA鎖 , 5種, 6分子 A0102XWV     
| #1: RNA鎖 | 分子量: 498725.406 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然)    Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: GenBank: 944404559 | ||
|---|---|---|---|
| #2: RNA鎖 | 分子量: 941322.188 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然)    Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: GenBank: 42756 | ||
| #3: RNA鎖 | 分子量: 38483.926 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然)    Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: GenBank: 1072784372 | ||
| #5: RNA鎖 | 分子量: 24802.785 Da / 分子数: 2 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然)    Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: GenBank: 1114191980 #38: RNA鎖 |  | 分子量: 4597.844 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然)    Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 | 
-タンパク質 , 2種, 2分子 YZ 
| #4: タンパク質 | 分子量: 8190.438 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現)    Escherichia coli (大腸菌) / 株: K12 / 遺伝子: arfA, yhdL, b4550, JW3253 / 発現宿主:   Escherichia coli K-12 (大腸菌) / 参照: UniProt: P36675 | 
|---|---|
| #39: タンパク質 | 分子量: 41300.660 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現)    Escherichia coli (大腸菌) / 株: K12 / 遺伝子: prfB, supK, b2891, JW5847 / 発現宿主:   Escherichia coli K-12 (大腸菌) / 参照: UniProt: P07012 | 
+50S ribosomal protein  ... , 32種, 32分子 0304050607080910111213141516171819202122232425262728293031323334                               
-30S ribosomal protein  ... , 20種, 20分子 BCDEFGHIJKLMNOPQRSTU                   
| #40: タンパク質 | 分子量: 26781.670 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然)    Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: D7ZK99, UniProt: P0A7V0*PLUS | 
|---|---|
| #41: タンパク質 | 分子量: 26031.316 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然)    Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: B7MCS9, UniProt: P0A7V3*PLUS | 
| #42: タンパク質 | 分子量: 23514.199 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然)    Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: D7Z9H7, UniProt: P0A7V8*PLUS | 
| #43: タンパク質 | 分子量: 17629.398 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然)    Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: D7Z9H2, UniProt: P0A7W1*PLUS | 
| #44: タンパク質 | 分子量: 15211.058 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然)    Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: D7ZI17, UniProt: P02358*PLUS | 
| #45: タンパク質 | 分子量: 17637.445 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然)    Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: D7ZAN1, UniProt: P02359*PLUS | 
| #46: タンパク質 | 分子量: 14146.557 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然)    Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: D7Z9G9, UniProt: P0A7W7*PLUS | 
| #47: タンパク質 | 分子量: 14886.270 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然)    Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: D7ZES9, UniProt: P0A7X3*PLUS | 
| #48: タンパク質 | 分子量: 11755.597 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然)    Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: D7Z9F4, UniProt: P0A7R5*PLUS | 
| #49: タンパク質 | 分子量: 13870.975 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然)    Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: B7MCR3, UniProt: P0A7R9*PLUS | 
| #50: タンパク質 | 分子量: 13768.157 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然)    Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: D7ZAN0, UniProt: P0A7S3*PLUS | 
| #51: タンパク質 | 分子量: 13128.467 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然)    Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: H4UQ02, UniProt: P0A7S9*PLUS | 
| #52: タンパク質 | 分子量: 11606.560 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然)    Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: D7Z9G8, UniProt: P0AG59*PLUS | 
| #53: タンパク質 | 分子量: 10290.816 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然)    Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: D7ZEL4, UniProt: P0ADZ4*PLUS | 
| #54: タンパク質 | 分子量: 9207.572 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然)    Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: B7MIU7, UniProt: P0A7T3*PLUS | 
| #55: タンパク質 | 分子量: 9724.491 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然)    Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: D7Z9G4, UniProt: P0AG63*PLUS | 
| #56: タンパク質 | 分子量: 9005.472 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然)    Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: A0A0E2KXL3, UniProt: P0A7T7*PLUS | 
| #57: タンパク質 | 分子量: 10455.355 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然)    Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: D7Z9F9, UniProt: P0A7U3*PLUS | 
| #58: タンパク質 | 分子量: 9708.464 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然)    Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: D7ZAS2, UniProt: P0A7U7*PLUS | 
| #59: タンパク質 | 分子量: 8524.039 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然)    Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 / 参照: UniProt: A0A0E2L2J1, UniProt: P68679*PLUS | 
-非ポリマー , 2種, 361分子 


| #60: 化合物 | ChemComp-MG / #61: 化合物 | ChemComp-ZN / |  | 
|---|
-実験情報
-実験
| 実験 | 手法: 電子顕微鏡法 | 
|---|---|
| EM実験 | 試料の集合状態: PARTICLE / 3次元再構成法: 単粒子再構成法 | 
- 試料調製
試料調製
| 構成要素 | 名称: ArfA-RF2 ribosome rescue complex / タイプ: RIBOSOME / Entity ID: #1-#59 / 由来: MULTIPLE SOURCES | ||||||||||||||||||||||||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 分子量 | 値: 2.5 MDa / 実験値: NO | ||||||||||||||||||||||||||||||
| 由来(天然) | 生物種:   Escherichia coli (大腸菌) / 株: MRE600 | ||||||||||||||||||||||||||||||
| 由来(組換発現) | 生物種:   Escherichia coli (大腸菌) / 株: K-12 | ||||||||||||||||||||||||||||||
| 緩衝液 | pH: 7 | ||||||||||||||||||||||||||||||
| 緩衝液成分 | 
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| 試料 | 包埋: NO / シャドウイング: NO / 染色: NO / 凍結: YES | ||||||||||||||||||||||||||||||
| 試料支持 | 詳細: Using a Solarus 950 plasma cleaning system. The forward RF target was set to 7w. グリッドの材料: COPPER / グリッドのサイズ: 200 divisions/in. / グリッドのタイプ: C-flat-2/2 | ||||||||||||||||||||||||||||||
| 急速凍結 | 装置: FEI VITROBOT MARK IV / 凍結剤: ETHANE / 湿度: 95 % / 凍結前の試料温度: 277.15 K | 
- 電子顕微鏡撮影
電子顕微鏡撮影
| 実験機器 |  モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company | 
|---|---|
| 顕微鏡 | モデル: FEI TITAN KRIOS | 
| 電子銃 | 電子線源:  FIELD EMISSION GUN / 加速電圧: 300 kV / 照射モード: FLOOD BEAM | 
| 電子レンズ | モード: BRIGHT FIELD / 倍率(公称値): 29000 X / 最大 デフォーカス(公称値): 3000 nm / 最小 デフォーカス(公称値): 500 nm / Cs: 2.7 mm / アライメント法: COMA FREE | 
| 試料ホルダ | 凍結剤: NITROGEN 試料ホルダーモデル: FEI TITAN KRIOS AUTOGRID HOLDER | 
| 撮影 | 電子線照射量: 1.2 e/Å2 / 検出モード: COUNTING フィルム・検出器のモデル: DIRECT ELECTRON DE-20 (5k x 3k) 撮影したグリッド数: 1 / 実像数: 3760 | 
| 画像スキャン | 動画フレーム数/画像: 54 / 利用したフレーム数/画像: 2-27 | 
- 解析
解析
| EMソフトウェア | 
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|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| CTF補正 | タイプ: PHASE FLIPPING AND AMPLITUDE CORRECTION | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 粒子像の選択 | 選択した粒子像数: 539311 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 対称性 | 点対称性: C1 (非対称) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 3次元再構成 | 解像度: 3.2 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / 粒子像の数: 96070 / クラス平均像の数: 1 / 対称性のタイプ: POINT | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 原子モデル構築 | B value: 100 / プロトコル: OTHER / 空間: REAL / Target criteria: Correlation coefficient | 
 ムービー
ムービー コントローラー
コントローラー
























 PDBj
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