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万見
- EMDB-5511: CryoEM Visualization of an Adenovirus Capsid-Incorporated HIV Antigen -

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基本情報

登録情報
データベース: EMDB / ID: EMD-5511
タイトルCryoEM Visualization of an Adenovirus Capsid-Incorporated HIV Antigen
マップデータ3D reconstruction of an adenovirus vector engineered for a vaccine application
試料
  • 試料: Ad vector with a capsid-incorporated HIV epitope based on the membrane proximal ectodomain region (MPER) of gp41
  • ウイルス: Human adenovirus 5 (ヒトアデノウイルス)
キーワードcryoEM / viral vaccine vector / adenovirus / HIV / gp41 / MPER
生物種Human adenovirus 5 (ヒトアデノウイルス)
手法単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 8.7 Å
データ登録者Flatt JW / Fox TL / Makarova N / Blackwell JL / Dmitriev IP / Kashentseva EA / Curiel DT / Stewart PL
引用ジャーナル: PLoS One / 年: 2012
タイトル: CryoEM visualization of an adenovirus capsid-incorporated HIV antigen.
著者: Justin W Flatt / Tara L Fox / Natalia Makarova / Jerry L Blackwell / Igor P Dmitriev / Elena A Kashentseva / David T Curiel / Phoebe L Stewart /
要旨: Adenoviral (Ad) vectors show promise as platforms for vaccine applications against infectious diseases including HIV. However, the requirements for eliciting protective neutralizing antibody and ...Adenoviral (Ad) vectors show promise as platforms for vaccine applications against infectious diseases including HIV. However, the requirements for eliciting protective neutralizing antibody and cellular immune responses against HIV remain a major challenge. In a novel approach to generate 2F5- and 4E10-like antibodies, we engineered an Ad vector with the HIV membrane proximal ectodomain region (MPER) epitope displayed on the hypervariable region 2 (HVR2) of the viral hexon capsid, instead of expressed as a transgene. The structure and flexibility of MPER epitopes, and the structural context of these epitopes within viral vectors, play important roles in the induced host immune responses. In this regard, understanding the critical factors for epitope presentation would facilitate optimization strategies for developing viral vaccine vectors. Therefore we undertook a cryoEM structural study of this Ad vector, which was previously shown to elicit MPER-specific humoral immune responses. A subnanometer resolution cryoEM structure was analyzed with guided molecular dynamics simulations. Due to the arrangement of hexons within the Ad capsid, there are twelve unique environments for the inserted peptide that lead to a variety of conformations for MPER, including individual α-helices, interacting α-helices, and partially extended forms. This finding is consistent with the known conformational flexibility of MPER. The presence of an extended form, or an induced extended form, is supported by interaction of this vector with the human HIV monoclonal antibody 2F5, which recognizes 14 extended amino acids within MPER. These results demonstrate that the Ad capsid influences epitope structure, flexibility and accessibility, all of which affect the host immune response. In summary, this cryoEM structural study provided a means to visualize an epitope presented on an engineered viral vector and suggested modifications for the next generation of Ad vectors with capsid-incorporated HIV epitopes.
履歴
登録2012年10月3日-
ヘッダ(付随情報) 公開2012年10月24日-
マップ公開2012年11月28日-
更新2012年11月28日-
現状2012年11月28日処理サイト: RCSB / 状態: 公開

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構造の表示

ムービー
  • 表面図（断面を密度値に従い着色）
  • 表面レベル: 0.044
  • UCSF Chimeraによる作画
  • ダウンロード
  • 表面図（半径に従い着色）
  • 表面レベル: 0.044
  • UCSF Chimeraによる作画
  • ダウンロード
ムービービューア
構造ビューアEMマップ:
SurfViewMolmilJmol/JSmol
添付画像

emd_5511.jpg

ダウンロードとリンク

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マップ

ファイルダウンロード / ファイル: emd_5511.map.gz / 形式: CCP4 / 大きさ: 976.6 MB / タイプ: IMAGE STORED AS FLOATING POINT NUMBER (4 BYTES)
注釈3D reconstruction of an adenovirus vector engineered for a vaccine application
投影像・断面図

画像のコントロール

大きさ
明度
コントラスト
その他
軸Z (Sec.)Y (Row.)X (Col.)
2.25 Å/pix.
x 640 pix.
= 1440. Å		2.25 Å/pix.
x 640 pix.
= 1440. Å		2.25 Å/pix.
x 640 pix.
= 1440. Å

表面

投影像

断面 (1/3)

断面 (1/2)

断面 (2/3)

画像は Spider により作成

ボクセルのサイズX=Y=Z: 2.25 Å
密度

ヒストグラム

ヒストグラム (対数)
表面レベル登録者による: 0.044 / ムービー #1: 0.044
最小 - 最大-0.25064996 - 0.38825402
平均 (標準偏差)-0.06938177 (±0.05499396)
対称性空間群: 1
詳細

EMDB XML:

マップ形状
Axis orderXYZ
Origin-320-320-320
サイズ640640640
Spacing640640640
セルA=B=C: 1440.0 Å
α=β=γ: 90.0 °

CCP4マップ ヘッダ情報:

modeImage stored as Reals
Å/pix. X/Y/Z2.252.252.25
M x/y/z640640640
origin x/y/z0.0000.0000.000
length x/y/z1440.0001440.0001440.000
α/β/γ90.00090.00090.000
start NX/NY/NZ-5029166
NX/NY/NZ106122134
MAP C/R/S123
start NC/NR/NS-320-320-320
NC/NR/NS640640640
D min/max/mean-0.2510.388-0.069

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添付データ

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試料の構成要素

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全体 : Ad vector with a capsid-incorporated HIV epitope based on the mem...

全体名称: Ad vector with a capsid-incorporated HIV epitope based on the membrane proximal ectodomain region (MPER) of gp41
要素
  • 試料: Ad vector with a capsid-incorporated HIV epitope based on the membrane proximal ectodomain region (MPER) of gp41
  • ウイルス: Human adenovirus 5 (ヒトアデノウイルス)

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超分子 #1000: Ad vector with a capsid-incorporated HIV epitope based on the mem...

超分子名称: Ad vector with a capsid-incorporated HIV epitope based on the membrane proximal ectodomain region (MPER) of gp41
タイプ: sample / ID: 1000 / Number unique components: 1
分子量理論値: 150 MDa

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超分子 #1: Human adenovirus 5

超分子名称: Human adenovirus 5 / タイプ: virus / ID: 1
詳細: recombinant type 5 adenovirus vector, Ad-HVR2-GP41-L15, generated with a 24 amino acid MPER insertion within hypervariable region 2 (HVR2) of the hexon capsid protein
NCBI-ID: 28285 / 生物種: Human adenovirus 5 / データベース: NCBI / ウイルスタイプ: VIRION / ウイルス・単離状態: OTHER / ウイルス・エンベロープ: No / ウイルス・中空状態: No
宿主生物種: Homo sapiens (ヒト) / 別称: VERTEBRATES
分子量理論値: 150 MDa
ウイルス殻Shell ID: 1 / 名称: Capsid / 直径: 1170 Å / T番号(三角分割数): 25

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実験情報

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構造解析

手法クライオ電子顕微鏡法
解析単粒子再構成法
試料の集合状態particle

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試料調製

濃度0.2 mg/mL
緩衝液pH: 7.6 / 詳細: 50 mM Tris, 150 mM NaCl, 2 mM CaCl2, 2 mM MgCl2
グリッド詳細: Quantifoil R2/4 holey carbon grids, glow discharged
凍結凍結剤: ETHANE / チャンバー内湿度: 30 % / チャンバー内温度: 90 K / 装置: HOMEMADE PLUNGER / 手法: Blot for 4 seconds before plunging

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電子顕微鏡法

顕微鏡FEI TECNAI F30
温度平均: 90 K
アライメント法Legacy - 非点収差: Objective lens astigmatism was corrected at 300,000 times magnification
Legacy - Electron beam tilt params: 0
日付2011年6月1日
撮影カテゴリ: CCD
フィルム・検出器のモデル: GATAN ULTRASCAN 4000 (4k x 4k)
デジタル化 - サンプリング間隔: 15 µm / 実像数: 5025 / 平均電子線量: 20 e/Å2 / ビット/ピクセル: 16
電子線加速電圧: 300 kV / 電子線源: FIELD EMISSION GUN
電子光学系倍率（補正後）: 400000 / 照射モード: FLOOD BEAM / 撮影モード: BRIGHT FIELD / Cs: 2.26 mm / 最大 デフォーカス（公称値）: 4.0 µm / 最小 デフォーカス（公称値）: 1.0 µm / 倍率（公称値）: 310000
試料ステージ試料ホルダーモデル: SIDE ENTRY, EUCENTRIC
実験機器
モデル: Tecnai F30 / 画像提供: FEI Company

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画像解析

詳細The particles were selected with in-house script and processed using Frealign
CTF補正詳細: Each particle
最終 再構成アルゴリズム: OTHER / 解像度のタイプ: BY AUTHOR / 解像度: 8.7 Å / 解像度の算出法: FSC 0.5 CUT-OFF / ソフトウェア - 名称: Frealign / 使用した粒子像数: 1306

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万見について

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お知らせ

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2022年2月9日: EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

  • EMDBのヘッダファイルのバージョン3が、公式のフォーマットとなりました。
  • これまでは公式だったバージョン1.9は、アーカイブから削除されます。

関連情報:EMDBヘッダ

外部リンク:wwPDBはEMDBデータモデルのバージョン3へ移行します

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2020年8月12日: 新型コロナ情報

新型コロナ情報

URL: https://pdbjlvh1.pdbj.org/emnavi/covid19.php

新ページ: EM Navigatorに新型コロナウイルスの特設ページを開設しました。

関連情報:Covid-19情報 / 2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

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2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

新型コロナウイルスの構造データ

関連情報:万見生物種 / 2020年8月12日: 新型コロナ情報

外部リンク:COVID-19特集ページ - PDBj / 今月の分子2020年2月：コロナウイルスプロテーアーゼ

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2019年1月31日: EMDBのIDの桁数の変更

EMDBのIDの桁数の変更

  • EMDBエントリに付与されているアクセスコード(EMDB-ID)は4桁の数字(例、EMD-1234)でしたが、間もなく枯渇します。これまでの4桁のID番号は4桁のまま変更されませんが、4桁の数字を使い切った後に発行されるIDは5桁以上の数字(例、EMD-12345)になります。5桁のIDは2019年の春頃から発行される見通しです。
  • EM Navigator/万見では、接頭語「EMD-」は省略されています。

関連情報:Q: 「EMD」とは何ですか？ / 万見/EM NavigatorにおけるID/アクセスコードの表記

外部リンク:EMDB Accession Codes are Changing Soon! / PDBjへお問い合わせ

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2017年7月12日: PDB大規模アップデート

PDB大規模アップデート

  • 新バージョンのPDBx/mmCIF辞書形式に基づくデータがリリースされました。
  • 今回の更新はバージョン番号が4から5になる大規模なもので、全エントリデータの書き換えが行われる「Remediation」というアップデートに該当します。
  • このバージョンアップで、電子顕微鏡の実験手法に関する多くの項目の書式が改定されました(例：em_softwareなど)。
  • EM NavigatorとYorodumiでも、この改定に基づいた表示内容になります。

外部リンク:wwPDB Remediation / OneDepデータ基準に準拠した、より強化された内容のモデル構造ファイルが、PDBアーカイブで公開されました。

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万見 (Yorodumi)

幾万の構造データを、幾万の視点から

  • 万見(Yorodumi)は、EMDB/PDB/SASBDBなどの構造データを閲覧するためのページです。
  • EM Navigatorの詳細ページの後継、Omokage検索のフロントエンドも兼ねています。

関連情報:EMDB / PDB / SASBDB / 3つのデータバンクの比較 / 万見検索 / 2016年8月31日: 新しいEM Navigatorと万見 / 万見文献 / Jmol/JSmol / 機能・相同性情報 / 新しいEM Navigatorと万見の変更点

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