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基本情報
| 登録情報 | ![]() | |||||||||
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| タイトル | Cryo-EM structure of the c-di-GMP-saturated Bcs macrocomplex (BcsABR2Q2E2F2G3) for cellulose secretion of E. coli (filtered to 6A) | |||||||||
マップデータ | Cryo-EM map of the assembled c-di-GMP-saturated Bcs macrocomplex of the E. coli Bcs cellulose secretion system (filtered to 6A) | |||||||||
試料 |
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キーワード | Bacterial cellulose secretion / MEMBRANE PROTEIN | |||||||||
| 生物種 | ![]() | |||||||||
| 手法 | 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 6.0 Å | |||||||||
データ登録者 | Anso I / Krasteva PV | |||||||||
| 資金援助 | European Union, 1件
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引用 | ジャーナル: Nat Commun / 年: 2024タイトル: Structural basis for synthase activation and cellulose modification in the E. coli Type II Bcs secretion system. 著者: Itxaso Anso / Samira Zouhir / Thibault Géry Sana / Petya Violinova Krasteva / ![]() 要旨: Bacterial cellulosic polymers constitute a prevalent class of biofilm matrix exopolysaccharides that are synthesized by several types of bacterial cellulose secretion (Bcs) systems, which include ...Bacterial cellulosic polymers constitute a prevalent class of biofilm matrix exopolysaccharides that are synthesized by several types of bacterial cellulose secretion (Bcs) systems, which include conserved cyclic diguanylate (c-di-GMP)-dependent cellulose synthase modules together with diverse accessory subunits. In E. coli, the biogenesis of phosphoethanolamine (pEtN)-modified cellulose relies on the BcsRQABEFG macrocomplex, encompassing inner-membrane and cytosolic subunits, and an outer membrane porin, BcsC. Here, we use cryogenic electron microscopy to shed light on the molecular mechanisms of BcsA-dependent recruitment and stabilization of a trimeric BcsG pEtN-transferase for polymer modification, and a dimeric BcsF-dependent recruitment of an otherwise cytosolic BcsERQ regulatory complex. We further demonstrate that BcsE, a secondary c-di-GMP sensor, can remain dinucleotide-bound and retain the essential-for-secretion BcsRQ partners onto the synthase even in the absence of direct c-di-GMP-synthase complexation, likely lowering the threshold for c-di-GMP-dependent synthase activation. Such activation-by-proxy mechanism could allow Bcs secretion system activity even in the absence of substantial intracellular c-di-GMP increase, and is reminiscent of other widespread synthase-dependent polysaccharide secretion systems where dinucleotide sensing and/or synthase stabilization are carried out by key co-polymerase subunits. | |||||||||
| 履歴 |
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構造の表示
| 添付画像 |
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ダウンロードとリンク
-EMDBアーカイブ
| マップデータ | emd_50584.map.gz | 443 MB | EMDBマップデータ形式 | |
|---|---|---|---|---|
| ヘッダ (付随情報) | emd-50584-v30.xml emd-50584.xml | 38.9 KB 38.9 KB | 表示 表示 | EMDBヘッダ |
| 画像 | emd_50584.png | 51.2 KB | ||
| Filedesc metadata | emd-50584.cif.gz | 7.9 KB | ||
| その他 | emd_50584_half_map_1.map.gz emd_50584_half_map_2.map.gz | 440.1 MB 440.1 MB | ||
| アーカイブディレクトリ | http://ftp.pdbj.org/pub/emdb/structures/EMD-50584 ftp://ftp.pdbj.org/pub/emdb/structures/EMD-50584 | HTTPS FTP |
-検証レポート
| 文書・要旨 | emd_50584_validation.pdf.gz | 684.9 KB | 表示 | EMDB検証レポート |
|---|---|---|---|---|
| 文書・詳細版 | emd_50584_full_validation.pdf.gz | 684.4 KB | 表示 | |
| XML形式データ | emd_50584_validation.xml.gz | 18.1 KB | 表示 | |
| CIF形式データ | emd_50584_validation.cif.gz | 22.2 KB | 表示 | |
| アーカイブディレクトリ | https://ftp.pdbj.org/pub/emdb/validation_reports/EMD-50584 ftp://ftp.pdbj.org/pub/emdb/validation_reports/EMD-50584 | HTTPS FTP |
-関連構造データ
-
リンク
| EMDBのページ | EMDB (EBI/PDBe) / EMDataResource |
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マップ
| ファイル | ダウンロード / ファイル: emd_50584.map.gz / 形式: CCP4 / 大きさ: 476.8 MB / タイプ: IMAGE STORED AS FLOATING POINT NUMBER (4 BYTES) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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| 注釈 | Cryo-EM map of the assembled c-di-GMP-saturated Bcs macrocomplex of the E. coli Bcs cellulose secretion system (filtered to 6A) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 投影像・断面図 | 画像のコントロール
画像は Spider により作成 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| ボクセルのサイズ | X=Y=Z: 0.839 Å | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 密度 |
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| 対称性 | 空間群: 1 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 詳細 | EMDB XML:
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-添付データ
-ハーフマップ: EM half-map of the assembled c-di-GMP-saturated Bcs macrocomplex...
| ファイル | emd_50584_half_map_1.map | ||||||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 注釈 | EM half-map of the assembled c-di-GMP-saturated Bcs macrocomplex of the E. coli Bcs cellulose secretion system (filtered to 6A) | ||||||||||||
| 投影像・断面図 |
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| 密度ヒストグラム |
-ハーフマップ: EM half-map of the assembled c-di-GMP-saturated Bcs macrocomplex...
| ファイル | emd_50584_half_map_2.map | ||||||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 注釈 | EM half-map of the assembled c-di-GMP-saturated Bcs macrocomplex of the E. coli Bcs cellulose secretion system (filtered to 6A) | ||||||||||||
| 投影像・断面図 |
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| 密度ヒストグラム |
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試料の構成要素
+全体 : Purified c-di-GMP-saturated Bcs macrocomplex from E. coli
+超分子 #1: Purified c-di-GMP-saturated Bcs macrocomplex from E. coli
+分子 #1: BcsA cellulose synthase
+分子 #2: BcsB cellulose co-polymerase
+分子 #3: BcsR essential cellulose secretion regulator
+分子 #4: BcsR essential cellulose secretion regulator
+分子 #5: BcsQ essential secretion regulator
+分子 #6: BcsQ essential secretion regulator
+分子 #7: BcsB cellulose co-polymerase
+分子 #8: BcsB cellulose co-polymerase
+分子 #9: BcsB cellulose co-polymerase
+分子 #10: BcsB cellulose co-polymerase
+分子 #11: BcsB cellulose co-polymerase
+分子 #12: BcsE cellulose secretion enhancer
+分子 #13: BcsE cellulose secretion enhancer
+分子 #14: BcsF cellulose secretion enhancer
+分子 #15: BcsF cellulose secretion enhancer
+分子 #16: BcsG pEtN-transferase
+分子 #17: BcsG pEtN-transferase
-実験情報
-構造解析
| 手法 | クライオ電子顕微鏡法 |
|---|---|
解析 | 単粒子再構成法 |
| 試料の集合状態 | particle |
-
試料調製
| 濃度 | 2 mg/mL |
|---|---|
| 緩衝液 | pH: 8 詳細: 120 mM NaCL 20 mM HEPES pH8 5 mM MgCl2 10 uM ApppCp 4 uM c-di-GMP 0.01% LM-NPG |
| グリッド | モデル: UltrAuFoil R1.2/1.3 / 材質: GOLD / メッシュ: 300 / 支持フィルム - 材質: GOLD / 支持フィルム - トポロジー: HOLEY / 前処理 - タイプ: GLOW DISCHARGE / 前処理 - 時間: 60 sec. / 前処理 - 雰囲気: AIR |
| 凍結 | 凍結剤: ETHANE / チャンバー内湿度: 100 % / チャンバー内温度: 277 K / 装置: FEI VITROBOT MARK IV |
| 詳細 | Purification from solubilized membrane fraction using an anti-FLAG M2 affinity resin |
-
電子顕微鏡法
| 顕微鏡 | FEI TITAN KRIOS |
|---|---|
| 特殊光学系 | エネルギーフィルター - 名称: GIF Quantum LS / エネルギーフィルター - スリット幅: 20 eV |
| 撮影 | フィルム・検出器のモデル: GATAN K3 (6k x 4k) / 撮影したグリッド数: 2 / 実像数: 20022 / 平均電子線量: 49.35 e/Å2 |
| 電子線 | 加速電圧: 300 kV / 電子線源: FIELD EMISSION GUN |
| 電子光学系 | 照射モード: FLOOD BEAM / 撮影モード: BRIGHT FIELD / Cs: 2.7 mm / 最大 デフォーカス(公称値): 2.1 µm / 最小 デフォーカス(公称値): 0.3 µm |
| 実験機器 | ![]() モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company |
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画像解析
-原子モデル構築 1
| 初期モデル | Chain - Source name: Other / Chain - Initial model type: experimental model / 詳細: emd-11836 |
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FIELD EMISSION GUN
