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基本情報
登録情報 | データベース: EMDB / ID: EMD-5011 | |||||||||
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タイトル | Crosslinked kinesin head-tail complex bound to the microtubule | |||||||||
![]() | null | |||||||||
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![]() | kinesin / microtubule / tail domain / cargo / switch I / regulation | |||||||||
機能・相同性 | kinesin complex / tubulin complex / Kinesin motor domain / Alpha tubulin / Beta tubulin![]() | |||||||||
手法 | らせん対称体再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 8.0 Å | |||||||||
![]() | Dietrich KA / Sindelar CV / Brewer PD / Downing KH / Cremo CR / Rice SE | |||||||||
![]() | ![]() タイトル: The kinesin-1 motor protein is regulated by a direct interaction of its head and tail. 著者: Kristen A Dietrich / Charles V Sindelar / Paul D Brewer / Kenneth H Downing / Christine R Cremo / Sarah E Rice / ![]() 要旨: Kinesin-1 is a molecular motor protein that transports cargo along microtubules. Inside cells, the vast majority of kinesin-1 is regulated to conserve ATP and to ensure its proper intracellular ...Kinesin-1 is a molecular motor protein that transports cargo along microtubules. Inside cells, the vast majority of kinesin-1 is regulated to conserve ATP and to ensure its proper intracellular distribution and coordination with other molecular motors. Regulated kinesin-1 folds in half at a hinge in its coiled-coil stalk. Interactions between coiled-coil regions near the enzymatically active heads at the N terminus and the regulatory tails at the C terminus bring these globular elements in proximity and stabilize the folded conformation. However, it has remained a mystery how kinesin-1's microtubule-stimulated ATPase activity is regulated in this folded conformation. Here, we present evidence for a direct interaction between the kinesin-1 head and tail. We photochemically cross-linked heads and tails and produced an 8-A cryoEM reconstruction of the cross-linked head-tail complex on microtubules. These data demonstrate that a conserved essential regulatory element in the kinesin-1 tail interacts directly and specifically with the enzymatically critical Switch I region of the head. This interaction suggests a mechanism for tail-mediated regulation of the ATPase activity of kinesin-1. In our structure, the tail makes simultaneous contacts with the kinesin-1 head and the microtubule, suggesting the tail may both regulate kinesin-1 in solution and hold it in a paused state with high ADP affinity on microtubules. The interaction of the Switch I region of the kinesin-1 head with the tail is strikingly similar to the interactions of small GTPases with their regulators, indicating that other kinesin motors may share similar regulatory mechanisms. | |||||||||
履歴 |
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構造の表示
ムービー |
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構造ビューア | EMマップ: ![]() ![]() ![]() |
添付画像 |
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ダウンロードとリンク
-EMDBアーカイブ
マップデータ | ![]() | 15.5 MB | ![]() | |
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ヘッダ (付随情報) | ![]() ![]() | 14.1 KB 14.1 KB | 表示 表示 | ![]() |
画像 | ![]() | 732.7 KB | ||
アーカイブディレクトリ | ![]() ![]() | HTTPS FTP |
-検証レポート
文書・要旨 | ![]() | 78.6 KB | 表示 | ![]() |
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文書・詳細版 | ![]() | 77.8 KB | 表示 | |
XML形式データ | ![]() | 492 B | 表示 | |
アーカイブディレクトリ | ![]() ![]() | HTTPS FTP |
-関連構造データ
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リンク
EMDBのページ | ![]() ![]() |
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マップ
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注釈 | null | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
ボクセルのサイズ | X=Y=Z: 2 Å | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
密度 |
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対称性 | 空間群: 1 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
詳細 | EMDB XML:
CCP4マップ ヘッダ情報:
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-添付データ
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試料の構成要素
-全体 : Monomeric kinesin-1 head domain crosslinked in trans to dimerized...
全体 | 名称: Monomeric kinesin-1 head domain crosslinked in trans to dimerized kinesin-1 tail domain, bound to the microtubule |
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要素 |
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-超分子 #1000: Monomeric kinesin-1 head domain crosslinked in trans to dimerized...
超分子 | 名称: Monomeric kinesin-1 head domain crosslinked in trans to dimerized kinesin-1 tail domain, bound to the microtubule タイプ: sample / ID: 1000 集合状態: One head-tail complex binds to one tubulin alpha-beta dimer Number unique components: 3 |
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分子量 | 理論値: 148 KDa |
-分子 #1: microtubule
分子 | 名称: microtubule / タイプ: protein_or_peptide / ID: 1 / Name.synonym: microtubule 詳細: 13-protofilament microtubules with an asymmetric seam were selected for image processing 集合状態: quasi-helical assembly / 組換発現: No / データベース: NCBI |
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由来(天然) | 組織: brain / 細胞: cow / 細胞中の位置: cytoplasm |
分子量 | 理論値: 800 KDa |
配列 | GO: tubulin complex / InterPro: Alpha tubulin, Beta tubulin |
-分子 #2: kinesin tail domain
分子 | 名称: kinesin tail domain / タイプ: protein_or_peptide / ID: 2 / Name.synonym: kinesin / 詳細: residues 823-944 of kinesin-1 / 集合状態: Dimer / 組換発現: Yes |
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由来(天然) | 細胞: BL21 / 細胞中の位置: cytoplasm |
分子量 | 理論値: 13 KDa |
組換発現 | 生物種: ![]() ![]() |
配列 | GO: kinesin complex / InterPro: Kinesin motor domain |
-分子 #3: human kinesin monomeric construct cys-lite K349
分子 | 名称: human kinesin monomeric construct cys-lite K349 / タイプ: protein_or_peptide / ID: 3 / Name.synonym: kinesin / 集合状態: monomer / 組換発現: Yes |
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由来(天然) | 細胞: BL21 / 細胞中の位置: cytoplasm |
分子量 | 理論値: 50 MDa |
組換発現 | 生物種: ![]() ![]() |
配列 | GO: kinesin complex / InterPro: Kinesin motor domain |
-実験情報
-構造解析
手法 | クライオ電子顕微鏡法 |
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![]() | らせん対称体再構成法 |
試料の集合状態 | filament |
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試料調製
濃度 | 1 mg/mL |
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緩衝液 | pH: 6.8 詳細: 2.5 mM PIPES, 5 mM NaCl, 2 mM MgCl2, 1 mM EGTA, 5 mM Imidazole, 5 mM BME, and 40 uM ADP |
グリッド | 詳細: 300 mesh copper grid with homemade holey carbon |
凍結 | 凍結剤: ETHANE / チャンバー内温度: 103 K / 装置: HOMEMADE PLUNGER 詳細: Vitrification instrument: homemade. Vitrification carried out under ambient conditions 手法: excess solution wicked away from grid before blotting and plunging immediately. Less than 0.5 seconds elapsed between blotting and plunging. |
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電子顕微鏡法
顕微鏡 | JEOL 4000EX |
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温度 | 最低: 98 K / 最高: 108 K / 平均: 100 K |
アライメント法 | Legacy - 非点収差: objective lens astigmatism was approximately corrected at 400,000 times magnification |
日付 | 2007年9月1日 |
撮影 | カテゴリ: FILM / フィルム・検出器のモデル: KODAK SO-163 FILM デジタル化 - スキャナー: NIKON SUPER COOLSCAN 9000 デジタル化 - サンプリング間隔: 6.3 µm / 実像数: 347 / 平均電子線量: 16 e/Å2 / ビット/ピクセル: 16 |
電子線 | 加速電圧: 400 kV / 電子線源: LAB6 |
電子光学系 | 照射モード: FLOOD BEAM / 撮影モード: BRIGHT FIELD / Cs: 4.1 mm / 最大 デフォーカス(公称値): 1.8 µm / 最小 デフォーカス(公称値): 0.7 µm / 倍率(公称値): 60000 |
試料ステージ | 試料ホルダー: Eucentric / 試料ホルダーモデル: GATAN LIQUID NITROGEN |
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画像解析
最終 再構成 | アルゴリズム: OTHER / 解像度のタイプ: BY AUTHOR / 解像度: 8.0 Å / 解像度の算出法: OTHER / ソフトウェア - 名称: SPIDER 詳細: image defocus and astigmatism were determined by ctffind3 |
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CTF補正 | 詳細: Integrated with fourier inversion reconstruction in the manner of FREALIGN by a customized c program |
最終 角度割当 | 詳細: SPIDER |
-原子モデル構築 1
初期モデル | PDB ID: |
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ソフトウェア | 名称: ![]() |
詳細 | Protocol: Rigid Body. the menu option Fit Model in Map from UCSF Chimera was used to generate the fit |
精密化 | 空間: REAL / プロトコル: RIGID BODY FIT / 当てはまり具合の基準: real-space density |
-原子モデル構築 2
初期モデル | PDB ID: |
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ソフトウェア | 名称: ![]() |
詳細 | Protocol: Rigid Body. the menu option Fit Model in Map from UCSF Chimera was used to generate the fit |
精密化 | 空間: REAL / プロトコル: RIGID BODY FIT / 当てはまり具合の基準: real-space density |