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- EMDB-4047: Cryo-EM structure of ternary deletion mutant of human APC/C-Cdh1-... -

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基本情報

登録情報
データベース: EMDB / ID: EMD-4047
タイトルCryo-EM structure of ternary deletion mutant of human APC/C-Cdh1-Hsl1 complex without Apc1 WD40 domain
マップデータ
試料
  • 複合体: Ternary complex of APC/C-Cdh1-Hsl1 without Apc1 WD40 domain
生物種Homo sapiens (ヒト)
手法単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 6.0 Å
データ登録者Li Q / Chang L / Yang J / Zhang Z / Barford D
引用ジャーナル: Proc Natl Acad Sci U S A / 年: 2016
タイトル: WD40 domain of Apc1 is critical for the coactivator-induced allosteric transition that stimulates APC/C catalytic activity.
著者: Qiuhong Li / Leifu Chang / Shintaro Aibara / Jing Yang / Ziguo Zhang / David Barford /
要旨: The anaphase-promoting complex/cyclosome (APC/C) is a large multimeric cullin-RING E3 ubiquitin ligase that orchestrates cell-cycle progression by targeting cell-cycle regulatory proteins for ...The anaphase-promoting complex/cyclosome (APC/C) is a large multimeric cullin-RING E3 ubiquitin ligase that orchestrates cell-cycle progression by targeting cell-cycle regulatory proteins for destruction via the ubiquitin proteasome system. The APC/C assembly comprises two scaffolding subcomplexes: the platform and the TPR lobe that together coordinate the juxtaposition of the catalytic and substrate-recognition modules. The platform comprises APC/C subunits Apc1, Apc4, Apc5, and Apc15. Although the role of Apc1 as an APC/C scaffolding subunit has been characterized, its specific functions in contributing toward APC/C catalytic activity are not fully understood. Here, we report the crystal structure of the N-terminal domain of human Apc1 (Apc1N) determined at 2.2-Å resolution and provide an atomic-resolution description of the architecture of its WD40 (WD40 repeat) domain (Apc1(WD40)). To understand how Apc1(WD40) contributes to APC/C activity, a mutant form of the APC/C with Apc1(WD40) deleted was generated and evaluated biochemically and structurally. We found that the deletion of Apc1(WD40) abolished the UbcH10-dependent ubiquitination of APC/C substrates without impairing the Ube2S-dependent ubiquitin chain elongation activity. A cryo-EM structure of an APC/C-Cdh1 complex with Apc1(WD40) deleted showed that the mutant APC/C is locked into an inactive conformation in which the UbcH10-binding site of the catalytic module is inaccessible. Additionally, an EM density for Apc15 is not visible. Our data show that Apc1(WD40) is required to mediate the coactivator-induced conformational change of the APC/C that is responsible for stimulating APC/C catalytic activity by promoting UbcH10 binding. In contrast, Ube2S activity toward APC/C substrates is not dependent on the initiation-competent conformation of the APC/C.
履歴
登録2016年7月7日-
ヘッダ(付随情報) 公開2016年10月5日-
マップ公開2016年10月5日-
更新2017年8月2日-
現状2017年8月2日処理サイト: PDBe / 状態: 公開

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構造の表示

ムービー
  • 表面図（断面を密度値に従い着色）
  • 表面レベル: 0.08
  • UCSF Chimeraによる作画
  • ダウンロード
  • 表面図（半径に従い着色）
  • 表面レベル: 0.08
  • UCSF Chimeraによる作画
  • ダウンロード
ムービービューア
構造ビューアEMマップ:
SurfViewMolmilJmol/JSmol
添付画像

emd_4047.png

ダウンロードとリンク

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マップ

ファイルダウンロード / ファイル: emd_4047.map.gz / 形式: CCP4 / 大きさ: 70.2 MB / タイプ: IMAGE STORED AS FLOATING POINT NUMBER (4 BYTES)
ボクセルのサイズX=Y=Z: 1.36 Å
密度
表面レベル登録者による: 0.08 / ムービー #1: 0.08
最小 - 最大-0.18531242 - 0.3971233
平均 (標準偏差)0.0022356252 (±0.016142555)
対称性空間群: 1
詳細

EMDB XML:

マップ形状
Axis orderXYZ
Origin-131-131-131
サイズ264264264
Spacing264264264
セルA=B=C: 359.04 Å
α=β=γ: 90.0 °

CCP4マップ ヘッダ情報:

modeImage stored as Reals
Å/pix. X/Y/Z1.361.361.36
M x/y/z264264264
origin x/y/z0.0000.0000.000
length x/y/z359.040359.040359.040
α/β/γ90.00090.00090.000
MAP C/R/S123
start NC/NR/NS-131-131-131
NC/NR/NS264264264
D min/max/mean-0.1850.3970.002

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添付データ

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試料の構成要素

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全体 : Ternary complex of APC/C-Cdh1-Hsl1 without Apc1 WD40 domain

全体名称: Ternary complex of APC/C-Cdh1-Hsl1 without Apc1 WD40 domain
要素
  • 複合体: Ternary complex of APC/C-Cdh1-Hsl1 without Apc1 WD40 domain

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超分子 #1: Ternary complex of APC/C-Cdh1-Hsl1 without Apc1 WD40 domain

超分子名称: Ternary complex of APC/C-Cdh1-Hsl1 without Apc1 WD40 domain
タイプ: complex / ID: 1 / 親要素: 0
由来(天然)生物種: Homo sapiens (ヒト)
組換発現生物種: Trichoplusia ni (イラクサキンウワバ) / 組換プラスミド: pFU
分子量理論値: 1.2 MDa

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実験情報

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構造解析

手法クライオ電子顕微鏡法
解析単粒子再構成法
試料の集合状態cell

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試料調製

濃度0.12 mg/mL
緩衝液pH: 8
構成要素:
濃度名称
10.0 mMHEPES
150.0 mMNaCl
0.5 mMTCEP

詳細: Solutions were made fresh from powder and filtered to avoid microbial contamination.
グリッドモデル: Quantifoil R2/2 / 材質: COPPER / メッシュ: 300 / 支持フィルム - 材質: CARBON / 支持フィルム - トポロジー: HOLEY ARRAY / 支持フィルム - Film thickness: 30.0 nm / 前処理 - タイプ: PLASMA CLEANING / 前処理 - 雰囲気: OTHER
詳細: The grid was coated with continuous carbon film prior to use.
凍結凍結剤: ETHANE / チャンバー内湿度: 100 % / チャンバー内温度: 277 K / 装置: FEI VITROBOT MARK III / 詳細: Blot for 5 seconds before plunging..
詳細Recombinant protein complex expressed and purified from insect cells. This sample was monodisperse.

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電子顕微鏡法

顕微鏡FEI POLARA 300
撮影フィルム・検出器のモデル: FEI FALCON II (4k x 4k)
検出モード: OTHER / デジタル化 - サイズ - 横: 4096 pixel / デジタル化 - サイズ - 縦: 4096 pixel / 撮影したグリッド数: 4 / 実像数: 1729 / 平均露光時間: 1.1 sec. / 平均電子線量: 14.6 e/Å2
電子線加速電圧: 300 kV / 電子線源: FIELD EMISSION GUN
電子光学系最大 デフォーカス（補正後）: 4.0 µm / 最小 デフォーカス（補正後）: 1.5 µm / 照射モード: OTHER / 撮影モード: BRIGHT FIELD / Cs: 2.0 mm
実験機器
モデル: Tecnai Polara / 画像提供: FEI Company

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画像解析

CTF補正ソフトウェア - 名称: RELION (ver. 1.4)
最終 再構成想定した対称性 - 点群: C1 (非対称) / アルゴリズム: FOURIER SPACE / 解像度のタイプ: BY AUTHOR / 解像度: 6.0 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / ソフトウェア - 名称: RELION (ver. 1.4) / 使用した粒子像数: 71724
初期 角度割当タイプ: OTHER / ソフトウェア - 名称: RELION (ver. 1.4)
最終 角度割当タイプ: OTHER / ソフトウェア - 名称: RELION (ver. 1.4)
最終 3次元分類クラス数: 10 / ソフトウェア - 名称: RELION (ver. 1.4)

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原子モデル構築 1

精密化空間: REAL / プロトコル: FLEXIBLE FIT

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万見について

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お知らせ

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2022年2月9日: EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

  • EMDBのヘッダファイルのバージョン3が、公式のフォーマットとなりました。
  • これまでは公式だったバージョン1.9は、アーカイブから削除されます。

関連情報:EMDBヘッダ

外部リンク:wwPDBはEMDBデータモデルのバージョン3へ移行します

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2020年8月12日: 新型コロナ情報

新型コロナ情報

URL: https://pdbjlvh1.pdbj.org/emnavi/covid19.php

新ページ: EM Navigatorに新型コロナウイルスの特設ページを開設しました。

関連情報:Covid-19情報 / 2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

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2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

新型コロナウイルスの構造データ

関連情報:万見生物種 / 2020年8月12日: 新型コロナ情報

外部リンク:COVID-19特集ページ - PDBj / 今月の分子2020年2月：コロナウイルスプロテーアーゼ

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2019年1月31日: EMDBのIDの桁数の変更

EMDBのIDの桁数の変更

  • EMDBエントリに付与されているアクセスコード(EMDB-ID)は4桁の数字(例、EMD-1234)でしたが、間もなく枯渇します。これまでの4桁のID番号は4桁のまま変更されませんが、4桁の数字を使い切った後に発行されるIDは5桁以上の数字(例、EMD-12345)になります。5桁のIDは2019年の春頃から発行される見通しです。
  • EM Navigator/万見では、接頭語「EMD-」は省略されています。

関連情報:Q: 「EMD」とは何ですか？ / 万見/EM NavigatorにおけるID/アクセスコードの表記

外部リンク:EMDB Accession Codes are Changing Soon! / PDBjへお問い合わせ

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2017年7月12日: PDB大規模アップデート

PDB大規模アップデート

  • 新バージョンのPDBx/mmCIF辞書形式に基づくデータがリリースされました。
  • 今回の更新はバージョン番号が4から5になる大規模なもので、全エントリデータの書き換えが行われる「Remediation」というアップデートに該当します。
  • このバージョンアップで、電子顕微鏡の実験手法に関する多くの項目の書式が改定されました(例：em_softwareなど)。
  • EM NavigatorとYorodumiでも、この改定に基づいた表示内容になります。

外部リンク:wwPDB Remediation / OneDepデータ基準に準拠した、より強化された内容のモデル構造ファイルが、PDBアーカイブで公開されました。

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関連情報:EMDB / PDB / SASBDB / 3つのデータバンクの比較 / 万見検索 / 2016年8月31日: 新しいEM Navigatorと万見 / 万見文献 / Jmol/JSmol / 機能・相同性情報 / 新しいEM Navigatorと万見の変更点

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