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-基本情報
登録情報 | データベース: EMDB / ID: EMD-23925 | ||||||||||||||||||
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タイトル | Cryo-EM structure of human HUWE1 in complex with DDIT4 | ||||||||||||||||||
マップデータ | main map from Relion PostProcess | ||||||||||||||||||
試料 |
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キーワード | Ubiquitin / Quality Control / E3 ligase / protein degradation / TRANSFERASE / TRANSFERASE-Apoptosis complex | ||||||||||||||||||
機能・相同性 | 機能・相同性情報 protein-containing complex disassembly / histone ubiquitin ligase activity / negative regulation of mitochondrial fusion / : / HECT-type E3 ubiquitin transferase / negative regulation of TOR signaling / negative regulation of glycolytic process / positive regulation of protein targeting to mitochondrion / Golgi organization / protein monoubiquitination ...protein-containing complex disassembly / histone ubiquitin ligase activity / negative regulation of mitochondrial fusion / : / HECT-type E3 ubiquitin transferase / negative regulation of TOR signaling / negative regulation of glycolytic process / positive regulation of protein targeting to mitochondrion / Golgi organization / protein monoubiquitination / neurotrophin TRK receptor signaling pathway / intrinsic apoptotic signaling pathway in response to DNA damage by p53 class mediator / 14-3-3 protein binding / cellular response to dexamethasone stimulus / reactive oxygen species metabolic process / positive regulation of protein ubiquitination / TP53 Regulates Metabolic Genes / circadian regulation of gene expression / neuron migration / brain development / base-excision repair / neuron differentiation / protein polyubiquitination / ubiquitin-protein transferase activity / ubiquitin protein ligase activity / Antigen processing: Ubiquitination & Proteasome degradation / ubiquitin-dependent protein catabolic process / defense response to virus / secretory granule lumen / ficolin-1-rich granule lumen / membrane fusion / cell differentiation / response to hypoxia / intracellular signal transduction / Golgi membrane / Neutrophil degranulation / apoptotic process / mitochondrion / DNA binding / RNA binding / extracellular exosome / extracellular region / nucleoplasm / membrane / nucleus / cytosol / cytoplasm 類似検索 - 分子機能 | ||||||||||||||||||
生物種 | Homo sapiens (ヒト) | ||||||||||||||||||
手法 | 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 3.3 Å | ||||||||||||||||||
データ登録者 | Hunkeler M / Fischer ES | ||||||||||||||||||
資金援助 | 米国, スイス, 5件
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引用 | ジャーナル: Mol Cell / 年: 2021 タイトル: Solenoid architecture of HUWE1 contributes to ligase activity and substrate recognition. 著者: Moritz Hunkeler / Cyrus Y Jin / Michelle W Ma / Julie K Monda / Daan Overwijn / Eric J Bennett / Eric S Fischer / 要旨: HECT ubiquitin ligases play essential roles in metazoan development and physiology. The HECT ligase HUWE1 is central to the cellular stress response by mediating degradation of key death or survival ...HECT ubiquitin ligases play essential roles in metazoan development and physiology. The HECT ligase HUWE1 is central to the cellular stress response by mediating degradation of key death or survival factors, including Mcl1, p53, DDIT4, and Myc. Although mutations in HUWE1 and related HECT ligases are widely implicated in human disease, our molecular understanding remains limited. Here we present a comprehensive investigation of full-length HUWE1, deepening our understanding of this class of enzymes. The N-terminal ∼3,900 amino acids of HUWE1 are indispensable for proper ligase function, and our cryo-EM structures of HUWE1 offer a complete molecular picture of this large HECT ubiquitin ligase. HUWE1 forms an alpha solenoid-shaped assembly with a central pore decorated with protein interaction modules. Structures of HUWE1 variants linked to neurodevelopmental disorders as well as of HUWE1 bound to a model substrate link the functions of this essential enzyme to its three-dimensional organization. | ||||||||||||||||||
履歴 |
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-構造の表示
ムービー |
ムービービューア |
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構造ビューア | EMマップ: SurfViewMolmilJmol/JSmol |
添付画像 |
-ダウンロードとリンク
-EMDBアーカイブ
マップデータ | emd_23925.map.gz | 16.5 MB | EMDBマップデータ形式 | |
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ヘッダ (付随情報) | emd-23925-v30.xml emd-23925.xml | 30.3 KB 30.3 KB | 表示 表示 | EMDBヘッダ |
FSC (解像度算出) | emd_23925_fsc.xml | 12.9 KB | 表示 | FSCデータファイル |
画像 | emd_23925.png | 42.7 KB | ||
マスクデータ | emd_23925_msk_1.map | 184 MB | マスクマップ | |
Filedesc metadata | emd-23925.cif.gz | 9.7 KB | ||
その他 | emd_23925_additional_1.map.gz emd_23925_half_map_1.map.gz emd_23925_half_map_2.map.gz | 162.6 MB 145.6 MB 145.5 MB | ||
アーカイブディレクトリ | http://ftp.pdbj.org/pub/emdb/structures/EMD-23925 ftp://ftp.pdbj.org/pub/emdb/structures/EMD-23925 | HTTPS FTP |
-検証レポート
文書・要旨 | emd_23925_validation.pdf.gz | 863.1 KB | 表示 | EMDB検証レポート |
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文書・詳細版 | emd_23925_full_validation.pdf.gz | 862.7 KB | 表示 | |
XML形式データ | emd_23925_validation.xml.gz | 19.6 KB | 表示 | |
CIF形式データ | emd_23925_validation.cif.gz | 25.4 KB | 表示 | |
アーカイブディレクトリ | https://ftp.pdbj.org/pub/emdb/validation_reports/EMD-23925 ftp://ftp.pdbj.org/pub/emdb/validation_reports/EMD-23925 | HTTPS FTP |
-関連構造データ
-リンク
EMDBのページ | EMDB (EBI/PDBe) / EMDataResource |
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「今月の分子」の関連する項目 |
-マップ
ファイル | ダウンロード / ファイル: emd_23925.map.gz / 形式: CCP4 / 大きさ: 184 MB / タイプ: IMAGE STORED AS FLOATING POINT NUMBER (4 BYTES) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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注釈 | main map from Relion PostProcess | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
投影像・断面図 | 画像のコントロール
画像は Spider により作成 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
ボクセルのサイズ | X=Y=Z: 0.825 Å | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
密度 |
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対称性 | 空間群: 1 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
詳細 | EMDB XML:
CCP4マップ ヘッダ情報:
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-添付データ
-マスク #1
ファイル | emd_23925_msk_1.map | ||||||||||||
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投影像・断面図 |
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密度ヒストグラム |
-追加マップ: main map postprocessed with deepEMhancer
ファイル | emd_23925_additional_1.map | ||||||||||||
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注釈 | main map postprocessed with deepEMhancer | ||||||||||||
投影像・断面図 |
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密度ヒストグラム |
-ハーフマップ: half map 1 from Relion refine
ファイル | emd_23925_half_map_1.map | ||||||||||||
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注釈 | half map 1 from Relion refine | ||||||||||||
投影像・断面図 |
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密度ヒストグラム |
-ハーフマップ: half map 2 from Relion refine
ファイル | emd_23925_half_map_2.map | ||||||||||||
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注釈 | half map 2 from Relion refine | ||||||||||||
投影像・断面図 |
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密度ヒストグラム |
-試料の構成要素
-全体 : E3 ubiquitin-protein ligase HUWE1 in complex with DDIT4
全体 | 名称: E3 ubiquitin-protein ligase HUWE1 in complex with DDIT4 |
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要素 |
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-超分子 #1: E3 ubiquitin-protein ligase HUWE1 in complex with DDIT4
超分子 | 名称: E3 ubiquitin-protein ligase HUWE1 in complex with DDIT4 タイプ: organelle_or_cellular_component / ID: 1 / 親要素: 0 / 含まれる分子: all / 詳細: full length |
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由来(天然) | 生物種: Homo sapiens (ヒト) |
分子量 | 理論値: 28 KDa |
-超分子 #2: E3 ubiquitin-protein ligase HUWE1
超分子 | 名称: E3 ubiquitin-protein ligase HUWE1 / タイプ: organelle_or_cellular_component / ID: 2 / 親要素: 1 / 含まれる分子: #1 / 詳細: full length |
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由来(天然) | 生物種: Homo sapiens (ヒト) |
-超分子 #3: DNA damage-inducible transcript 4 protein
超分子 | 名称: DNA damage-inducible transcript 4 protein / タイプ: organelle_or_cellular_component / ID: 3 / 親要素: 1 / 含まれる分子: #2 / 詳細: full length |
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由来(天然) | 生物種: Homo sapiens (ヒト) |
-分子 #1: E3 ubiquitin-protein ligase HUWE1
分子 | 名称: E3 ubiquitin-protein ligase HUWE1 / タイプ: protein_or_peptide / ID: 1 / コピー数: 1 / 光学異性体: LEVO / EC番号: HECT-type E3 ubiquitin transferase |
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由来(天然) | 生物種: Homo sapiens (ヒト) |
分子量 | 理論値: 486.409531 KDa |
組換発現 | 生物種: Homo sapiens (ヒト) |
配列 | 文字列: MDYKDDDDKL AAANSSIDLI STSLYKKAGF KGTNSVDMKV DRTKLKKTPT EAPADCRALI DKLKVCNDEQ LLLELQQIKT WNIGKCELY HWVDLLDRFD GILADAGQTV ENMSWMLVCD RPEREQLKML LLAVLNFTAL LIEYSFSRHL YSSIEHLTTL L ASSDMQVV ...文字列: MDYKDDDDKL AAANSSIDLI STSLYKKAGF KGTNSVDMKV DRTKLKKTPT EAPADCRALI DKLKVCNDEQ LLLELQQIKT WNIGKCELY HWVDLLDRFD GILADAGQTV ENMSWMLVCD RPEREQLKML LLAVLNFTAL LIEYSFSRHL YSSIEHLTTL L ASSDMQVV LAVLNLLYVF SKRSNYITRL GSDKRTPLLT RLQHLAESWG GKENGFGLAE CCRDLHMMKY PPSATTLHFE FY ADPGAEV KIEKRTTSNT LHYIHIEQLD KISESPSEIM ESLTKMYSIP KDKQMLLFTH IRLAHGFSNH RKRLQAVQAR LHA ISILVY SNALQESANS ILYNGLIEEL VDVLQITDKQ LMEIKAASLR TLTSIVHLER TPKLSSIIDC TGTASYHGFL PVLV RNCIQ AMIDPSMDPY PHQFATALFS FLYHLASYDA GGEALVSCGM MEALLKVIKF LGDEQDQITF VTRAVRVVDL ITNLD MAAF QSHSGLSIFI YRLEHEVDLC RKECPFVIKP KIQRPNTTQE GEEMETDMDG VQCIPQRAAL LKSMLNFLKK AIQDPA FSD GIRHVMDGSL PTSLKHIISN AEYYGPSLFL LATEVVTVFV FQEPSLLSSL QDNGLTDVML HALLIKDVPA TREVLGS LP NVFSALCLNA RGLQSFVQCQ PFERLFKVLL SPDYLPAMRR RRSSDPLGDT ASNLGSAVDE LMRHQPTLKT DATTAIIK L LEEICNLGRD PKYICQKPSI QKADGTATAP PPRSNHAAEE ASSEDEEEEE VQAMQSFNST QQNETEPNQQ VVGTEERIP IPLMDYILNV MKFVESILSN NTTDDHCQEF VNQKGLLPLV TILGLPNLPI DFPTSAACQA VAGVCKSILT LSHEPKVLQE GLLQLDSIL SSLEPLHRPI ESPGGSVLLR ELACAGNVAD ATLSAQATPL LHALTAAHAY IMMFVHTCRV GQSEIRSISV N QWGSQLGL SVLSKLSQLY CSLVWESTVL LSLCTPNSLP SGCEFGQADM QKLVPKDEKA GTTQGGKRSD GEQDGAAGSM DA STQGLLE GIGLDGDTLA PMETDEPTAS DSKGKSKITP AMAARIKQIK PLLSASSRLG RALAELFGLL VKLCVGSPVR QRR SHHAAS TTTAPTPAAR STASALTKLL TKGLSWQPPP YTPTPRFRLT FFICSVGFTS PMLFDERKYP YHLMLQKFLC SGGH NALFE TFNWALSMGG KVPVSEGLEH SDLPDGTGEF LDAWLMLVEK MVNPTTVLES PHSLPAKLPG GVQNFPQFSA LRFLV VTQK AAFTCIKNLW NRKPLKVYGG RMAESMLAIL CHILRGEPVI RERLSKEKEG SRGEEDTGQE EGGSRREPQV NQQQLQ QLM DMGFTREHAM EALLNTSTME QATEYLLTHP PPIMGGVVRD LSMSEEDQMM RAIAMSLGQD IPMDQRAESP EEVACRK EE EERKAREKQE EEEAKCLEKF QDADPLEQDE LHTFTDTMLP GCFHLLDELP DTVYRVCDLI MTAIKRNGAD YRDMILKQ V VNQVWEAADV LIKAALPLTT SDTKTVSEWI SQMATLPQAS NLATRILLLT LLFEELKLPC AWVVESSGIL NVLIKLLEV VQPCLQAAKE QKEVQTPKWI TPVLLLIDFY EKTAISSKRR AQMTKYLQSN SNNWRWFDDR SGRWCSYSAS NNSTIDSAWK SGETSVRFT AGRRRYTVQF TTMVQVNEET GNRRPVMLTL LRVPRLNKNS KNSNGQELEK TLEESKEMDI KRKENKGNDT P LALESTNT EKETSLEETK IGEILIQGLT EDMVTVLIRA CVSMLGVPVD PDTLHATLRL CLRLTRDHKY AMMFAELKST RM ILNLTQS SGFNGFTPLV TLLLRHIIED PCTLRHTMEK VVRSAATSGA GSTTSGVVSG SLGSREINYI LRVLGPAACR NPD IFTEVA NCCIRIALPA PRGSGTASDD EFENLRIKGP NAVQLVKTTP LKPSPLPVIP DTIKEVIYDM LNALAAYHAP EEAD KSDPK PGVMTQEVGQ LLQDMGDDVY QQYRSLTRQS SDFDTQSGFS INSQVFAADG ASTETSASGT SQGEASTPEE SRDGK KDKE GDRASEEGKQ KGKGSKPLMP TSTILRLLAE LVRSYVGIAT LIANYSYTVG QSELIKEDCS VLAFVLDHLL PHTQNA EDK DTPALARLFL ASLAAAGSGT DAQVALVNEV KAALGRALAM AESTEKHARL QAVMCIISTI MESCPSTSSF YSSATAK TQ HNGMNNIIRL FLKKGLVNDL ARVPHSLDLS SPNMANTVNA ALKPLETLSR IVNQPSSLFG SKSASSKNKS EQDAQGAS Q DSSSNQQDPG EPGEAEVQEE DHDVTQTEVA DGDIMDGEAE TDSVVIAGQP EVLSSQEMQV ENELEDLIDE LLERDGGSG NSTIIVSRSG EDESQEDVLM DEAPSNLSQA STLQANREDS MNILDPEDEE EHTQEEDSSG SNEDEDDSQD EEEEEEEDEE DDQEDDEGE EGDEDDDDDG SEMELDEDYP DMNASPLVRF ERFDREDDLI IEFDNMFSSA TDIPPSPGNI PTTHPLMVRH A DHSSLTLG SGSSTTRLTQ GIGRSQRTLR QLTANTGHTI HVHYPGNRQP NPPLILQRLL GPSAAADILQ LSSSLPLQSR GR ARLLVGN DDVHIIARSD DELLDDFFHD QSTATSQAGT LSSIPTALTR WTEECKVLDA ESMHDCVSVV KVSIVNHLEF LRD EELEER REKRRKQLAE EETKITDKGK EDKENRDQSA QCTASKSNDS TEQNLSDGTP MPDSYPTTPS STDAATSESK ETLG TLQSS QQQPTLPTPP ALGEVPQELQ SPAGEGGSST QLLMPVEPEE LGPTRPSGEA ETTQMELSPA PTITSLSPER AEDSD ALTA VSSQLEGSPM DTSSLASCTL EEAVGDTSAA GSSEQPRAGS STPGDAPPAV AEVQGRSDGS GESAQPPEDS SPPASS ESS STRDSAVAIS GADSRGILEE PLPSTSSEEE DPLAGISLPE GVDPSFLAAL PDDIRREVLQ NQLGIRPPTR TAPSTNS SA PAVVGNPGVT EVSPEFLAAL PPAIQEEVLA QQRAEQQRRE LAQNASSDTP MDPVTFIQTL PSDLRRSVLE DMEDSVLA V MPPDIAAEAQ ALRREQEARQ RQLMHERLFG HSSTSALSAI LRSPAFTSRL SGNRGVQYTR LAVQRGGTFQ MGGSSSHNR PSGSNVDTLL RLRGRLLLDH EALSCLLVLL FVDEPKLNTS RLHRVLRNLC YHAQTRHWVI RSLLSILQRS SESELCIETP KLTTSEEKG KKSSKSCGSS SHENRPLDLL HKMESKSSNQ LSWLSVSMDA ALGCRTNIFQ IQRSGGRKHT EKHASGGSTV H IHPQAAPV VCRHVLDTLI QLAKVFPSHF TQQRTKETNC ESDRERGNKA CSPCSSQSSS SGICTDFWDL LVKLDNMNVS RK GKNSVKS VPVSAGGEGE TSPYSLEASP LGQLMNMLSH PVIRRSSLLT EKLLRLLSLI SIALPENKVS EAQANSGSGA SST TTATST TSTTTTTAAS TTPTPPTAPT PVTSAPALVA ATAISTIVVA ASTTVTTPTT ATTTVSISPT TKGSKSPAKV SDGG SSSTD FKMVSSGLTE NQLQLSVEVL TSHSCSEEGL EDAANVLLQL SRGDSGTRDT VLKLLLNGAR HLGYTLCKQI GTLLA ELRE YNLEQQRRAQ CETLSPDGLP EEQPQTTKLK GKMQSRFDMA ENVVIVASQK RPLGGRELQL PSMSMLTSKT STQKFF LRV LQVIIQLRDD TRRANKKAKQ TGRLGSSGLG SASSIQAAVR QLEAEADAII QMVREGQRAR RQQQAATSES SQSEASV RR EESPMDVDQP SPSAQDTQSI ASDGTPQGEK EKEERPPELP LLSEQLSLDE LWDMLGECLK ELEESHDQHA VLVLQPAV E AFFLVHATER ESKPPVRDTR ESQLAHIKDE PPPLSPAPLT PATPSSLDPF FSREPSSMHI SSSLPPDTQK FLRFAETHR TVLNQILRQS TTHLADGPFA VLVDYIRVLD FDVKRKYFRQ ELERLDEGLR KEDMAVHVRR DHVFEDSYRE LHRKSPEEMK NRLYIVFEG EEGQDAGGLL REWYMIISRE MFNPMYALFR TSPGDRVTYT INPSSHCNPN HLSYFKFVGR IVAKAVYDNR L LECYFTRS FYKHILGKSV RYTDMESEDY HFYQGLVYLL ENDVSTLGYD LTFSTEVQEF GVCEVRDLKP NGANILVTEE NK KEYVHLV CQMRMTGAIR KQLAAFLEGF YEIIPKRLIS IFTEQELELL ISGLPTIDID DLKSNTEYHK YQSNSIQIQW FWR ALRSFD QADRAKFLQF VTGTSKVPLQ GFAALEGMNG IQKFQIHRDD RSTDRLPSAH TCFNQLDLPA YESFEKLRHM LLLA IQECS EGFGLA UniProtKB: E3 ubiquitin-protein ligase HUWE1 |
-分子 #2: DNA damage-inducible transcript 4 protein
分子 | 名称: DNA damage-inducible transcript 4 protein / タイプ: protein_or_peptide / ID: 2 / コピー数: 1 / 光学異性体: LEVO |
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由来(天然) | 生物種: Homo sapiens (ヒト) |
分子量 | 理論値: 28.43682 KDa |
組換発現 | 生物種: Trichoplusia ni (イラクサキンウワバ) |
配列 | 文字列: MDSAWSHPQF EKSAVDENLY FQGGGRTMPS LWDRFSSSST SSSPSSLPRT PTPDRPPRSA WGSATREEGF DRSTSLESSD CESLDSSNS GFGPEEDTAY LDGVSLPDFE LLSDPEDEHL CANLMQLLQE SLAQARLGSR RPARLLMPSQ LVSQVGKELL R LAYSEPCG ...文字列: MDSAWSHPQF EKSAVDENLY FQGGGRTMPS LWDRFSSSST SSSPSSLPRT PTPDRPPRSA WGSATREEGF DRSTSLESSD CESLDSSNS GFGPEEDTAY LDGVSLPDFE LLSDPEDEHL CANLMQLLQE SLAQARLGSR RPARLLMPSQ LVSQVGKELL R LAYSEPCG LRGALLDVCV EQGKSCHSVG QLALDPSLVP TFQLTLVLRL DSRLWPKIQG LFSSANSPFL PGFSQSLTLS TG FRVIKKK LYSSEQLLIE EC UniProtKB: DNA damage-inducible transcript 4 protein |
-実験情報
-構造解析
手法 | クライオ電子顕微鏡法 |
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解析 | 単粒子再構成法 |
試料の集合状態 | particle |
-試料調製
濃度 | 1.5 mg/mL | |||||||||
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緩衝液 | pH: 7.4 構成要素:
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グリッド | モデル: Quantifoil R1.2/1.3 / 材質: COPPER / メッシュ: 300 / 支持フィルム - 材質: CARBON / 支持フィルム - トポロジー: HOLEY ARRAY / 支持フィルム - Film thickness: 12 / 前処理 - タイプ: GLOW DISCHARGE / 前処理 - 時間: 60 sec. / 前処理 - 雰囲気: AIR / 前処理 - 気圧: 0.039 kPa | |||||||||
凍結 | 凍結剤: ETHANE / チャンバー内湿度: 95 % / チャンバー内温度: 283 K / 装置: LEICA EM GP 詳細: CHAPSO detergent added to final conc. of 1 mM. Sample applied twice.. | |||||||||
詳細 | Monodisperse sample |
-電子顕微鏡法
顕微鏡 | FEI TITAN KRIOS |
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詳細 | Data collection in counting mode, using multi-shot scheme (4 holes per stage position, 2 movies per hole) |
撮影 | フィルム・検出器のモデル: GATAN K3 BIOQUANTUM (6k x 4k) デジタル化 - サイズ - 横: 5760 pixel / デジタル化 - サイズ - 縦: 4092 pixel / 撮影したグリッド数: 1 / 実像数: 7208 / 平均露光時間: 2.497 sec. / 平均電子線量: 53.34 e/Å2 |
電子線 | 加速電圧: 300 kV / 電子線源: FIELD EMISSION GUN |
電子光学系 | C2レンズ絞り径: 50.0 µm / 照射モード: FLOOD BEAM / 撮影モード: BRIGHT FIELD / Cs: 2.7 mm / 最大 デフォーカス(公称値): -2.5 µm / 最小 デフォーカス(公称値): -1.0 µm / 倍率(公称値): 105000 |
試料ステージ | 試料ホルダーモデル: FEI TITAN KRIOS AUTOGRID HOLDER ホルダー冷却材: NITROGEN |
実験機器 | モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company |