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万見
- EMDB-22400: Cryo-EM structure of Rous sarcoma virus cleaved synaptic complex ... -

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基本情報

登録情報
データベース: EMDB / ID: EMD-22400
タイトルCryo-EM structure of Rous sarcoma virus cleaved synaptic complex (CSC) with HIV-1 integrase strand transfer inhibitor MK-2048
マップデータContour level 0.4 set in Chimera with step level 1
試料
  • 複合体: Cleaved synaptic complex (CSC) formed with Rous sarcoma virus integrase and viral DNA in presence of HIV-1 integrase strand inhibitor MK-2048
    • タンパク質・ペプチド: integrase
    • DNA: DNA (5'-D(*AP*AP*TP*GP*TP*TP*GP*TP*CP*TP*TP*AP*TP*GP*CP*AP*AP*T)-3')
    • DNA: DNA (5'-D(*AP*TP*TP*GP*CP*AP*TP*AP*AP*GP*AP*CP*AP*AP*CP*A)-3')
  • リガンド: ZINC ION
  • リガンド: (6S)-2-(3-chloro-4-fluorobenzyl)-8-ethyl-10-hydroxy-N,6-dimethyl-1,9-dioxo-1,2,6,7,8,9-hexahydropyrazino[1',2':1,5]pyrrolo[2,3-d]pyridazine-4-carboxamide
  • リガンド: MAGNESIUM ION
キーワードintasome / integrase-viral DNA complex / HYDROLASE-DNA-INHIBITOR complex
機能・相同性
機能・相同性情報


ribonuclease H / 加水分解酵素; プロテアーゼ; ペプチド結合加水分解酵素; アスパラギン酸プロテアーゼ / DNA integration / viral genome integration into host DNA / RNA-directed DNA polymerase / establishment of integrated proviral latency / RNA stem-loop binding / RNA-directed DNA polymerase activity / RNA-DNA hybrid ribonuclease activity / 転移酵素; リンを含む基を移すもの; 核酸を移すもの ...ribonuclease H / 加水分解酵素; プロテアーゼ; ペプチド結合加水分解酵素; アスパラギン酸プロテアーゼ / DNA integration / viral genome integration into host DNA / RNA-directed DNA polymerase / establishment of integrated proviral latency / RNA stem-loop binding / RNA-directed DNA polymerase activity / RNA-DNA hybrid ribonuclease activity / 転移酵素; リンを含む基を移すもの; 核酸を移すもの / viral nucleocapsid / DNA recombination / DNA-directed DNA polymerase / 加水分解酵素; エステル加水分解酵素 / aspartic-type endopeptidase activity / DNA-directed DNA polymerase activity / symbiont entry into host cell / viral translational frameshifting / proteolysis / DNA binding / zinc ion binding
類似検索 - 分子機能
Retroviral Gag polyprotein, M / Retroviral M domain / gag protein p24 N-terminal domain / Reverse transcriptase thumb / Reverse transcriptase thumb domain / Integrase Zinc binding domain / Zinc finger integrase-type profile. / Integrase-like, N-terminal / Integrase DNA binding domain / Integrase, C-terminal domain superfamily, retroviral ...Retroviral Gag polyprotein, M / Retroviral M domain / gag protein p24 N-terminal domain / Reverse transcriptase thumb / Reverse transcriptase thumb domain / Integrase Zinc binding domain / Zinc finger integrase-type profile. / Integrase-like, N-terminal / Integrase DNA binding domain / Integrase, C-terminal domain superfamily, retroviral / Integrase, N-terminal zinc-binding domain / Integrase, C-terminal, retroviral / Integrase DNA binding domain profile. / Integrase core domain / Integrase, catalytic core / Integrase catalytic domain profile. / Retropepsin-like catalytic domain / RNase H type-1 domain profile. / Ribonuclease H domain / Matrix protein, lentiviral and alpha-retroviral, N-terminal / Reverse transcriptase domain / Reverse transcriptase (RT) catalytic domain profile. / Retropepsins / Retroviral aspartyl protease / Aspartyl protease, retroviral-type family profile. / Peptidase A2A, retrovirus, catalytic / Reverse transcriptase (RNA-dependent DNA polymerase) / Retroviral matrix protein / Retrovirus capsid, C-terminal / Retrovirus capsid, N-terminal / zinc finger / Zinc knuckle / Zinc finger, CCHC-type superfamily / Zinc finger, CCHC-type / Zinc finger CCHC-type profile. / Aspartic peptidase, active site / Eukaryotic and viral aspartyl proteases active site. / Ribonuclease H superfamily / Aspartic peptidase domain superfamily / Ribonuclease H-like superfamily / Reverse transcriptase/Diguanylate cyclase domain / DNA/RNA polymerase superfamily
類似検索 - ドメイン・相同性
Gag-Pol polyprotein
類似検索 - 構成要素
生物種Rous sarcoma virus (strain Schmidt-Ruppin A) (ラウス肉腫ウイルス)
手法単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 3.21 Å
データ登録者Pandey KK / Bera S
資金援助 米国, 2件
OrganizationGrant number国
National Institutes of Health/National Institute Of Allergy and Infectious Diseases (NIH/NIAID)AI127196 米国
National Institutes of Health/National Institute of General Medical Sciences (NIH/NIGMS)GM118047 米国
引用ジャーナル: Commun Biol / 年: 2021
タイトル: Cryo-EM structure of the Rous sarcoma virus octameric cleaved synaptic complex intasome.
著者: Krishan K Pandey / Sibes Bera / Ke Shi / Michael J Rau / Amarachi V Oleru / James A J Fitzpatrick / Alan N Engelman / Hideki Aihara / Duane P Grandgenett /
要旨: Despite conserved catalytic integration mechanisms, retroviral intasomes composed of integrase (IN) and viral DNA possess diverse structures with variable numbers of IN subunits. To investigate ...Despite conserved catalytic integration mechanisms, retroviral intasomes composed of integrase (IN) and viral DNA possess diverse structures with variable numbers of IN subunits. To investigate intasome assembly mechanisms, we employed the Rous sarcoma virus (RSV) IN dimer that assembles a precursor tetrameric structure in transit to the mature octameric intasome. We determined the structure of RSV octameric intasome stabilized by a HIV-1 IN strand transfer inhibitor using single particle cryo-electron microscopy. The structure revealed significant flexibility of the two non-catalytic distal IN dimers along with previously unrecognized movement of the conserved intasome core, suggesting ordered conformational transitions between intermediates that may be important to capture the target DNA. Single amino acid substitutions within the IN C-terminal domain affected intasome assembly and function in vitro and infectivity of pseudotyped RSV virions. Unexpectedly, 17 C-terminal amino acids of IN were dispensable for virus infection despite regulating the transition of the tetrameric intasome to the octameric form in vitro. We speculate that this region may regulate the binding of highly flexible distal IN dimers to the intasome core to form the octameric complex. Our studies reveal key steps in the assembly of RSV intasomes.
履歴
登録2020年8月3日-
ヘッダ(付随情報) 公開2021年3月17日-
マップ公開2021年3月17日-
更新2024年5月15日-
現状2024年5月15日処理サイト: RCSB / 状態: 公開

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構造の表示

ムービー
  • 表面図（断面を密度値に従い着色）
  • 表面レベル: 0.4
  • UCSF Chimeraによる作画
  • ダウンロード
  • 表面図（円筒半径に従い着色）
  • 表面レベル: 0.4
  • UCSF Chimeraによる作画
  • ダウンロード
  • あてはめたモデルとの重ね合わせ
  • 原子モデル: PDB-7jn3
  • 表面レベル: 0.4
  • UCSF Chimeraによる作画
  • ダウンロード
ムービービューア
構造ビューアEMマップ:
SurfViewMolmilJmol/JSmol
添付画像

emd_22400.png

ダウンロードとリンク

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マップ

ファイルダウンロード / ファイル: emd_22400.map.gz / 形式: CCP4 / 大きさ: 216 MB / タイプ: IMAGE STORED AS FLOATING POINT NUMBER (4 BYTES)
注釈Contour level 0.4 set in Chimera with step level 1
投影像・断面図

画像のコントロール

大きさ
明度
コントラスト
その他
軸Z (Sec.)Y (Row.)X (Col.)
1.1 Å/pix.
x 384 pix.
= 422.4 Å		1.1 Å/pix.
x 384 pix.
= 422.4 Å		1.1 Å/pix.
x 384 pix.
= 422.4 Å

表面

投影像

断面 (1/3)

断面 (1/2)

断面 (2/3)

画像は Spider により作成

ボクセルのサイズX=Y=Z: 1.1 Å
密度

ヒストグラム

ヒストグラム (対数)
表面レベル登録者による: 0.4 / ムービー #1: 0.4
最小 - 最大-1.9537196 - 4.007259
平均 (標準偏差)-0.0007246915 (±0.0622045)
対称性空間群: 1
詳細

EMDB XML:

マップ形状
Axis orderXYZ
Origin000
サイズ384384384
Spacing384384384
セルA=B=C: 422.40002 Å
α=β=γ: 90.0 °

CCP4マップ ヘッダ情報:

modeImage stored as Reals
Å/pix. X/Y/Z1.11.11.1
M x/y/z384384384
origin x/y/z0.0000.0000.000
length x/y/z422.400422.400422.400
α/β/γ90.00090.00090.000
MAP C/R/S123
start NC/NR/NS000
NC/NR/NS384384384
D min/max/mean-1.9544.007-0.001

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添付データ

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ハーフマップ: half-map A: Contour level 0.4 set in Chimera with step level 1

ファイルemd_22400_half_map_1.map
注釈half-map A: Contour level 0.4 set in Chimera with step level 1
投影像・断面図
軸ZYX

投影像

断面 (1/2)
密度ヒストグラム

ヒストグラム

ヒストグラム (対数)

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ハーフマップ: half-map B: Contour level 0.4 set in Chimera with step level 1

ファイルemd_22400_half_map_2.map
注釈half-map B: Contour level 0.4 set in Chimera with step level 1
投影像・断面図
軸ZYX

投影像

断面 (1/2)
密度ヒストグラム

ヒストグラム

ヒストグラム (対数)

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試料の構成要素

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全体 : Cleaved synaptic complex (CSC) formed with Rous sarcoma virus int...

全体名称: Cleaved synaptic complex (CSC) formed with Rous sarcoma virus integrase and viral DNA in presence of HIV-1 integrase strand inhibitor MK-2048
要素
  • 複合体: Cleaved synaptic complex (CSC) formed with Rous sarcoma virus integrase and viral DNA in presence of HIV-1 integrase strand inhibitor MK-2048
    • タンパク質・ペプチド: integrase
    • DNA: DNA (5'-D(*AP*AP*TP*GP*TP*TP*GP*TP*CP*TP*TP*AP*TP*GP*CP*AP*AP*T)-3')
    • DNA: DNA (5'-D(*AP*TP*TP*GP*CP*AP*TP*AP*AP*GP*AP*CP*AP*AP*CP*A)-3')
  • リガンド: ZINC ION
  • リガンド: (6S)-2-(3-chloro-4-fluorobenzyl)-8-ethyl-10-hydroxy-N,6-dimethyl-1,9-dioxo-1,2,6,7,8,9-hexahydropyrazino[1',2':1,5]pyrrolo[2,3-d]pyridazine-4-carboxamide
  • リガンド: MAGNESIUM ION

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超分子 #1: Cleaved synaptic complex (CSC) formed with Rous sarcoma virus int...

超分子名称: Cleaved synaptic complex (CSC) formed with Rous sarcoma virus integrase and viral DNA in presence of HIV-1 integrase strand inhibitor MK-2048
タイプ: complex / ID: 1 / 親要素: 0 / 含まれる分子: #1-#3
由来(天然)生物種: Rous sarcoma virus (strain Schmidt-Ruppin A) (ラウス肉腫ウイルス)
分子量理論値: 257 KDa

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分子 #1: integrase

分子名称: integrase / タイプ: protein_or_peptide / ID: 1 / コピー数: 8 / 光学異性体: LEVO
EC番号: 加水分解酵素; プロテアーゼ; ペプチド結合加水分解酵素; アスパラギン酸プロテアーゼ
由来(天然)生物種: Rous sarcoma virus (strain Schmidt-Ruppin A) (ラウス肉腫ウイルス)
株: Schmidt-Ruppin A
分子量理論値: 30.926582 KDa
組換発現生物種: Escherichia coli BL21(DE3) (大腸菌)
配列文字列: PLREAKDLHT ALHIGPRALS KACNISMQQA REVVQTCPHC NSAPALEAGV NPRGLGPLQI WQTDFTLEPR MAPRSWLAVT VDTASSAIV VTQHGRVTSV AVQHHWATAI AVLGRPKAIK TDNGSCFTSK STREWLARWG IAHTTGIPGN SQGQAMVERA N RLLKDKIR ...文字列:
PLREAKDLHT ALHIGPRALS KACNISMQQA REVVQTCPHC NSAPALEAGV NPRGLGPLQI WQTDFTLEPR MAPRSWLAVT VDTASSAIV VTQHGRVTSV AVQHHWATAI AVLGRPKAIK TDNGSCFTSK STREWLARWG IAHTTGIPGN SQGQAMVERA N RLLKDKIR VLAEGDGFMK RIPTSKQGEL LAKAMYALNH FERGENTKTP IQKHWRPTVL TEGPPVKIRI ETGEWEKGWN VL VWGRGYA AVKNRDTDKV IWVPSRKVKP DITQKDEVTK K

UniProtKB: Gag-Pol polyprotein

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分子 #2: DNA (5'-D(*AP*AP*TP*GP*TP*TP*GP*TP*CP*TP*TP*AP*TP*GP*CP*AP*AP*T)-3')

分子名称: DNA (5'-D(*AP*AP*TP*GP*TP*TP*GP*TP*CP*TP*TP*AP*TP*GP*CP*AP*AP*T)-3')
タイプ: dna / ID: 2 / コピー数: 2 / 分類: DNA
由来(天然)生物種: Rous sarcoma virus (strain Schmidt-Ruppin A) (ラウス肉腫ウイルス)
分子量理論値: 5.5206 KDa
配列文字列:
(DA)(DA)(DT)(DG)(DT)(DT)(DG)(DT)(DC)(DT) (DT)(DA)(DT)(DG)(DC)(DA)(DA)(DT)

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分子 #3: DNA (5'-D(*AP*TP*TP*GP*CP*AP*TP*AP*AP*GP*AP*CP*AP*AP*CP*A)-3')

分子名称: DNA (5'-D(*AP*TP*TP*GP*CP*AP*TP*AP*AP*GP*AP*CP*AP*AP*CP*A)-3')
タイプ: dna / ID: 3 / コピー数: 2 / 分類: DNA
由来(天然)生物種: Rous sarcoma virus (strain Schmidt-Ruppin A) (ラウス肉腫ウイルス)
分子量理論値: 4.899232 KDa
配列文字列:
(DA)(DT)(DT)(DG)(DC)(DA)(DT)(DA)(DA)(DG) (DA)(DC)(DA)(DA)(DC)(DA)

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分子 #4: ZINC ION

分子名称: ZINC ION / タイプ: ligand / ID: 4 / コピー数: 2 / 式: ZN
分子量理論値: 65.409 Da

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分子 #5: (6S)-2-(3-chloro-4-fluorobenzyl)-8-ethyl-10-hydroxy-N,6-dimethyl-...

分子名称: (6S)-2-(3-chloro-4-fluorobenzyl)-8-ethyl-10-hydroxy-N,6-dimethyl-1,9-dioxo-1,2,6,7,8,9-hexahydropyrazino[1',2':1,5]pyrrolo[2,3-d]pyridazine-4-carboxamide
タイプ: ligand / ID: 5 / コピー数: 2 / 式: ZZX
分子量理論値: 461.874 Da
Chemical component information

ChemComp-ZZX:
(6S)-2-(3-chloro-4-fluorobenzyl)-8-ethyl-10-hydroxy-N,6-dimethyl-1,9-dioxo-1,2,6,7,8,9-hexahydropyrazino[1',2':1,5]pyrrolo[2,3-d]pyridazine-4-carboxamide / 阻害剤*YM

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分子 #6: MAGNESIUM ION

分子名称: MAGNESIUM ION / タイプ: ligand / ID: 6 / コピー数: 4 / 式: MG
分子量理論値: 24.305 Da

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実験情報

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構造解析

手法クライオ電子顕微鏡法
解析単粒子再構成法
試料の集合状態particle

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試料調製

濃度0.5 mg/mL
緩衝液pH: 7.5
グリッドモデル: Quantifoil / 材質: COPPER / メッシュ: 300 / 支持フィルム - 材質: CARBON / 支持フィルム - トポロジー: HOLEY / 支持フィルム - Film thickness: 12 / 前処理 - タイプ: PLASMA CLEANING / 前処理 - 時間: 60 sec. / 前処理 - 雰囲気: AIR
凍結凍結剤: ETHANE / チャンバー内湿度: 100 % / チャンバー内温度: 277 K / 装置: FEI VITROBOT MARK IV

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電子顕微鏡法

顕微鏡TFS KRIOS
特殊光学系エネルギーフィルター - 名称: GIF Bioquantum / エネルギーフィルター - スリット幅: 20 eV
撮影フィルム・検出器のモデル: GATAN K2 SUMMIT (4k x 4k)
検出モード: SUPER-RESOLUTION / 実像数: 5187 / 平均電子線量: 66.0 e/Å2
詳細: Images were collected in movie mode at 0.2 seconds per frame.
電子線加速電圧: 300 kV / 電子線源: FIELD EMISSION GUN
電子光学系照射モード: FLOOD BEAM / 撮影モード: BRIGHT FIELD / Cs: 0.01 mm / 倍率（公称値）: 105000
試料ステージ試料ホルダーモデル: FEI TITAN KRIOS AUTOGRID HOLDER
ホルダー冷却材: NITROGEN
実験機器
モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company

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画像解析

粒子像選択選択した数: 1811357
初期モデルモデルのタイプ: PDB ENTRY
PDBモデル - PDB ID:

5ejk

最終 再構成使用したクラス数: 1 / アルゴリズム: FOURIER SPACE / 解像度のタイプ: BY AUTHOR / 解像度: 3.21 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / 使用した粒子像数: 456948
初期 角度割当タイプ: NOT APPLICABLE
最終 角度割当タイプ: NOT APPLICABLE
最終 3次元分類クラス数: 5 / 平均メンバー数/クラス: 362307 / ソフトウェア - 名称: cryoSPARC
FSC曲線 (解像度の算出)

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原子モデル構築 1

初期モデルPDB ID:

5ejk


Chain - Source name: PDB / Chain - Initial model type: experimental model
精密化空間: REAL / プロトコル: RIGID BODY FIT / 温度因子: 30 / 当てはまり具合の基準: correlation coefficient
得られたモデル

PDB-7jn3:
Cryo-EM structure of Rous sarcoma virus cleaved synaptic complex (CSC) with HIV-1 integrase strand transfer inhibitor MK-2048

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万見について

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お知らせ

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2022年2月9日: EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

  • EMDBのヘッダファイルのバージョン3が、公式のフォーマットとなりました。
  • これまでは公式だったバージョン1.9は、アーカイブから削除されます。

関連情報:EMDBヘッダ

外部リンク:wwPDBはEMDBデータモデルのバージョン3へ移行します

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2020年8月12日: 新型コロナ情報

新型コロナ情報

URL: https://pdbj.org/emnavi/covid19.php

新ページ: EM Navigatorに新型コロナウイルスの特設ページを開設しました。

関連情報:Covid-19情報 / 2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

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2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

新型コロナウイルスの構造データ

関連情報:万見生物種 / 2020年8月12日: 新型コロナ情報

外部リンク:COVID-19特集ページ - PDBj / 今月の分子2020年2月：コロナウイルスプロテーアーゼ

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2019年1月31日: EMDBのIDの桁数の変更

EMDBのIDの桁数の変更

  • EMDBエントリに付与されているアクセスコード(EMDB-ID)は4桁の数字(例、EMD-1234)でしたが、間もなく枯渇します。これまでの4桁のID番号は4桁のまま変更されませんが、4桁の数字を使い切った後に発行されるIDは5桁以上の数字(例、EMD-12345)になります。5桁のIDは2019年の春頃から発行される見通しです。
  • EM Navigator/万見では、接頭語「EMD-」は省略されています。

関連情報:Q: 「EMD」とは何ですか？ / 万見/EM NavigatorにおけるID/アクセスコードの表記

外部リンク:EMDB Accession Codes are Changing Soon! / PDBjへお問い合わせ

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2017年7月12日: PDB大規模アップデート

PDB大規模アップデート

  • 新バージョンのPDBx/mmCIF辞書形式に基づくデータがリリースされました。
  • 今回の更新はバージョン番号が4から5になる大規模なもので、全エントリデータの書き換えが行われる「Remediation」というアップデートに該当します。
  • このバージョンアップで、電子顕微鏡の実験手法に関する多くの項目の書式が改定されました(例：em_softwareなど)。
  • EM NavigatorとYorodumiでも、この改定に基づいた表示内容になります。

外部リンク:wwPDB Remediation / OneDepデータ基準に準拠した、より強化された内容のモデル構造ファイルが、PDBアーカイブで公開されました。

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万見 (Yorodumi)

幾万の構造データを、幾万の視点から

  • 万見(Yorodumi)は、EMDB/PDB/SASBDBなどの構造データを閲覧するためのページです。
  • EM Navigatorの詳細ページの後継、Omokage検索のフロントエンドも兼ねています。

関連情報:EMDB / PDB / SASBDB / 3つのデータバンクの比較 / 万見検索 / 2016年8月31日: 新しいEM Navigatorと万見 / 万見文献 / Jmol/JSmol / 機能・相同性情報 / 新しいEM Navigatorと万見の変更点

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