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万見
- EMDB-21892: ClpX-ClpP complex bound to ssrA-tagged GFP, intermediate complex -

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基本情報

登録情報
データベース: EMDB / ID: EMD-21892
タイトルClpX-ClpP complex bound to ssrA-tagged GFP, intermediate complex
マップデータPhenix sharpened map. After focused classification.
試料
  • 複合体: ClpX-ClpP-GFPssrA-ATP/ATPrS
    • タンパク質・ペプチド: ATP-dependent Clp protease ATP-binding subunit ClpX
    • タンパク質・ペプチド: ATP-dependent Clp protease proteolytic subunit
    • タンパク質・ペプチド: Green fluorescent protein, + ssrA tag
  • リガンド: PHOSPHOTHIOPHOSPHORIC ACID-ADENYLATE ESTER
  • リガンド: MAGNESIUM ION
  • リガンド: water
キーワードProtein degradation / AAA+ protease complex / CHAPERONE
機能・相同性
機能・相同性情報


protein denaturation / HslUV protease complex / endopeptidase Clp / endopeptidase Clp complex / positive regulation of programmed cell death / response to temperature stimulus / ATP-dependent peptidase activity / protein quality control for misfolded or incompletely synthesized proteins / protein unfolding / proteasomal protein catabolic process ...protein denaturation / HslUV protease complex / endopeptidase Clp / endopeptidase Clp complex / positive regulation of programmed cell death / response to temperature stimulus / ATP-dependent peptidase activity / protein quality control for misfolded or incompletely synthesized proteins / protein unfolding / proteasomal protein catabolic process / serine-type peptidase activity / bioluminescence / proteolysis involved in protein catabolic process / generation of precursor metabolites and energy / ATP-dependent protein folding chaperone / response to radiation / disordered domain specific binding / unfolded protein binding / ATPase binding / response to heat / protease binding / protein dimerization activity / cell division / serine-type endopeptidase activity / ATP hydrolysis activity / proteolysis / zinc ion binding / ATP binding / identical protein binding / membrane / cytosol
類似検索 - 分子機能
Clp protease, ATP-binding subunit ClpX, bacteria / Zinc finger, ClpX C4-type superfamily / ClpX C4-type zinc finger / Clp protease, ATP-binding subunit ClpX / Zinc finger, ClpX C4-type / ClpX zinc binding (ZB) domain profile. / ClpX C4-type zinc finger / : / ClpP, Ser active site / Endopeptidase Clp serine active site. ...Clp protease, ATP-binding subunit ClpX, bacteria / Zinc finger, ClpX C4-type superfamily / ClpX C4-type zinc finger / Clp protease, ATP-binding subunit ClpX / Zinc finger, ClpX C4-type / ClpX zinc binding (ZB) domain profile. / ClpX C4-type zinc finger / : / ClpP, Ser active site / Endopeptidase Clp serine active site. / ClpP, histidine active site / Endopeptidase Clp histidine active site. / ATP-dependent Clp protease proteolytic subunit / Clp protease proteolytic subunit /Translocation-enhancing protein TepA / Clp protease / Clp ATPase, C-terminal / AAA domain (Cdc48 subfamily) / C-terminal, D2-small domain, of ClpB protein / C-terminal, D2-small domain, of ClpB protein / ClpP/crotonase-like domain superfamily / Green fluorescent protein, GFP / Green fluorescent protein-related / Green fluorescent protein / Green fluorescent protein / ATPase, AAA-type, core / ATPases associated with a variety of cellular activities / AAA+ ATPase domain / P-loop containing nucleoside triphosphate hydrolase
類似検索 - ドメイン・相同性
ATP-dependent Clp protease proteolytic subunit / ATP-dependent Clp protease ATP-binding subunit ClpX / Green fluorescent protein
類似検索 - 構成要素
生物種Escherichia coli (大腸菌) / synthetic construct (人工物)
手法単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 3.16 Å
データ登録者Fei X / Sauer RT
資金援助 米国, 1件
OrganizationGrant number国
National Institutes of Health/National Institute of General Medical Sciences (NIH/NIGMS)GM-101988 米国
引用ジャーナル: Elife / 年: 2020
タイトル: Structural basis of ClpXP recognition and unfolding of ssrA-tagged substrates.
著者: Xue Fei / Tristan A Bell / Sarah R Barkow / Tania A Baker / Robert T Sauer /
要旨: When ribosomes fail to complete normal translation, all cells have mechanisms to ensure degradation of the resulting partial proteins to safeguard proteome integrity. In and other eubacteria, the ...When ribosomes fail to complete normal translation, all cells have mechanisms to ensure degradation of the resulting partial proteins to safeguard proteome integrity. In and other eubacteria, the tmRNA system rescues stalled ribosomes and adds an ssrA tag or degron to the C-terminus of the incomplete protein, which directs degradation by the AAA+ ClpXP protease. Here, we present cryo-EM structures of ClpXP bound to the ssrA degron. C-terminal residues of the ssrA degron initially bind in the top of an otherwise closed ClpX axial channel and subsequently move deeper into an open channel. For short-degron protein substrates, we show that unfolding can occur directly from the initial closed-channel complex. For longer degron substrates, our studies illuminate how ClpXP transitions from specific recognition into a nonspecific unfolding and translocation machine. Many AAA+ proteases and protein-remodeling motors are likely to employ similar multistep recognition and engagement strategies.
履歴
登録2020年4月30日-
ヘッダ(付随情報) 公開2020年11月4日-
マップ公開2020年11月4日-
更新2024年3月6日-
現状2024年3月6日処理サイト: RCSB / 状態: 公開

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構造の表示

ムービー
  • 表面図（断面を密度値に従い着色）
  • 表面レベル: 5.6
  • UCSF Chimeraによる作画
  • ダウンロード
  • 表面図（円筒半径に従い着色）
  • 表面レベル: 5.6
  • UCSF Chimeraによる作画
  • ダウンロード
  • あてはめたモデルとの重ね合わせ
  • 原子モデル: PDB-6wsg
  • 表面レベル: 5.6
  • UCSF Chimeraによる作画
  • ダウンロード
ムービービューア
構造ビューアEMマップ:
SurfViewMolmilJmol/JSmol
添付画像

emd_21892.png

ダウンロードとリンク

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マップ

ファイルダウンロード / ファイル: emd_21892.map.gz / 形式: CCP4 / 大きさ: 244.1 MB / タイプ: IMAGE STORED AS FLOATING POINT NUMBER (4 BYTES)
注釈Phenix sharpened map. After focused classification.
ボクセルのサイズX=Y=Z: 0.87 Å
密度
表面レベル登録者による: 5.6 / ムービー #1: 5.6
最小 - 最大-18.793009999999999 - 53.081679999999999
平均 (標準偏差)-0.000000000002816 (±1.0)
対称性空間群: 1
詳細

EMDB XML:

マップ形状
Axis orderZYX
Origin000
サイズ400400400
Spacing400400400
セルA=B=C: 348.0 Å
α=β=γ: 90.0 °

CCP4マップ ヘッダ情報:

modeImage stored as Reals
Å/pix. X/Y/Z0.870.870.87
M x/y/z400400400
origin x/y/z0.0000.0000.000
length x/y/z348.000348.000348.000
α/β/γ90.00090.00090.000
start NX/NY/NZ000
NX/NY/NZ400400400
MAP C/R/S321
start NC/NR/NS000
NC/NR/NS400400400
D min/max/mean-18.79353.082-0.000

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添付データ

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マスク #1

ファイルemd_21892_msk_1.map
投影像・断面図
軸ZYX

投影像

断面 (1/2)
密度ヒストグラム

ヒストグラム

ヒストグラム (対数)

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試料の構成要素

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全体 : ClpX-ClpP-GFPssrA-ATP/ATPrS

全体名称: ClpX-ClpP-GFPssrA-ATP/ATPrS
要素
  • 複合体: ClpX-ClpP-GFPssrA-ATP/ATPrS
    • タンパク質・ペプチド: ATP-dependent Clp protease ATP-binding subunit ClpX
    • タンパク質・ペプチド: ATP-dependent Clp protease proteolytic subunit
    • タンパク質・ペプチド: Green fluorescent protein, + ssrA tag
  • リガンド: PHOSPHOTHIOPHOSPHORIC ACID-ADENYLATE ESTER
  • リガンド: MAGNESIUM ION
  • リガンド: water

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超分子 #1: ClpX-ClpP-GFPssrA-ATP/ATPrS

超分子名称: ClpX-ClpP-GFPssrA-ATP/ATPrS / タイプ: complex / ID: 1 / 親要素: 0 / 含まれる分子: #1-#3
由来(天然)生物種: Escherichia coli (大腸菌) / 株: ER2566

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分子 #1: ATP-dependent Clp protease ATP-binding subunit ClpX

分子名称: ATP-dependent Clp protease ATP-binding subunit ClpX / タイプ: protein_or_peptide / ID: 1 / コピー数: 6 / 光学異性体: LEVO
由来(天然)生物種: Escherichia coli (大腸菌) / 株: ER2566
分子量理論値: 42.355812 KDa
組換発現生物種: Escherichia coli (大腸菌)
配列文字列: MGSSHHHHHH DYDIPTTENL YFQGSSALPT PHEIRNHLDD YVIGQEQAKK VLAVAVYNHY KRLRNGDTSN GVELGKSNIL LIGPTGSGK TLLAETLARL LDVPFTMADA TTLTEAGYVG EDVENIIQKL LQKSDYDVQK AQRGIVYIDE IDKISRKSDN P SITRDVSG ...文字列:
MGSSHHHHHH DYDIPTTENL YFQGSSALPT PHEIRNHLDD YVIGQEQAKK VLAVAVYNHY KRLRNGDTSN GVELGKSNIL LIGPTGSGK TLLAETLARL LDVPFTMADA TTLTEAGYVG EDVENIIQKL LQKSDYDVQK AQRGIVYIDE IDKISRKSDN P SITRDVSG EGVQQALLKL IEGTVAAVPP QGGRKHPQQE FLQVDTSKIL FICGGAFAGL DKVISHRVET GSGIGFGATV KA KSDKASE GELLAQVEPE DLIKFGLIPE FIGRLPVVAT LNELSEEALI QILKEPKNAL TKQYQALFNL EGVDLEFRDE ALD AIAKKA MARKTGARGL RSIVEAALLD TMYDLPSMED VEKVVIDESV IDGQSEPLLI YGKPEAQQAS GE

UniProtKB: ATP-dependent Clp protease ATP-binding subunit ClpX

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分子 #2: ATP-dependent Clp protease proteolytic subunit

分子名称: ATP-dependent Clp protease proteolytic subunit / タイプ: protein_or_peptide / ID: 2 / コピー数: 7 / 光学異性体: LEVO / EC番号: endopeptidase Clp
由来(天然)生物種: Escherichia coli (大腸菌) / 株: ER2566
分子量理論値: 23.468869 KDa
組換発現生物種: Escherichia coli (大腸菌)
配列文字列: LVPMVIEQTS RGERSFDIYS RLLKERVIFL TGQVEDHMAN LIVAQMLFLE AENPEKDIYL YINSPGGVIT AGMSIYDTMQ FIKPDVSTI CMGQAASMGA FLLTAGAKGK RFCLPNSRVM IHQPLGGYQG QATDIEIHAR EILKVKGRMN ELMALHTGQS L EQIERDTE ...文字列:
LVPMVIEQTS RGERSFDIYS RLLKERVIFL TGQVEDHMAN LIVAQMLFLE AENPEKDIYL YINSPGGVIT AGMSIYDTMQ FIKPDVSTI CMGQAASMGA FLLTAGAKGK RFCLPNSRVM IHQPLGGYQG QATDIEIHAR EILKVKGRMN ELMALHTGQS L EQIERDTE RDRFLSAPEA VEYGLVDSIL THRNENLYFQ SLEHHHHHH

UniProtKB: ATP-dependent Clp protease proteolytic subunit

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分子 #3: Green fluorescent protein, + ssrA tag

分子名称: Green fluorescent protein, + ssrA tag / タイプ: protein_or_peptide / ID: 3 / コピー数: 1 / 光学異性体: LEVO
由来(天然)生物種: synthetic construct (人工物)
分子量理論値: 30.341744 KDa
組換発現生物種: Escherichia coli (大腸菌)
配列文字列: MGSSHHHHHH DYDIPTTENL YFQGSRKGEE LFTGVVPILV ELDGDVNGHK FSVSGEGEGD ATYGKLTLKF ICTTGKLPVP WPTLVTTFG YGVQCFARYP DHMKQHDFFK SAMPEGYVQE RTIFFKDDGN YKTRAEVKFE GDTLVNRIEL KGIDFKEDGN I LGHKLEYN ...文字列:
MGSSHHHHHH DYDIPTTENL YFQGSRKGEE LFTGVVPILV ELDGDVNGHK FSVSGEGEGD ATYGKLTLKF ICTTGKLPVP WPTLVTTFG YGVQCFARYP DHMKQHDFFK SAMPEGYVQE RTIFFKDDGN YKTRAEVKFE GDTLVNRIEL KGIDFKEDGN I LGHKLEYN YNSHNVYIMA DKQKNGIKVN FKIRHNIEDG SVQLADHYQQ NTPIGDGPVL LPDNHYLSTQ SALSKDPNEK RD HMVLLEF VTAAGIGGGY GGGGGGGGGS ENYALAA

UniProtKB: Green fluorescent protein

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分子 #4: PHOSPHOTHIOPHOSPHORIC ACID-ADENYLATE ESTER

分子名称: PHOSPHOTHIOPHOSPHORIC ACID-ADENYLATE ESTER / タイプ: ligand / ID: 4 / コピー数: 5 / 式: AGS
分子量理論値: 523.247 Da
Chemical component information

ChemComp-AGS:
PHOSPHOTHIOPHOSPHORIC ACID-ADENYLATE ESTER / ATP-γ-S / ATP-gamma-S, エネルギー貯蔵分子類似体*YM

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分子 #5: MAGNESIUM ION

分子名称: MAGNESIUM ION / タイプ: ligand / ID: 5 / コピー数: 4 / 式: MG
分子量理論値: 24.305 Da

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分子 #6: water

分子名称: water / タイプ: ligand / ID: 6 / コピー数: 7 / 式: HOH
分子量理論値: 18.015 Da
Chemical component information

ChemComp-HOH:
WATER

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実験情報

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構造解析

手法クライオ電子顕微鏡法
解析単粒子再構成法
試料の集合状態particle

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試料調製

緩衝液pH: 7.5
構成要素:
濃度名称式
20.0 mMHEPES
25.0 mMmagnesium chlorideMgCl2
100.0 mMpotassium chlorideKCl
グリッドモデル: Quantifoil R2/2 / 材質: COPPER / メッシュ: 300 / 支持フィルム - 材質: CARBON / 支持フィルム - トポロジー: HOLEY / 前処理 - タイプ: GLOW DISCHARGE / 前処理 - 時間: 60 sec.
凍結凍結剤: ETHANE / チャンバー内湿度: 95 % / チャンバー内温度: 298 K / 装置: FEI VITROBOT MARK IV
詳細rapid mixing of ClpX, ClpP, ATPrS with GFPssrA substrate and ATP

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電子顕微鏡法

顕微鏡FEI TALOS ARCTICA
撮影フィルム・検出器のモデル: GATAN K3 (6k x 4k) / 検出モード: SUPER-RESOLUTION / 撮影したグリッド数: 1 / 実像数: 4525 / 平均露光時間: 60.0 sec. / 平均電子線量: 54.0 e/Å2
電子線加速電圧: 200 kV / 電子線源: FIELD EMISSION GUN
電子光学系照射モード: OTHER / 撮影モード: BRIGHT FIELD / 最大 デフォーカス（公称値）: -2.5 µm / 最小 デフォーカス（公称値）: -0.8 µm / 倍率（公称値）: 45000
試料ステージ試料ホルダーモデル: FEI TITAN KRIOS AUTOGRID HOLDER
ホルダー冷却材: NITROGEN
実験機器
モデル: Talos Arctica / 画像提供: FEI Company

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画像解析

初期モデルモデルのタイプ: PDB ENTRY
PDBモデル - PDB ID:

6pod

最終 再構成使用したクラス数: 1 / 想定した対称性 - 点群: C1 (非対称) / 解像度のタイプ: BY AUTHOR / 解像度: 3.16 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF
ソフトウェア: (名称: RELION (ver. 3.0.8), PHENIX (ver. 1.14))
使用した粒子像数: 130240
初期 角度割当タイプ: RANDOM ASSIGNMENT / ソフトウェア - 名称: RELION (ver. 3.0.8)
最終 角度割当タイプ: MAXIMUM LIKELIHOOD / ソフトウェア - 名称: RELION (ver. 3.0.8)
最終 3次元分類クラス数: 6 / 平均メンバー数/クラス: 57345 / ソフトウェア - 名称: RELION (ver. 3.0.8)
FSC曲線 (解像度の算出)

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原子モデル構築 1

初期モデルPDB ID:

6pod


Chain - Source name: PDB / Chain - Initial model type: experimental model
精密化空間: REAL / プロトコル: RIGID BODY FIT
得られたモデル

PDB-6wsg:
ClpX-ClpP complex bound to ssrA-tagged GFP, intermediate complex

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万見について

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お知らせ

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2022年2月9日: EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

  • EMDBのヘッダファイルのバージョン3が、公式のフォーマットとなりました。
  • これまでは公式だったバージョン1.9は、アーカイブから削除されます。

関連情報:EMDBヘッダ

外部リンク:wwPDBはEMDBデータモデルのバージョン3へ移行します

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2020年8月12日: 新型コロナ情報

新型コロナ情報

URL: https://pdbjlc1.pdbj.org/emnavi/covid19.php

新ページ: EM Navigatorに新型コロナウイルスの特設ページを開設しました。

関連情報:Covid-19情報 / 2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

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2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

新型コロナウイルスの構造データ

関連情報:万見生物種 / 2020年8月12日: 新型コロナ情報

外部リンク:COVID-19特集ページ - PDBj / 今月の分子2020年2月：コロナウイルスプロテーアーゼ

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2019年1月31日: EMDBのIDの桁数の変更

EMDBのIDの桁数の変更

  • EMDBエントリに付与されているアクセスコード(EMDB-ID)は4桁の数字(例、EMD-1234)でしたが、間もなく枯渇します。これまでの4桁のID番号は4桁のまま変更されませんが、4桁の数字を使い切った後に発行されるIDは5桁以上の数字(例、EMD-12345)になります。5桁のIDは2019年の春頃から発行される見通しです。
  • EM Navigator/万見では、接頭語「EMD-」は省略されています。

関連情報:Q: 「EMD」とは何ですか？ / 万見/EM NavigatorにおけるID/アクセスコードの表記

外部リンク:EMDB Accession Codes are Changing Soon! / PDBjへお問い合わせ

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2017年7月12日: PDB大規模アップデート

PDB大規模アップデート

  • 新バージョンのPDBx/mmCIF辞書形式に基づくデータがリリースされました。
  • 今回の更新はバージョン番号が4から5になる大規模なもので、全エントリデータの書き換えが行われる「Remediation」というアップデートに該当します。
  • このバージョンアップで、電子顕微鏡の実験手法に関する多くの項目の書式が改定されました(例：em_softwareなど)。
  • EM NavigatorとYorodumiでも、この改定に基づいた表示内容になります。

外部リンク:wwPDB Remediation / OneDepデータ基準に準拠した、より強化された内容のモデル構造ファイルが、PDBアーカイブで公開されました。

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万見 (Yorodumi)

幾万の構造データを、幾万の視点から

  • 万見(Yorodumi)は、EMDB/PDB/SASBDBなどの構造データを閲覧するためのページです。
  • EM Navigatorの詳細ページの後継、Omokage検索のフロントエンドも兼ねています。

関連情報:EMDB / PDB / SASBDB / 3つのデータバンクの比較 / 万見検索 / 2016年8月31日: 新しいEM Navigatorと万見 / 万見文献 / Jmol/JSmol / 機能・相同性情報 / 新しいEM Navigatorと万見の変更点

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