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-基本情報
登録情報 | データベース: EMDB / ID: EMD-8522 | |||||||||
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タイトル | 3.2 A cryo-EM ArfA-RF2 ribosome rescue complex (Structure I) | |||||||||
マップデータ | 3.2 A cryo-EM map of ArfA ribosome rescue complex (Structure I) | |||||||||
試料 |
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キーワード | ARFA RF2 ribosome rescue complex / RIBOSOME | |||||||||
機能・相同性 | 機能・相同性情報 translation release factor activity, codon specific / negative regulation of cytoplasmic translational initiation / stringent response / ribosomal large subunit binding / ornithine decarboxylase inhibitor activity / transcription antitermination factor activity, RNA binding / misfolded RNA binding / Group I intron splicing / RNA folding / transcriptional attenuation ...translation release factor activity, codon specific / negative regulation of cytoplasmic translational initiation / stringent response / ribosomal large subunit binding / ornithine decarboxylase inhibitor activity / transcription antitermination factor activity, RNA binding / misfolded RNA binding / Group I intron splicing / RNA folding / transcriptional attenuation / endoribonuclease inhibitor activity / RNA-binding transcription regulator activity / positive regulation of ribosome biogenesis / negative regulation of cytoplasmic translation / translational termination / four-way junction DNA binding / DnaA-L2 complex / translation repressor activity / negative regulation of DNA-templated DNA replication initiation / negative regulation of translational initiation / regulation of mRNA stability / mRNA regulatory element binding translation repressor activity / ribosome assembly / rescue of stalled ribosome / assembly of large subunit precursor of preribosome / positive regulation of RNA splicing / transcription elongation factor complex / cytosolic ribosome assembly / regulation of DNA-templated transcription elongation / DNA endonuclease activity / response to reactive oxygen species / transcription antitermination / regulation of cell growth / translational initiation / DNA-templated transcription termination / maintenance of translational fidelity / response to radiation / mRNA 5'-UTR binding / ribosomal small subunit biogenesis / small ribosomal subunit rRNA binding / large ribosomal subunit / ribosome biogenesis / ribosome binding / regulation of translation / ribosomal small subunit assembly / small ribosomal subunit / 5S rRNA binding / large ribosomal subunit rRNA binding / transferase activity / cytosolic small ribosomal subunit / ribosomal large subunit assembly / cytoplasmic translation / cytosolic large ribosomal subunit / tRNA binding / molecular adaptor activity / negative regulation of translation / rRNA binding / ribosome / structural constituent of ribosome / ribonucleoprotein complex / translation / viral translational frameshifting / response to antibiotic / negative regulation of DNA-templated transcription / mRNA binding / DNA binding / RNA binding / zinc ion binding / membrane / metal ion binding / cytosol / cytoplasm 類似検索 - 分子機能 | |||||||||
生物種 | Escherichia coli (大腸菌) / Escherichia coli K-12 (大腸菌) | |||||||||
手法 | 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 3.2 Å | |||||||||
データ登録者 | Demo G / Svidritskiy E | |||||||||
資金援助 | 米国, 2件
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引用 | ジャーナル: Elife / 年: 2017 タイトル: Mechanism of ribosome rescue by ArfA and RF2. 著者: Gabriel Demo / Egor Svidritskiy / Rohini Madireddy / Ruben Diaz-Avalos / Timothy Grant / Nikolaus Grigorieff / Duncan Sousa / Andrei A Korostelev / 要旨: ArfA rescues ribosomes stalled on truncated mRNAs by recruiting release factor RF2, which normally binds stop codons to catalyze peptide release. We report two 3.2 Å resolution cryo-EM structures - ...ArfA rescues ribosomes stalled on truncated mRNAs by recruiting release factor RF2, which normally binds stop codons to catalyze peptide release. We report two 3.2 Å resolution cryo-EM structures - determined from a single sample - of the 70S ribosome with ArfA•RF2 in the A site. In both states, the ArfA C-terminus occupies the mRNA tunnel downstream of the A site. One state contains a compact inactive RF2 conformation. Ordering of the ArfA N-terminus in the second state rearranges RF2 into an extended conformation that docks the catalytic GGQ motif into the peptidyl-transferase center. Our work thus reveals the structural dynamics of ribosome rescue. The structures demonstrate how ArfA 'senses' the vacant mRNA tunnel and activates RF2 to mediate peptide release without a stop codon, allowing stalled ribosomes to be recycled. | |||||||||
履歴 |
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-構造の表示
ムービー |
ムービービューア |
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構造ビューア | EMマップ: SurfViewMolmilJmol/JSmol |
添付画像 |
-ダウンロードとリンク
-EMDBアーカイブ
マップデータ | emd_8522.map.gz | 36.5 MB | EMDBマップデータ形式 | |
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ヘッダ (付随情報) | emd-8522-v30.xml emd-8522.xml | 77.8 KB 77.8 KB | 表示 表示 | EMDBヘッダ |
画像 | emd_8522.png | 87.3 KB | ||
Filedesc metadata | emd-8522.cif.gz | 14.9 KB | ||
アーカイブディレクトリ | http://ftp.pdbj.org/pub/emdb/structures/EMD-8522 ftp://ftp.pdbj.org/pub/emdb/structures/EMD-8522 | HTTPS FTP |
-検証レポート
文書・要旨 | emd_8522_validation.pdf.gz | 525.2 KB | 表示 | EMDB検証レポート |
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文書・詳細版 | emd_8522_full_validation.pdf.gz | 524.8 KB | 表示 | |
XML形式データ | emd_8522_validation.xml.gz | 7.1 KB | 表示 | |
CIF形式データ | emd_8522_validation.cif.gz | 8 KB | 表示 | |
アーカイブディレクトリ | https://ftp.pdbj.org/pub/emdb/validation_reports/EMD-8522 ftp://ftp.pdbj.org/pub/emdb/validation_reports/EMD-8522 | HTTPS FTP |
-関連構造データ
-リンク
EMDBのページ | EMDB (EBI/PDBe) / EMDataResource |
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「今月の分子」の関連する項目 |
-マップ
ファイル | ダウンロード / ファイル: emd_8522.map.gz / 形式: CCP4 / 大きさ: 125 MB / タイプ: IMAGE STORED AS FLOATING POINT NUMBER (4 BYTES) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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注釈 | 3.2 A cryo-EM map of ArfA ribosome rescue complex (Structure I) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
投影像・断面図 | 画像のコントロール
画像は Spider により作成 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
ボクセルのサイズ | X=Y=Z: 1.215 Å | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
密度 |
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対称性 | 空間群: 1 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
詳細 | EMDB XML:
CCP4マップ ヘッダ情報:
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-添付データ
-試料の構成要素
+全体 : ArfA-RF2 ribosome rescue complex (Structure I)
+超分子 #1: ArfA-RF2 ribosome rescue complex (Structure I)
+分子 #1: 16S ribosomal RNA
+分子 #2: 23S ribosomal RNA
+分子 #3: 5S ribosomal RNA
+分子 #5: fMet-tRNA (P- and E-site)
+分子 #38: truncated mRNA
+分子 #4: Alternative ribosome-rescue factor A
+分子 #6: 50S ribosomal protein L1
+分子 #7: 50S ribosomal protein L2
+分子 #8: 50S ribosomal protein L3
+分子 #9: 50S ribosomal protein L4
+分子 #10: 50S ribosomal protein L5
+分子 #11: 50S ribosomal protein L6
+分子 #12: 50S ribosomal protein L9
+分子 #13: 50S ribosomal protein L10
+分子 #14: 50S ribosomal protein L11
+分子 #15: 50S ribosomal protein L13
+分子 #16: 50S ribosomal protein L14
+分子 #17: 50S ribosomal protein L15
+分子 #18: 50S ribosomal protein L16
+分子 #19: 50S ribosomal protein L17
+分子 #20: 50S ribosomal protein L18
+分子 #21: 50S ribosomal protein L19
+分子 #22: 50S ribosomal protein L20
+分子 #23: 50S ribosomal protein L21
+分子 #24: 50S ribosomal protein L22
+分子 #25: 50S ribosomal protein L23
+分子 #26: 50S ribosomal protein L24
+分子 #27: 50S ribosomal protein L25
+分子 #28: 50S ribosomal protein L27
+分子 #29: 50S ribosomal protein L28
+分子 #30: 50S ribosomal protein L29
+分子 #31: 50S ribosomal protein L30
+分子 #32: 50S ribosomal protein L31
+分子 #33: 50S ribosomal protein L32
+分子 #34: 50S ribosomal protein L33
+分子 #35: 50S ribosomal protein L34
+分子 #36: 50S ribosomal protein L35
+分子 #37: 50S ribosomal protein L36
+分子 #39: Peptide chain release factor RF2
+分子 #40: 30S ribosomal protein S2
+分子 #41: 30S ribosomal protein S3
+分子 #42: 30S ribosomal protein S4
+分子 #43: 30S ribosomal protein S5
+分子 #44: 30S ribosomal protein S6
+分子 #45: 30S ribosomal protein S7
+分子 #46: 30S ribosomal protein S8
+分子 #47: 30S ribosomal protein S9
+分子 #48: 30S ribosomal protein S10
+分子 #49: 30S ribosomal protein S11
+分子 #50: 30S ribosomal protein S12
+分子 #51: 30S ribosomal protein S13
+分子 #52: 30S ribosomal protein S14
+分子 #53: 30S ribosomal protein S15
+分子 #54: 30S ribosomal protein S16
+分子 #55: 30S ribosomal protein S17
+分子 #56: 30S ribosomal protein S18
+分子 #57: 30S ribosomal protein S19
+分子 #58: 30S ribosomal protein S20
+分子 #59: 30S ribosomal protein S21
+分子 #60: MAGNESIUM ION
+分子 #61: ZINC ION
-実験情報
-構造解析
手法 | クライオ電子顕微鏡法 |
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解析 | 単粒子再構成法 |
試料の集合状態 | particle |
-試料調製
緩衝液 | pH: 7 構成要素:
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グリッド | モデル: C-flat-2/2 / 材質: COPPER / メッシュ: 200 / 支持フィルム - 材質: CARBON / 支持フィルム - トポロジー: HOLEY / 前処理 - タイプ: PLASMA CLEANING / 前処理 - 時間: 20 sec. / 前処理 - 雰囲気: OTHER 詳細: Using a Solarus 950 plasma cleaning system. The forward RF target was set to 7w. | ||||||||||||||||||
凍結 | 凍結剤: ETHANE / チャンバー内湿度: 95 % / チャンバー内温度: 277.15 K / 装置: FEI VITROBOT MARK IV |
-電子顕微鏡法
顕微鏡 | FEI TITAN KRIOS |
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撮影 | フィルム・検出器のモデル: DIRECT ELECTRON DE-20 (5k x 3k) 検出モード: COUNTING / デジタル化 - 画像ごとのフレーム数: 2-27 / 撮影したグリッド数: 1 / 実像数: 3760 / 平均電子線量: 1.2 e/Å2 |
電子線 | 加速電圧: 300 kV / 電子線源: FIELD EMISSION GUN |
電子光学系 | 照射モード: FLOOD BEAM / 撮影モード: BRIGHT FIELD / Cs: 2.7 mm / 最大 デフォーカス(公称値): 3.0 µm / 最小 デフォーカス(公称値): 0.5 µm / 倍率(公称値): 29000 |
試料ステージ | 試料ホルダーモデル: FEI TITAN KRIOS AUTOGRID HOLDER ホルダー冷却材: NITROGEN |
実験機器 | モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company |
+画像解析
-原子モデル構築 1
精密化 | 空間: REAL / プロトコル: OTHER / 温度因子: 100 / 当てはまり具合の基準: Correlation coefficient |
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得られたモデル | PDB-5u9g: |