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基本情報
登録情報 | ![]() | ||||||||||||||||||
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タイトル | Cryo-EM structure of factor Va bound to activated protein C | ||||||||||||||||||
![]() | DeepEmhancer map. This map was used for model building | ||||||||||||||||||
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![]() | Coagulation / Activated Factor V / Activated Protein C / BLOOD CLOTTING | ||||||||||||||||||
機能・相同性 | ![]() activated protein C (thrombin-activated peptidase) / positive regulation of establishment of endothelial barrier / negative regulation of coagulation / response to vitamin K / platelet alpha granule / Cargo concentration in the ER / COPII-mediated vesicle transport / blood circulation / COPII-coated ER to Golgi transport vesicle / negative regulation of blood coagulation ...activated protein C (thrombin-activated peptidase) / positive regulation of establishment of endothelial barrier / negative regulation of coagulation / response to vitamin K / platelet alpha granule / Cargo concentration in the ER / COPII-mediated vesicle transport / blood circulation / COPII-coated ER to Golgi transport vesicle / negative regulation of blood coagulation / Transport of gamma-carboxylated protein precursors from the endoplasmic reticulum to the Golgi apparatus / Gamma-carboxylation of protein precursors / Common Pathway of Fibrin Clot Formation / Removal of aminoterminal propeptides from gamma-carboxylated proteins / Intrinsic Pathway of Fibrin Clot Formation / endoplasmic reticulum-Golgi intermediate compartment membrane / platelet alpha granule lumen / Cell surface interactions at the vascular wall / Post-translational protein phosphorylation / negative regulation of inflammatory response / Golgi lumen / Regulation of Insulin-like Growth Factor (IGF) transport and uptake by Insulin-like Growth Factor Binding Proteins (IGFBPs) / blood coagulation / Platelet degranulation / extracellular vesicle / endoplasmic reticulum lumen / copper ion binding / serine-type endopeptidase activity / calcium ion binding / negative regulation of apoptotic process / endoplasmic reticulum / Golgi apparatus / proteolysis / extracellular space / extracellular region / membrane / plasma membrane 類似検索 - 分子機能 | ||||||||||||||||||
生物種 | ![]() | ||||||||||||||||||
手法 | 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 3.15 Å | ||||||||||||||||||
![]() | Mohammed BM / Basore K / Di Cera E | ||||||||||||||||||
資金援助 | ![]()
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![]() | ![]() タイトル: Cryo-EM structure of coagulation factor Va bound to activated protein C. 著者: Bassem M Mohammed / Katherine Basore / Enrico Di Cera / ![]() 要旨: Coagulation factor Va (FVa) is the cofactor component of the prothrombinase complex required for rapid generation of thrombin from prothrombin in the penultimate step of the coagulation cascade. In ...Coagulation factor Va (FVa) is the cofactor component of the prothrombinase complex required for rapid generation of thrombin from prothrombin in the penultimate step of the coagulation cascade. In addition, FVa is a target for proteolytic inactivation by activated protein C (APC). Like other protein-protein interactions in the coagulation cascade, the FVa-APC interaction has long posed a challenge to structural biology and its molecular underpinnings remain unknown. A recent cryogenic electron microscopy (cryo-EM) structure of FVa has revealed the arrangement of its A1-A2-A3-C1-C2 domains and the environment of the sites of APC cleavage at R306 and R506. Here, we report the cryo-EM structure of the FVa-APC complex at 3.15 Å resolution in which the protease domain of APC engages R506 in the A2 domain of FVa through electrostatic interactions between positively charged residues in the 30-loop and 70-loop of APC and an electronegative surface of FVa. The auxiliary γ-carboxyglutamic acid and epidermal growth factor domains of APC are highly dynamic and point to solvent, without making contacts with FVa. Binding of APC displaces a large portion of the A2 domain of FVa and projects the 654VKCIPDDDEDSYEIFEP670 segment as a "latch," or exosite ligand, over the 70-loop of the enzyme. The latch induces a large conformational change of the autolysis loop of APC, which in turn promotes docking of R506 into the primary specificity pocket. The cryo-EM structure of the FVa-APC complex validates the bulk of existing biochemical data and offers molecular context for a key regulatory interaction of the coagulation cascade. | ||||||||||||||||||
履歴 |
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構造の表示
添付画像 |
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ダウンロードとリンク
-EMDBアーカイブ
マップデータ | ![]() | 247.7 MB | ![]() | |
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ヘッダ (付随情報) | ![]() ![]() | 38 KB 38 KB | 表示 表示 | ![]() |
FSC (解像度算出) | ![]() | 19.1 KB | 表示 | ![]() |
画像 | ![]() | 130.8 KB | ||
マスクデータ | ![]() | 282.6 MB | ![]() | |
Filedesc metadata | ![]() | 8.7 KB | ||
その他 | ![]() ![]() ![]() ![]() | 263.9 MB 264 MB 6.1 MB 6.1 MB | ||
アーカイブディレクトリ | ![]() ![]() | HTTPS FTP |
-検証レポート
文書・要旨 | ![]() | 480.4 KB | 表示 | ![]() |
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文書・詳細版 | ![]() | 480 KB | 表示 | |
XML形式データ | ![]() | 22.4 KB | 表示 | |
CIF形式データ | ![]() | 29.9 KB | 表示 | |
アーカイブディレクトリ | ![]() ![]() | HTTPS FTP |
-関連構造データ
関連構造データ | ![]() 9motMC ![]() 9movC C: 同じ文献を引用 ( M: このマップから作成された原子モデル |
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類似構造データ | 類似検索 - 機能・相同性 ![]() |
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リンク
EMDBのページ | ![]() ![]() |
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「今月の分子」の関連する項目 |
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マップ
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注釈 | DeepEmhancer map. This map was used for model building | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
投影像・断面図 | 画像のコントロール
画像は Spider により作成 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
ボクセルのサイズ | X=Y=Z: 0.8701 Å | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
密度 |
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対称性 | 空間群: 1 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
詳細 | EMDB XML:
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-添付データ
-マスク #1
ファイル | ![]() | ||||||||||||
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投影像・断面図 |
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密度ヒストグラム |
-追加マップ: 3D Flex map generated using custom mesh defining...
ファイル | emd_48481_additional_1.map | ||||||||||||
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注釈 | 3D Flex map generated using custom mesh defining each domain of the complex. | ||||||||||||
投影像・断面図 |
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密度ヒストグラム |
-追加マップ: 3D Flex map generated using custom mesh defining...
ファイル | emd_48481_additional_2.map | ||||||||||||
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注釈 | 3D Flex map generated using custom mesh defining each domain of the complex. | ||||||||||||
投影像・断面図 |
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密度ヒストグラム |
-ハーフマップ: 3D flex half-maps
ファイル | emd_48481_half_map_1.map | ||||||||||||
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注釈 | 3D flex half-maps | ||||||||||||
投影像・断面図 |
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密度ヒストグラム |
-ハーフマップ: 3D flex half-maps
ファイル | emd_48481_half_map_2.map | ||||||||||||
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注釈 | 3D flex half-maps | ||||||||||||
投影像・断面図 |
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密度ヒストグラム |
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試料の構成要素
-全体 : Complex of coagulation Factor Va and Activated Protein C
全体 | 名称: Complex of coagulation Factor Va and Activated Protein C |
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要素 |
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-超分子 #1: Complex of coagulation Factor Va and Activated Protein C
超分子 | 名称: Complex of coagulation Factor Va and Activated Protein C タイプ: complex / ID: 1 / 親要素: 0 / 含まれる分子: #1-#3 詳細: Coagulation activated Factor V (FVa) [from plasma] complex with Activated Protein C (APC) [made recombinantly with Ser360Ala mutation]. |
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-超分子 #2: Coagulation Factor Va
超分子 | 名称: Coagulation Factor Va / タイプ: complex / ID: 2 / 親要素: 1 / 含まれる分子: #1-#2 |
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由来(天然) | 生物種: ![]() |
-超分子 #3: Activated Protein C
超分子 | 名称: Activated Protein C / タイプ: complex / ID: 3 / 親要素: 1 / 含まれる分子: #3 |
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由来(天然) | 生物種: ![]() |
-分子 #1: Coagulation factor Va heavy chain
分子 | 名称: Coagulation factor Va heavy chain / タイプ: protein_or_peptide / ID: 1 / コピー数: 1 / 光学異性体: LEVO |
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由来(天然) | 生物種: ![]() |
分子量 | 理論値: 81.274391 KDa |
配列 | 文字列: AQLRQFYVAA QGISWSYRPE PTNSSLNLSV TSFKKIVYRE YEPYFKKEKP QSTISGLLGP TLYAEVGDII KVHFKNKADK PLSIHPQGI RYSKLSEGAS YLDHTFPAEK MDDAVAPGRE YTYEWSISED SGPTHDDPPC LTHIYYSHEN LIEDFNSGLI G PLLICKKG ...文字列: AQLRQFYVAA QGISWSYRPE PTNSSLNLSV TSFKKIVYRE YEPYFKKEKP QSTISGLLGP TLYAEVGDII KVHFKNKADK PLSIHPQGI RYSKLSEGAS YLDHTFPAEK MDDAVAPGRE YTYEWSISED SGPTHDDPPC LTHIYYSHEN LIEDFNSGLI G PLLICKKG TLTEGGTQKT FDKQIVLLFA VFDESKSWSQ SSSLMYTVNG YVNGTMPDIT VCAHDHISWH LLGMSSGPEL FS IHFNGQV LEQNHHKVSA ITLVSATSTT ANMTVGPEGK WIISSLTPKH LQAGMQAYID IKNCPKKTRN LKKITREQRR HMK RWEYFI AAEEVIWDYA PVIPANMDKK YRSQHLDNFS NQIGKHYKKV MYTQYEDESF TKHTVNPNMK EDGILGPIIR AQVR DTLKI VFKNMASRPY SIYPHGVTFS PYEDEVNSSF TSGRNNTMIR AVQPGETYTY KWNILEFDEP TENDAQCLTR PYYSD VDIM RDIASGLIGL LLICKSRSLD RRGIQRAADI EQQAVFAVFD ENKSWYLEDN INKFCENPDE VKRDDPKFYE SNIMST ING YVPESITTLG FCFDDTVQWH FCSVGTQNEI LTIHFTGHSF IYGKRHEDTL TLFPMRGESV TVTMDNVGTW MLTSMNS SP RSKKLRLKFR DVKCIPDDDE DSYEIFEPPE STVMATRKMH DRLEPEDEES DADYDYQNRL AAALGIR UniProtKB: Coagulation factor V |
-分子 #2: Coagulation factor Va light chain
分子 | 名称: Coagulation factor Va light chain / タイプ: protein_or_peptide / ID: 2 / コピー数: 1 / 光学異性体: LEVO |
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由来(天然) | 生物種: ![]() |
分子量 | 理論値: 75.283008 KDa |
配列 | 文字列: SNNGNRRNYY IAAEEISWDY SEFVQRETDI EDSDDIPEDT TYKKVVFRKY LDSTFTKRDP RGEYEEHLGI LGPIIRAEVD DVIQVRFKN LASRPYSLHA HGLSYEKSSE GKTYEDDSPE WFKEDNAVQP NSSYTYVWHA TERSGPESPG SACRAWAYYS A VNPEKDIH ...文字列: SNNGNRRNYY IAAEEISWDY SEFVQRETDI EDSDDIPEDT TYKKVVFRKY LDSTFTKRDP RGEYEEHLGI LGPIIRAEVD DVIQVRFKN LASRPYSLHA HGLSYEKSSE GKTYEDDSPE WFKEDNAVQP NSSYTYVWHA TERSGPESPG SACRAWAYYS A VNPEKDIH SGLIGPLLIC QKGILHKDSN MPMDMREFVL LFMTFDEKKS WYYEKKSRSS WRLTSSEMKK SHEFHAINGM IY SLPGLKM YEQEWVRLHL LNIGGSQDIH VVHFHGQTLL ENGNKQHQLG VWPLLPGSFK TLEMKASKPG WWLLNTEVGE NQR AGMQTP FLIMDRDCRM PMGLSTGIIS DSQIKASEFL GYWEPRLARL NNGGSYNAWS VEKLAAEFAS KPWIQVDMQK EVII TGIQT QGAKHYLKSC YTTEFYVAYS SNQINWQIFK GNSTRNVMYF NGNSDASTIK ENQFDPPIVA RYIRISPTRA YNRPT LRLE LQGCEVNGCS TPLGMENGKI ENKQITASSF KKSWWGDYWE PFRARLNAQG RVNAWQAKAN NNKQWLEIDL LKIKKI TAI ITQGCKSLSS EMYVKSYTIH YSEQGVEWKP YRLKSSMVDK IFEGNTNTKG HVKNFFNPPI ISRFIRVIPK TWNQSIA LR LELFGCDIY UniProtKB: Coagulation factor V |
-分子 #3: Vitamin K-dependent protein C heavy chain
分子 | 名称: Vitamin K-dependent protein C heavy chain / タイプ: protein_or_peptide / ID: 3 / コピー数: 1 / 光学異性体: LEVO |
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由来(天然) | 生物種: ![]() |
分子量 | 理論値: 26.949836 KDa |
組換発現 | 生物種: ![]() |
配列 | 文字列: LIDGKMTRRG DSPWQVVLLD SKKKLACGAV LIHPSWVLTA AHCMDESKKL LVRLGEYDLR RWEKWELDLD IKEVFVHPNY SKSTTDNDI ALLHLAQPAT LSQTIVPICL PDSGLAEREL NQAGQETLVT GWGYHSSREK EAKRNRTFVL NFIKIPVVPH N ECSEVMSN ...文字列: LIDGKMTRRG DSPWQVVLLD SKKKLACGAV LIHPSWVLTA AHCMDESKKL LVRLGEYDLR RWEKWELDLD IKEVFVHPNY SKSTTDNDI ALLHLAQPAT LSQTIVPICL PDSGLAEREL NQAGQETLVT GWGYHSSREK EAKRNRTFVL NFIKIPVVPH N ECSEVMSN MVSENMLCAG ILGDRQDACE GDAGGPMVAS FHGTWFLVGL VSWGEGCGLL HNYGVYTKVS RYLDWIHGHI RD UniProtKB: Vitamin K-dependent protein C |
-分子 #4: 2-acetamido-2-deoxy-beta-D-glucopyranose
分子 | 名称: 2-acetamido-2-deoxy-beta-D-glucopyranose / タイプ: ligand / ID: 4 / コピー数: 8 / 式: NAG |
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分子量 | 理論値: 221.208 Da |
Chemical component information | ![]() ChemComp-NAG: |
-実験情報
-構造解析
手法 | クライオ電子顕微鏡法 |
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![]() | 単粒子再構成法 |
試料の集合状態 | particle |
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試料調製 #1
Preparation ID | 1 |
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濃度 | 0.1 mg/mL |
緩衝液 | pH: 7.4 / 詳細: 20 mM HEPES, 150 mM NaCl, 5 mM CaCl2 |
グリッド | モデル: Quantifoil R1.2/1.3 / 材質: COPPER / メッシュ: 300 / 支持フィルム - Film type ID: 1 / 支持フィルム - 材質: CARBON / 支持フィルム - トポロジー: HOLEY / 前処理 - タイプ: GLOW DISCHARGE / 前処理 - 時間: 40 sec. / 前処理 - 雰囲気: AIR / 詳細: Grids were coated with polylysine |
凍結 | 凍結剤: ETHANE / チャンバー内湿度: 100 % / チャンバー内温度: 277.15 K / 装置: FEI VITROBOT MARK IV |
詳細 | 0.1 mg/mL |
-
試料調製 #2
Preparation ID | 2 |
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濃度 | 0.1 mg/mL |
緩衝液 | pH: 7.4 / 詳細: 20 mM HEPES, 150 mM NaCl, 5 mM CaCl2 |
グリッド | モデル: Quantifoil R1.2/1.3 / 材質: COPPER / メッシュ: 300 / 支持フィルム - Film type ID: 1 / 支持フィルム - 材質: CARBON / 支持フィルム - トポロジー: HOLEY / 前処理 - タイプ: GLOW DISCHARGE / 前処理 - 時間: 40 sec. / 前処理 - 雰囲気: AIR / 詳細: Grids were coated with polylysine |
凍結 | 凍結剤: ETHANE / チャンバー内湿度: 100 % / チャンバー内温度: 277.15 K / 装置: FEI VITROBOT MARK IV |
-
試料調製 #3
Preparation ID | 3 |
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濃度 | 0.1 mg/mL |
緩衝液 | pH: 7.4 / 詳細: 20 mM HEPES, 150 mM NaCl, 5 mM CaCl2 |
グリッド | モデル: Quantifoil R1.2/1.3 / 材質: COPPER / メッシュ: 300 / 支持フィルム - Film type ID: 1 / 支持フィルム - 材質: CARBON / 支持フィルム - トポロジー: HOLEY / 前処理 - タイプ: GLOW DISCHARGE / 前処理 - 時間: 40 sec. / 前処理 - 雰囲気: AIR / 詳細: Grids were coated with polylysine |
凍結 | 凍結剤: ETHANE / チャンバー内湿度: 100 % / チャンバー内温度: 277.15 K / 装置: FEI VITROBOT MARK IV |
-
電子顕微鏡法
顕微鏡 | TFS KRIOS |
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撮影 | #0 - Image recording ID: 1 #0 - フィルム・検出器のモデル: FEI FALCON IV (4k x 4k) #0 - 検出モード: COUNTING / #0 - デジタル化 - サイズ - 横: 4096 pixel / #0 - デジタル化 - サイズ - 縦: 4096 pixel / #0 - 撮影したグリッド数: 1 / #0 - 実像数: 3193 / #0 - 平均電子線量: 51.86 e/Å2 / #0 - 詳細: 30 degrees tilt / #1 - Image recording ID: 2 #1 - フィルム・検出器のモデル: FEI FALCON IV (4k x 4k) #1 - デジタル化 - サイズ - 横: 4096 pixel / #1 - デジタル化 - サイズ - 縦: 4096 pixel / #1 - 撮影したグリッド数: 1 / #1 - 実像数: 600 / #1 - 平均電子線量: 46.6 e/Å2 / #2 - Image recording ID: 3 #2 - フィルム・検出器のモデル: FEI FALCON IV (4k x 4k) #2 - デジタル化 - サイズ - 横: 4096 pixel / #2 - デジタル化 - サイズ - 縦: 4096 pixel / #2 - 撮影したグリッド数: 1 / #2 - 実像数: 2655 / #2 - 平均電子線量: 46.89 e/Å2 / #2 - 詳細: 30 degrees tilt / #3 - Image recording ID: 4 #3 - フィルム・検出器のモデル: FEI FALCON IV (4k x 4k) #3 - デジタル化 - サイズ - 横: 4096 pixel / #3 - デジタル化 - サイズ - 縦: 4096 pixel / #3 - 撮影したグリッド数: 1 / #3 - 実像数: 2379 / #3 - 平均電子線量: 47.19 e/Å2 / #4 - Image recording ID: 5 #4 - フィルム・検出器のモデル: FEI FALCON IV (4k x 4k) #4 - デジタル化 - サイズ - 横: 4096 pixel / #4 - デジタル化 - サイズ - 縦: 4096 pixel / #4 - 撮影したグリッド数: 1 / #4 - 実像数: 420 / #4 - 平均電子線量: 46.89 e/Å2 / #5 - Image recording ID: 6 #5 - フィルム・検出器のモデル: FEI FALCON IV (4k x 4k) #5 - デジタル化 - サイズ - 横: 4096 pixel / #5 - デジタル化 - サイズ - 縦: 4096 pixel / #5 - 撮影したグリッド数: 1 / #5 - 実像数: 3210 / #5 - 平均電子線量: 52.8 e/Å2 |
電子線 | 加速電圧: 300 kV / 電子線源: ![]() |
電子光学系 | 照射モード: FLOOD BEAM / 撮影モード: BRIGHT FIELD / Cs: 0.01 mm / 最大 デフォーカス(公称値): 2.5 µm / 最小 デフォーカス(公称値): 1.0 µm / 倍率(公称値): 75000 |
試料ステージ | 試料ホルダーモデル: FEI TITAN KRIOS AUTOGRID HOLDER ホルダー冷却材: NITROGEN |
実験機器 | ![]() モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company |
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画像解析
-原子モデル構築 1
初期モデル |
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精密化 | 空間: REAL / プロトコル: AB INITIO MODEL | ||||||||
得られたモデル | ![]() PDB-9mot: |