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基本情報
登録情報 | データベース: PDB / ID: 7bti | |||||||||
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タイトル | Phalloidin bound F-actin complex | |||||||||
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![]() | CONTRACTILE PROTEIN/PROTEIN BINDING / F-actin / ADP-F-actin / CONTRACTILE PROTEIN / CONTRACTILE PROTEIN-PROTEIN BINDING complex | |||||||||
機能・相同性 | ![]() Striated Muscle Contraction / skeletal muscle thin filament assembly / striated muscle thin filament / skeletal muscle fiber development / stress fiber / actin filament / 加水分解酵素; 酸無水物に作用; 酸無水物に作用・細胞または細胞小器官の運動に関与 / toxin activity / hydrolase activity / ATP binding 類似検索 - 分子機能 | |||||||||
生物種 | ![]() ![]() ![]() | |||||||||
手法 | 電子顕微鏡法 / らせん対称体再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 3.6 Å | |||||||||
![]() | Kumari, A. / Ragunath, V.K. / Sirajuddin, M. | |||||||||
資金援助 | ![]()
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![]() | ![]() タイトル: Structural insights into actin filament recognition by commonly used cellular actin markers. 著者: Archana Kumari / Shubham Kesarwani / Manjunath G Javoor / Kutti R Vinothkumar / Minhajuddin Sirajuddin / ![]() 要旨: Cellular studies of filamentous actin (F-actin) processes commonly utilize fluorescent versions of toxins, peptides, and proteins that bind actin. While the choice of these markers has been largely ...Cellular studies of filamentous actin (F-actin) processes commonly utilize fluorescent versions of toxins, peptides, and proteins that bind actin. While the choice of these markers has been largely based on availability and ease, there is a severe dearth of structural data for an informed judgment in employing suitable F-actin markers for a particular requirement. Here, we describe the electron cryomicroscopy structures of phalloidin, lifeAct, and utrophin bound to F-actin, providing a comprehensive high-resolution structural comparison of widely used actin markers and their influence towards F-actin. Our results show that phalloidin binding does not induce specific conformational change and lifeAct specifically recognizes closed D-loop conformation, i.e., ADP-Pi or ADP states of F-actin. The structural models aided designing of minimal utrophin and a shorter lifeAct, which can be utilized as F-actin marker. Together, our study provides a structural perspective, where the binding sites of utrophin and lifeAct overlap with majority of actin-binding proteins and thus offering an invaluable resource for researchers in choosing appropriate actin markers and generating new marker variants. | |||||||||
履歴 |
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構造の表示
ムービー |
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構造ビューア | 分子: ![]() ![]() |
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ダウンロードとリンク
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ダウンロード
PDBx/mmCIF形式 | ![]() | 328.7 KB | 表示 | ![]() |
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PDB形式 | ![]() | 270.8 KB | 表示 | ![]() |
PDBx/mmJSON形式 | ![]() | ツリー表示 | ![]() | |
その他 | ![]() |
-検証レポート
アーカイブディレクトリ | ![]() ![]() | HTTPS FTP |
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-関連構造データ
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リンク
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集合体
登録構造単位 | ![]()
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1 |
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要素
#1: タンパク質 | 分子量: 42096.953 Da / 分子数: 5 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) ![]() ![]() #2: タンパク質・ペプチド | #3: 化合物 | ChemComp-MG / #4: 化合物 | ChemComp-ADP / 研究の焦点であるリガンドがあるか | Y | |
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-実験情報
-実験
実験 | 手法: 電子顕微鏡法 |
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EM実験 | 試料の集合状態: FILAMENT / 3次元再構成法: らせん対称体再構成法 |
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試料調製
構成要素 | 名称: Filamentous actin in ADP state / タイプ: COMPLEX / Entity ID: #1-#2 / 由来: NATURAL |
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分子量 | 実験値: NO |
由来(天然) | 生物種: ![]() ![]() |
緩衝液 | pH: 7.5 詳細: 50mM KCl,1mM MgCl2,0.2mM EGTA, 10mM Imidazole buffer pH 7.5 |
試料 | 濃度: 0.0002 mg/ml / 包埋: NO / シャドウイング: NO / 染色: NO / 凍結: YES 詳細: 10 mole excess of lifeact was mixed with F-actin and used for sample preparation. |
試料支持 | グリッドの材料: GOLD / グリッドのサイズ: 300 divisions/in. / グリッドのタイプ: Quantifoil R1.2/1.3 |
急速凍結 | 装置: FEI VITROBOT MARK I / 凍結剤: ETHANE / 湿度: 95 % / 凍結前の試料温度: 293 K / 詳細: blot for 3.5 seconds |
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電子顕微鏡撮影
実験機器 | ![]() モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company |
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顕微鏡 | モデル: FEI TITAN KRIOS |
電子銃 | 電子線源: ![]() |
電子レンズ | モード: OTHER / 倍率(補正後): 75000 X / Cs: 2.7 mm / C2レンズ絞り径: 50 µm / アライメント法: COMA FREE |
試料ホルダ | 凍結剤: NITROGEN 試料ホルダーモデル: FEI TITAN KRIOS AUTOGRID HOLDER 最高温度: 120 K / 最低温度: 100 K |
撮影 | 平均露光時間: 2 sec. / 電子線照射量: 49.2 e/Å2 / 検出モード: INTEGRATING フィルム・検出器のモデル: FEI FALCON III (4k x 4k) 撮影したグリッド数: 1 / 実像数: 529 / 詳細: 30 |
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解析
ソフトウェア |
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EMソフトウェア |
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CTF補正 | 詳細: GCTF for CTF correction / タイプ: NONE | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
らせん対称 | 回転角度/サブユニット: -167 ° / 軸方向距離/サブユニット: 27.89 Å / らせん対称軸の対称性: C1 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
粒子像の選択 | 選択した粒子像数: 349839 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
3次元再構成 | 解像度: 3.6 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / 粒子像の数: 91245 / クラス平均像の数: 4 / 対称性のタイプ: HELICAL | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
原子モデル構築 | B value: 179 / プロトコル: RIGID BODY FIT / 空間: REAL | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
原子モデル構築 | PDB-ID: 5ONV PDB chain-ID: A / Pdb chain residue range: 6-373 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
精密化 | 立体化学のターゲット値: GeoStd + Monomer Library + CDL v1.2 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
拘束条件 |
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