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- EMDB-4141: Cryo-EM structure of the E. coli replicative DNA polymerase-clamp... -

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基本情報

登録情報
データベース: EMDB / ID: EMD-4141
タイトルCryo-EM structure of the E. coli replicative DNA polymerase-clamp-exonuclase-theta complex bound to DNA in the editing mode
マップデータMain map
試料
  • 複合体: DNA polymerase III alpha, beta, epsilon, theta complex with mismatched DNA duplex
    • 複合体: DNA polymerase III alpha, beta, epsilon, theta complex with mismatched DNA duplex
      • タンパク質・ペプチド: DNA polymerase III subunit alpha
      • タンパク質・ペプチド: DNA polymerase III subunit beta
      • タンパク質・ペプチド: DNA polymerase III subunit epsilon
      • タンパク質・ペプチド: DNA polymerase III subunit theta
    • 複合体: mismatched DNA duplex
      • DNA: DNA Primer Strand
      • DNA: DNA Template Strand
キーワードDNA editing Proofreading Exonuclease Polymerase / DNA Binding protein
機能・相同性
機能・相同性情報


DNA polymerase III, core complex / Hda-beta clamp complex / bacterial-type DNA replication / replication inhibiting complex / DNA polymerase III complex / lagging strand elongation / replisome / exonuclease activity / regulation of DNA-templated DNA replication initiation / DNA replication proofreading ...DNA polymerase III, core complex / Hda-beta clamp complex / bacterial-type DNA replication / replication inhibiting complex / DNA polymerase III complex / lagging strand elongation / replisome / exonuclease activity / regulation of DNA-templated DNA replication initiation / DNA replication proofreading / DNA strand elongation involved in DNA replication / leading strand elongation / error-prone translesion synthesis / negative regulation of DNA-templated DNA replication initiation / 3'-5' exonuclease activity / DNA-templated DNA replication / DNA-directed DNA polymerase / DNA-directed DNA polymerase activity / DNA damage response / protein homodimerization activity / DNA binding / identical protein binding / metal ion binding / cytoplasm / cytosol
類似検索 - 分子機能
DNA polymerase III-theta, bacterial / DNA polymerase III-theta superfamily / DNA polymerase III, theta subunit / : / : / DNA polymerase III subunit alpha, C-terminal domain / DNA polymerase 3, epsilon subunit / DNA polymerase III epsilon subunit, exonuclease domain / Bacterial DNA polymerase III alpha subunit, thumb domain / DNA polymerase III, alpha subunit ...DNA polymerase III-theta, bacterial / DNA polymerase III-theta superfamily / DNA polymerase III, theta subunit / : / : / DNA polymerase III subunit alpha, C-terminal domain / DNA polymerase 3, epsilon subunit / DNA polymerase III epsilon subunit, exonuclease domain / Bacterial DNA polymerase III alpha subunit, thumb domain / DNA polymerase III, alpha subunit / Bacterial DNA polymerase III, alpha subunit, NTPase domain / DNA polymerase, helix-hairpin-helix motif / DNA polymerase III alpha subunit finger domain / Bacterial DNA polymerase III alpha NTPase domain / Helix-hairpin-helix motif / Bacterial DNA polymerase III alpha subunit finger domain / PHP domain / PHP domain / Polymerase/histidinol phosphatase, N-terminal / DNA polymerase alpha chain like domain / Polymerase/histidinol phosphatase-like / Exonuclease / DNA polymerase III, beta sliding clamp / DNA polymerase III, beta sliding clamp, N-terminal / DNA polymerase III, beta sliding clamp, C-terminal / DNA polymerase III, beta sliding clamp, central / DNA polymerase III beta subunit, N-terminal domain / DNA polymerase III beta subunit, central domain / DNA polymerase III beta subunit, C-terminal domain / DNA polymerase III beta subunit / Exonuclease, RNase T/DNA polymerase III / EXOIII / OB-fold nucleic acid binding domain, AA-tRNA synthetase-type / OB-fold nucleic acid binding domain / : / Ribonuclease H superfamily / Ribonuclease H-like superfamily / Nucleic acid-binding, OB-fold
類似検索 - ドメイン・相同性
DNA polymerase III subunit epsilon / Beta sliding clamp / DNA polymerase III subunit theta / DNA polymerase III subunit alpha
類似検索 - 構成要素
生物種Escherichia coli K12 (大腸菌) / synthetic construct (人工物)
手法単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 6.7 Å
データ登録者Fernandez-Leiro R / Conrad J
引用ジャーナル: Nat Struct Mol Biol / : 2017
タイトル: Self-correcting mismatches during high-fidelity DNA replication.
著者: Rafael Fernandez-Leiro / Julian Conrad / Ji-Chun Yang / Stefan M V Freund / Sjors H W Scheres / Meindert H Lamers /
要旨: Faithful DNA replication is essential to all forms of life and depends on the action of 3'-5' exonucleases that remove misincorporated nucleotides from the newly synthesized strand. However, how the ...Faithful DNA replication is essential to all forms of life and depends on the action of 3'-5' exonucleases that remove misincorporated nucleotides from the newly synthesized strand. However, how the DNA is transferred from the polymerase to the exonuclease active site is not known. Here we present the cryo-EM structure of the editing mode of the catalytic core of the Escherichia coli replisome, revealing a dramatic distortion of the DNA whereby the polymerase thumb domain acts as a wedge that separates the two DNA strands. Importantly, NMR analysis of the DNA substrate shows that the presence of a mismatch increases the fraying of the DNA, thus enabling it to reach the exonuclease active site. Therefore the mismatch corrects itself, whereas the exonuclease subunit plays a passive role. Hence, our work provides unique insights into high-fidelity replication and establishes a new paradigm for the correction of misincorporated nucleotides.
履歴
登録2016年10月10日-
ヘッダ(付随情報) 公開2016年11月2日-
マップ公開2017年1月18日-
更新2024年5月15日-
現状2024年5月15日処理サイト: PDBe / 状態: 公開

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構造の表示

ムービー
  • 表面図(断面を密度値に従い着色)
  • 表面レベル: 0.08
  • UCSF Chimeraによる作画
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  • 表面レベル: 0.08
  • UCSF Chimeraによる作画
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  • あてはめたモデルとの重ね合わせ
  • 原子モデル: PDB-5m1s
  • 表面レベル: 0.08
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ムービービューア
構造ビューアEMマップ:
SurfViewMolmilJmol/JSmol
添付画像

ダウンロードとリンク

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マップ

ファイルダウンロード / ファイル: emd_4141.map.gz / 形式: CCP4 / 大きさ: 10.5 MB / タイプ: IMAGE STORED AS FLOATING POINT NUMBER (4 BYTES)
注釈Main map
ボクセルのサイズX=Y=Z: 1.76 Å
密度
表面レベル登録者による: 0.08 / ムービー #1: 0.08
最小 - 最大-0.13217136 - 0.34289977
平均 (標準偏差)0.00007575282 (±0.015770577)
対称性空間群: 1
詳細

EMDB XML:

マップ形状
Axis orderXYZ
Origin000
サイズ140140140
Spacing140140140
セルA=B=C: 246.4 Å
α=β=γ: 90.0 °

CCP4マップ ヘッダ情報:

modeImage stored as Reals
Å/pix. X/Y/Z1.761.761.76
M x/y/z140140140
origin x/y/z0.0000.0000.000
length x/y/z246.400246.400246.400
α/β/γ90.00090.00090.000
start NX/NY/NZ-190-190-190
NX/NY/NZ380380380
MAP C/R/S123
start NC/NR/NS000
NC/NR/NS140140140
D min/max/mean-0.1320.3430.000

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添付データ

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マスク #1

ファイルemd_4141_msk_1.map
投影像・断面図
ZYX

投影像

断面 (1/2)
密度ヒストグラム

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ハーフマップ: half map for main map

ファイルemd_4141_half_map_1.map
注釈half map for main map
投影像・断面図
ZYX

投影像

断面 (1/2)
密度ヒストグラム

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ハーフマップ: half map for main map

ファイルemd_4141_half_map_2.map
注釈half map for main map
投影像・断面図
ZYX

投影像

断面 (1/2)
密度ヒストグラム

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試料の構成要素

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全体 : DNA polymerase III alpha, beta, epsilon, theta complex with misma...

全体名称: DNA polymerase III alpha, beta, epsilon, theta complex with mismatched DNA duplex
要素
  • 複合体: DNA polymerase III alpha, beta, epsilon, theta complex with mismatched DNA duplex
    • 複合体: DNA polymerase III alpha, beta, epsilon, theta complex with mismatched DNA duplex
      • タンパク質・ペプチド: DNA polymerase III subunit alpha
      • タンパク質・ペプチド: DNA polymerase III subunit beta
      • タンパク質・ペプチド: DNA polymerase III subunit epsilon
      • タンパク質・ペプチド: DNA polymerase III subunit theta
    • 複合体: mismatched DNA duplex
      • DNA: DNA Primer Strand
      • DNA: DNA Template Strand

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超分子 #1: DNA polymerase III alpha, beta, epsilon, theta complex with misma...

超分子名称: DNA polymerase III alpha, beta, epsilon, theta complex with mismatched DNA duplex
タイプ: complex / ID: 1 / 親要素: 0 / 含まれる分子: #1-#6
由来(天然)生物種: Escherichia coli K12 (大腸菌) / : K12
分子量理論値: 250 KDa

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超分子 #2: DNA polymerase III alpha, beta, epsilon, theta complex with misma...

超分子名称: DNA polymerase III alpha, beta, epsilon, theta complex with mismatched DNA duplex
タイプ: complex / ID: 2 / 親要素: 1 / 含まれる分子: #1-#3, #6
詳細: Map obtained after signal subtraction of the beta subunit and alignment of the remaining parts. Final reconstruction obtained with non-subtracted images and angles from local alignment
由来(天然)生物種: Escherichia coli K12 (大腸菌) / : K12

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超分子 #3: mismatched DNA duplex

超分子名称: mismatched DNA duplex / タイプ: complex / ID: 3 / 親要素: 1 / 含まれる分子: #4-#5
由来(天然)生物種: synthetic construct (人工物)

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分子 #1: DNA polymerase III subunit alpha

分子名称: DNA polymerase III subunit alpha / タイプ: protein_or_peptide / ID: 1 / コピー数: 1 / 光学異性体: LEVO / EC番号: DNA-directed DNA polymerase
由来(天然)生物種: Escherichia coli K12 (大腸菌)
分子量理論値: 103.554422 KDa
組換発現生物種: Escherichia coli BL21(DE3) (大腸菌)
配列文字列: MSEPRFVHLR VHSDYSMIDG LAKTAPLVKK AAALGMPALA ITDFTNLCGL VKFYGAGHGA GIKPIVGADF NVQCDLLGDE LTHLTVLAA NNTGYQNLTL LISKAYQRGY GAAGPIIDRD WLIELNEGLI LLSGGRMGDV GRSLLRGNSA LVDECVAFYE E HFPDRYFL ...文字列:
MSEPRFVHLR VHSDYSMIDG LAKTAPLVKK AAALGMPALA ITDFTNLCGL VKFYGAGHGA GIKPIVGADF NVQCDLLGDE LTHLTVLAA NNTGYQNLTL LISKAYQRGY GAAGPIIDRD WLIELNEGLI LLSGGRMGDV GRSLLRGNSA LVDECVAFYE E HFPDRYFL ELIRTGRPDE ESYLHAAVEL AEARGLPVVA TNDVRFIDSS DFDAHEIRVA IHDGFTLDDP KRPRNYSPQQ YM RSEEEMC ELFADIPEAL ANTVEIAKRC NVTVRLGEYF LPQFPTGDMS TEDYLVKRAK EGLEERLAFL FPDEEERLKR RPE YDERLE TELQVINQMG FPGYFLIVME FIQWSKDNGV PVGPGRGSGA GSLVAYALKI TDLDPLEFDL LFERFLNPER VSMP DFDVD FCMEKRDQVI EHVADMYGRD AVSQIITFGT MAAKAVIRDV GRVLGHPYGF VDRISKLIPP DPGMTLAKAF EAEPQ LPEI YEADEEVKAL IDMARKLEGV TRNAGKHAGG VVIAPTKITD FAPLYCDEEG KHPVTQFDKS DVEYAGLVKF DFLGLR TLT IINWALEMIN KRRAKNGEPP LDIAAIPLDD KKSFDMLQRS ETTAVFQLES RGMKDLIKRL QPDCFEDMIA LVALFRP GP LQSGMVDNFI DRKHGREEIS YPDVQWQHES LKPVLEPTYG IILYQEQVMQ IAQVLSGYTL GGADMLRRAM GKKKPEEM A KQRSVFAEGA EKNGINAELA MKIFDLVEKF AGYGFNKSHS AAYALVSYQT LWLKAHYPAE FMAAVMTADM DNTEKVVGL VDECWRMGLK ILPPDINSGL YHFHVNDDGE IVYGIGAIKG VGEGPIEAII EARNKGGYFR ELFDLCARTD TKKLNRRVLE KLIMSGAFD RLGPHRAALM NSLGDALKAA DQHAKAEAIG QLDLFGVL

UniProtKB: DNA polymerase III subunit alpha

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分子 #2: DNA polymerase III subunit beta

分子名称: DNA polymerase III subunit beta / タイプ: protein_or_peptide / ID: 2 / コピー数: 2 / 光学異性体: LEVO / EC番号: DNA-directed DNA polymerase
由来(天然)生物種: Escherichia coli K12 (大腸菌)
分子量理論値: 40.630508 KDa
組換発現生物種: Escherichia coli BL21(DE3) (大腸菌)
配列文字列: MKFTVEREHL LKPLQQVSGP LGGRPTLPIL GNLLLQVADG TLSLTGTDLE MEMVARVALV QPHEPGATTV PARKFFDICR GLPEGAEIA VQLEGERMLV RSGRSRFSLS TLPAADFPNL DDWQSEVEFT LPQATMKRLI EATQFSMAHQ DVRYYLNGML F ETEGEELR ...文字列:
MKFTVEREHL LKPLQQVSGP LGGRPTLPIL GNLLLQVADG TLSLTGTDLE MEMVARVALV QPHEPGATTV PARKFFDICR GLPEGAEIA VQLEGERMLV RSGRSRFSLS TLPAADFPNL DDWQSEVEFT LPQATMKRLI EATQFSMAHQ DVRYYLNGML F ETEGEELR TVATDGHRLA VCSMPIGQSL PSHSVIVPRK GVIELMRMLD GGDNPLRVQI GSNNIRAHVG DFIFTSKLVD GR FPDYRRV LPKNPDKHLE AGCDLLKQAF ARAAILSNEK FRGVRLYVSE NQLKITANNP EQEEAEEILD VTYSGAEMEI GFN VSYVLD VLNALKCENV RMMLTDSVSS VQIEDAASQS AAYVVMPMRL

UniProtKB: Beta sliding clamp

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分子 #3: DNA polymerase III subunit epsilon

分子名称: DNA polymerase III subunit epsilon / タイプ: protein_or_peptide / ID: 3 / コピー数: 1 / 光学異性体: LEVO / EC番号: DNA-directed DNA polymerase
由来(天然)生物種: Escherichia coli K12 (大腸菌)
分子量理論値: 27.118984 KDa
組換発現生物種: Escherichia coli BL21(DE3) (大腸菌)
配列文字列: MSTAITRQIV LDTETTGMNQ IGAHYEGHKI IEIGAVEVVN RRLTGNNFHV YLKPDRLVDP EAFGVHGIAD EFLLDKPTFA EVADEFMDY IRGAELVIHN AAFDIGFMDY EFSLLKRDIP KTNTFCKVTD SLAVARKMFP GKRNSLDALC ARYEIDNSKR T LHGALLDA ...文字列:
MSTAITRQIV LDTETTGMNQ IGAHYEGHKI IEIGAVEVVN RRLTGNNFHV YLKPDRLVDP EAFGVHGIAD EFLLDKPTFA EVADEFMDY IRGAELVIHN AAFDIGFMDY EFSLLKRDIP KTNTFCKVTD SLAVARKMFP GKRNSLDALC ARYEIDNSKR T LHGALLDA QILAEVYLAM TGGQLSLPLA MEGETQQQQG EATIQRIVRQ ASKLRVVFAT DEEIAAHEAR LDLVQKKGGS CL WRA

UniProtKB: DNA polymerase III subunit epsilon

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分子 #6: DNA polymerase III subunit theta

分子名称: DNA polymerase III subunit theta / タイプ: protein_or_peptide / ID: 6 / コピー数: 1 / 光学異性体: LEVO / EC番号: DNA-directed DNA polymerase
由来(天然)生物種: Escherichia coli K12 (大腸菌)
分子量理論値: 6.503385 KDa
組換発現生物種: Escherichia coli BL21(DE3) (大腸菌)
配列文字列:
QTEMDKVNVD LAAAGVAFKE RYNMPVIAEA VEREQPEHLR SWFRERLIAH RLASVN

UniProtKB: DNA polymerase III subunit theta

-
分子 #4: DNA Primer Strand

分子名称: DNA Primer Strand / タイプ: dna / ID: 4 / コピー数: 1 / 分類: DNA
由来(天然)生物種: synthetic construct (人工物)
分子量理論値: 5.275448 KDa
配列文字列:
(DT)(DA)(DG)(DT)(DA)(DC)(DT)(DA)(DG)(DG) (DA)(DC)(DG)(DA)(DA)(DG)(DT)

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分子 #5: DNA Template Strand

分子名称: DNA Template Strand / タイプ: dna / ID: 5 / コピー数: 1 / 分類: DNA
由来(天然)生物種: synthetic construct (人工物)
分子量理論値: 6.718339 KDa
配列文字列:
(DG)(DG)(DA)(DG)(DT)(DC)(DC)(DT)(DT)(DC) (DG)(DT)(DC)(DC)(DT)(DA)(DG)(DT)(DA)(DC) (DT)(DA)

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実験情報

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構造解析

手法クライオ電子顕微鏡法
解析単粒子再構成法
試料の集合状態particle

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試料調製

濃度0.25 mg/mL
緩衝液pH: 7.5
構成要素:
濃度名称
20.0 mMHepes
50.0 mMPotassium glutamate
5.0 mMMagnesium Acetate
2.0 mMDithiothreitol
グリッドモデル: Quantifoil R1.2/1.3 / 材質: COPPER / メッシュ: 300 / 前処理 - タイプ: GLOW DISCHARGE / 前処理 - 時間: 60 sec. / 前処理 - 雰囲気: AIR
凍結凍結剤: ETHANE / チャンバー内湿度: 100 % / チャンバー内温度: 277 K / 装置: FEI VITROBOT MARK IV
詳細: Prior to sample preparation 0.1 volumes of 0.05% Tween 20 were added to the sample 3 microliters were pipetted onto the grid and blotted for 4 seconds.
詳細Sample was run over a gel filtration column prior to vitrification

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電子顕微鏡法

顕微鏡FEI TITAN KRIOS
温度最低: 80.0 K / 最高: 80.0 K
特殊光学系エネルギーフィルター - 名称: GIF Quantum
エネルギーフィルター - エネルギー下限: 0 eV
エネルギーフィルター - エネルギー上限: 20 eV
撮影フィルム・検出器のモデル: GATAN K2 SUMMIT (4k x 4k)
検出モード: COUNTING / デジタル化 - サイズ - 横: 3710 pixel / デジタル化 - サイズ - 縦: 3710 pixel / デジタル化 - 画像ごとのフレーム数: 1-20 / 撮影したグリッド数: 3 / 実像数: 1157 / 平均露光時間: 25.0 sec. / 平均電子線量: 2.0 e/Å2
電子線加速電圧: 300 kV / 電子線源: FIELD EMISSION GUN
電子光学系C2レンズ絞り径: 50.0 µm / 倍率(補正後): 79545 / 照射モード: FLOOD BEAM / 撮影モード: BRIGHT FIELD / Cs: 2.7 mm / 最大 デフォーカス(公称値): 3.5 µm / 最小 デフォーカス(公称値): 1.8 µm / 倍率(公称値): 64000
試料ステージ試料ホルダーモデル: FEI TITAN KRIOS AUTOGRID HOLDER
ホルダー冷却材: NITROGEN
実験機器
モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company

+
画像解析

粒子像選択選択した数: 150000
初期モデルモデルのタイプ: EMDB MAP
EMDB ID:

詳細: low pass filtered to 60 angtrom
最終 再構成想定した対称性 - 点群: C1 (非対称) / アルゴリズム: FOURIER SPACE / 解像度のタイプ: BY AUTHOR / 解像度: 6.7 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / ソフトウェア - 名称: RELION (ver. 2) / 使用した粒子像数: 15616
初期 角度割当タイプ: PROJECTION MATCHING / ソフトウェア - 名称: RELION (ver. 2)
最終 角度割当タイプ: PROJECTION MATCHING / ソフトウェア - 名称: RELION (ver. 2)
最終 3次元分類ソフトウェア - 名称: RELION (ver. 2)
FSC曲線 (解像度の算出)

-
原子モデル構築 1

詳細The cryo-EM structure of the PolIIIalpha-clamp-exonuclease complex in the polymerase mode (PDB code: 5FKW) was used as a starting model, and the NMR structure of theta bound to the exonuclease catalytic domain (PDB code: 2XY8) was used to place theta into the cryo-EM map. The model was manually adjusted in Coot and geometry of the protein optimized in Refmac5 using DNA-specific restraints generated in LibG
精密化プロトコル: OTHER
得られたモデル

PDB-5m1s:
Cryo-EM structure of the E. coli replicative DNA polymerase-clamp-exonuclase-theta complex bound to DNA in the editing mode

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万見について

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お知らせ

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2022年2月9日: EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

  • EMDBのヘッダファイルのバージョン3が、公式のフォーマットとなりました。
  • これまでは公式だったバージョン1.9は、アーカイブから削除されます。

関連情報:EMDBヘッダ

外部リンク:wwPDBはEMDBデータモデルのバージョン3へ移行します

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2020年8月12日: 新型コロナ情報

新型コロナ情報

URL: https://pdbjlvh1.pdbj.org/emnavi/covid19.php

新ページ: EM Navigatorに新型コロナウイルスの特設ページを開設しました。

関連情報:Covid-19情報 / 2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

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2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

新型コロナウイルスの構造データ

関連情報:万見生物種 / 2020年8月12日: 新型コロナ情報

外部リンク:COVID-19特集ページ - PDBj / 今月の分子2020年2月:コロナウイルスプロテーアーゼ

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2019年1月31日: EMDBのIDの桁数の変更

EMDBのIDの桁数の変更

  • EMDBエントリに付与されているアクセスコード(EMDB-ID)は4桁の数字(例、EMD-1234)でしたが、間もなく枯渇します。これまでの4桁のID番号は4桁のまま変更されませんが、4桁の数字を使い切った後に発行されるIDは5桁以上の数字(例、EMD-12345)になります。5桁のIDは2019年の春頃から発行される見通しです。
  • EM Navigator/万見では、接頭語「EMD-」は省略されています。

関連情報:Q: 「EMD」とは何ですか? / 万見/EM NavigatorにおけるID/アクセスコードの表記

外部リンク:EMDB Accession Codes are Changing Soon! / PDBjへお問い合わせ

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2017年7月12日: PDB大規模アップデート

PDB大規模アップデート

  • 新バージョンのPDBx/mmCIF辞書形式に基づくデータがリリースされました。
  • 今回の更新はバージョン番号が4から5になる大規模なもので、全エントリデータの書き換えが行われる「Remediation」というアップデートに該当します。
  • このバージョンアップで、電子顕微鏡の実験手法に関する多くの項目の書式が改定されました(例:em_softwareなど)。
  • EM NavigatorとYorodumiでも、この改定に基づいた表示内容になります。

外部リンク:wwPDB Remediation / OneDepデータ基準に準拠した、より強化された内容のモデル構造ファイルが、PDBアーカイブで公開されました。

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万見 (Yorodumi)

幾万の構造データを、幾万の視点から

  • 万見(Yorodumi)は、EMDB/PDB/SASBDBなどの構造データを閲覧するためのページです。
  • EM Navigatorの詳細ページの後継、Omokage検索のフロントエンドも兼ねています。

関連情報:EMDB / PDB / SASBDB / 3つのデータバンクの比較 / 万見検索 / 2016年8月31日: 新しいEM Navigatorと万見 / 万見文献 / Jmol/JSmol / 機能・相同性情報 / 新しいEM Navigatorと万見の変更点

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