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基本情報
登録情報 | データベース: EMDB / ID: EMD-24143 | |||||||||
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タイトル | Cryo-EM structure of the Cas12k-sgRNA-dsDNA complex | |||||||||
![]() | Cas12k-sgRNA-dsDNA complex | |||||||||
![]() |
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![]() | CRISPR Cas / RNA binding protein / protein-RNA-DNA complex / RNA BINDING PROTEIN-RNA-DNA complex | |||||||||
生物種 | ![]() | |||||||||
手法 | 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 3.65 Å | |||||||||
![]() | Chang L / Li Z | |||||||||
![]() | ![]() タイトル: Structural basis of target DNA recognition by CRISPR-Cas12k for RNA-guided DNA transposition. 著者: Renjian Xiao / Shukun Wang / Ruijie Han / Zhuang Li / Clinton Gabel / Indranil Arun Mukherjee / Leifu Chang / ![]() 要旨: The type V-K CRISPR-Cas system, featured by Cas12k effector with a naturally inactivated RuvC domain and associated with Tn7-like transposon for RNA-guided DNA transposition, is a promising tool for ...The type V-K CRISPR-Cas system, featured by Cas12k effector with a naturally inactivated RuvC domain and associated with Tn7-like transposon for RNA-guided DNA transposition, is a promising tool for precise DNA insertion. To reveal the mechanism underlying target DNA recognition, we determined a cryoelectron microscopy (cryo-EM) structure of Cas12k from cyanobacteria Scytonema hofmanni in complex with a single guide RNA (sgRNA) and a double-stranded target DNA. Coupled with mutagenesis and in vitro DNA transposition assay, our results revealed mechanisms for the recognition of the GGTT protospacer adjacent motif (PAM) sequence and the structural elements of Cas12k critical for RNA-guided DNA transposition. These structural and mechanistic insights should aid in the development of type V-K CRISPR-transposon systems as tools for genome editing. | |||||||||
履歴 |
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構造の表示
ムービー |
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構造ビューア | EMマップ: ![]() ![]() ![]() |
添付画像 |
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ダウンロードとリンク
-EMDBアーカイブ
マップデータ | ![]() | 28.7 MB | ![]() | |
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ヘッダ (付随情報) | ![]() ![]() | 13.1 KB 13.1 KB | 表示 表示 | ![]() |
画像 | ![]() | 107.1 KB | ||
Filedesc metadata | ![]() | 5.8 KB | ||
アーカイブディレクトリ | ![]() ![]() | HTTPS FTP |
-検証レポート
文書・要旨 | ![]() | 503.3 KB | 表示 | ![]() |
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文書・詳細版 | ![]() | 502.8 KB | 表示 | |
XML形式データ | ![]() | 5.8 KB | 表示 | |
CIF形式データ | ![]() | 6.5 KB | 表示 | |
アーカイブディレクトリ | ![]() ![]() | HTTPS FTP |
-関連構造データ
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リンク
EMDBのページ | ![]() ![]() |
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マップ
ファイル | ![]() | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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注釈 | Cas12k-sgRNA-dsDNA complex | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
ボクセルのサイズ | X=Y=Z: 1.05 Å | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
密度 |
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対称性 | 空間群: 1 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
詳細 | EMDB XML:
CCP4マップ ヘッダ情報:
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-添付データ
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試料の構成要素
-全体 : Cryo-EM structure of the Cas12k-sgRNA-dsDNA complex
全体 | 名称: Cryo-EM structure of the Cas12k-sgRNA-dsDNA complex |
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要素 |
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-超分子 #1: Cryo-EM structure of the Cas12k-sgRNA-dsDNA complex
超分子 | 名称: Cryo-EM structure of the Cas12k-sgRNA-dsDNA complex / タイプ: complex / ID: 1 / 親要素: 0 / 含まれる分子: all |
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-超分子 #2: Cas12k
超分子 | 名称: Cas12k / タイプ: complex / ID: 2 / 親要素: 1 / 含まれる分子: #1 |
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由来(天然) | 生物種: ![]() |
-超分子 #3: single-guide RNA/Target DNA
超分子 | 名称: single-guide RNA/Target DNA / タイプ: complex / ID: 3 / 親要素: 1 / 含まれる分子: #2-#4 |
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由来(天然) | 生物種: ![]() |
-分子 #1: Cas12k
分子 | 名称: Cas12k / タイプ: protein_or_peptide / ID: 1 / コピー数: 1 / 光学異性体: LEVO |
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由来(天然) | 生物種: ![]() |
分子量 | 理論値: 73.280719 KDa |
組換発現 | 生物種: ![]() ![]() |
配列 | 文字列: MSQITIQARL ISFESNRQQL WKLMADLNTP LINELLCQLG QHPDFEKWQQ KGKLPSTVVS QLCQPLKTDP RFAGQPSRLY MSAIHIVDY IYKSWLAIQK RLQQQLDGKT RWLEMLNSDA ELVELSGDTL EAIRVKAAEI LAIAMPASES DSASPKGKKG K KEKKPSSS ...文字列: MSQITIQARL ISFESNRQQL WKLMADLNTP LINELLCQLG QHPDFEKWQQ KGKLPSTVVS QLCQPLKTDP RFAGQPSRLY MSAIHIVDY IYKSWLAIQK RLQQQLDGKT RWLEMLNSDA ELVELSGDTL EAIRVKAAEI LAIAMPASES DSASPKGKKG K KEKKPSSS SPKRSLSKTL FDAYQETEDI KSRSAISYLL KNGCKLTDKE EDSEKFAKRR RQVEIQIQRL TEKLISRMPK GR DLTNAKW LETLLTATTT VAEDNAQAKR WQDILLTRSS SLPFPLVFET NEDMVWSKNQ KGRLCVHFNG LSDLIFEVYC GNR QLHWFQ RFLEDQQTKR KSKNQHSSGL FTLRNGHLVW LEGEGKGEPW NLHHLTLYCC VDNRLWTEEG TEIVRQEKAD EITK FITNM KKKSDLSDTQ QALIQRKQST LTRINNSFER PSQPLYQGQS HILVGVSLGL EKPATVAVVD AIANKVLAYR SIKQL LGDN YELLNRQRRQ QQYLSHERHK AQKNFSPNQF GASELGQHID RLLAKAIVAL ARTYKAGSIV LPKLGDMREV VQSEIQ AIA EQKFPGYIEG QQKYAKQYRV NVHRWSYGRL IQSIQSKAAQ TGIVIEEGKQ PIRGSPHDKA KELALSAYNL RLTRRS |
-分子 #2: Single guide RNA
分子 | 名称: Single guide RNA / タイプ: rna / ID: 2 / コピー数: 1 |
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由来(天然) | 生物種: ![]() |
分子量 | 理論値: 85.26125 KDa |
配列 | 文字列: AUAUUAAUAG CGCCGCAAUU CAUGCUGCUU GCAGCCUCUG AAUUUUGUUA AAUGAGGGUU AGUUUGACUG UAUAAAUACA GUCUUGCUU UCUGACCCUG GUAGCUGCUC ACCCUGAUGC UGCUGUCAAU AGACAGGAUA GGUGCGCUCC CAGCAAUAAG G GCGCGGAU ...文字列: AUAUUAAUAG CGCCGCAAUU CAUGCUGCUU GCAGCCUCUG AAUUUUGUUA AAUGAGGGUU AGUUUGACUG UAUAAAUACA GUCUUGCUU UCUGACCCUG GUAGCUGCUC ACCCUGAUGC UGCUGUCAAU AGACAGGAUA GGUGCGCUCC CAGCAAUAAG G GCGCGGAU GUACUGCUGU AGUGGCUACU GAAUCACCCC CGAUCAAGGG GGAACCCUCC AAAAGGUGGG UUGAAAGGAG AA GUCAUUU AAUAAGGCCA CUGUUAAA |
-分子 #3: DNA (5'-D(*CP*AP*TP*GP*AP*CP*TP*TP*CP*TP*CP*AP*AP*CP*CP*GP*AP*GP*...
分子 | 名称: DNA (5'-D(*CP*AP*TP*GP*AP*CP*TP*TP*CP*TP*CP*AP*AP*CP*CP*GP*AP*GP*TP*TP*T)-3') タイプ: dna / ID: 3 / コピー数: 1 / 分類: DNA |
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由来(天然) | 生物種: ![]() |
分子量 | 理論値: 12.181854 KDa |
配列 | 文字列: (DT)(DT)(DA)(DA)(DC)(DA)(DG)(DT)(DG)(DG) (DC)(DC)(DT)(DT)(DA)(DT)(DT)(DA)(DA)(DA) (DT)(DG)(DA)(DC)(DT)(DT)(DC)(DT)(DC) (DA)(DA)(DC)(DC)(DT)(DC)(DC)(DT)(DA)(DC) (DG) |
-分子 #4: DNA (5'-D(P*AP*AP*AP*CP*TP*CP*GP*GP*TP*T)-3')
分子 | 名称: DNA (5'-D(P*AP*AP*AP*CP*TP*CP*GP*GP*TP*T)-3') / タイプ: dna / ID: 4 / コピー数: 1 / 分類: DNA |
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由来(天然) | 生物種: ![]() |
分子量 | 理論値: 3.429245 KDa |
配列 | 文字列: (DC)(DG)(DT)(DA)(DG)(DG)(DA)(DG)(DG)(DT) (DT) |
-実験情報
-構造解析
手法 | クライオ電子顕微鏡法 |
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![]() | 単粒子再構成法 |
試料の集合状態 | particle |
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試料調製
緩衝液 | pH: 7.6 |
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凍結 | 凍結剤: ETHANE |
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電子顕微鏡法
顕微鏡 | FEI TITAN KRIOS |
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撮影 | フィルム・検出器のモデル: GATAN K3 BIOQUANTUM (6k x 4k) 平均電子線量: 54.0 e/Å2 |
電子線 | 加速電圧: 300 kV / 電子線源: ![]() |
電子光学系 | 照射モード: OTHER / 撮影モード: OTHER |
実験機器 | ![]() モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company |