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-基本情報
登録情報 | データベース: PDB / ID: 4cmp | ||||||
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タイトル | Crystal structure of S. pyogenes Cas9 | ||||||
要素 | CRISPR-ASSOCIATED ENDONUCLEASE CAS9/CSN1 | ||||||
キーワード | HYDROLASE (加水分解酵素) / DNASE (デオキシリボヌクレアーゼ) / RNA-GUIDED / IMMUNITY / CRRNA / GENOME EDITING (ゲノム編集) | ||||||
機能・相同性 | 機能・相同性情報 maintenance of CRISPR repeat elements / 3'-5' exonuclease activity / DNA endonuclease activity / defense response to virus / 加水分解酵素; エステル加水分解酵素 / DNA binding / RNA binding / metal ion binding 類似検索 - 分子機能 | ||||||
生物種 | STREPTOCOCCUS PYOGENES (化膿レンサ球菌) | ||||||
手法 | X線回折 / シンクロトロン / 多重同系置換・異常分散 / 解像度: 2.62 Å | ||||||
データ登録者 | Jinek, M. / Jiang, F. / Taylor, D.W. / Sternberg, S.H. / Kaya, E. / Ma, E. / Anders, C. / Hauer, M. / Zhou, K. / Lin, S. ...Jinek, M. / Jiang, F. / Taylor, D.W. / Sternberg, S.H. / Kaya, E. / Ma, E. / Anders, C. / Hauer, M. / Zhou, K. / Lin, S. / Kaplan, M. / Iavarone, A.T. / Charpentier, E. / Nogales, E. / Doudna, J.A. | ||||||
引用 | ジャーナル: Science / 年: 2014 タイトル: Structures of Cas9 endonucleases reveal RNA-mediated conformational activation. 著者: Martin Jinek / Fuguo Jiang / David W Taylor / Samuel H Sternberg / Emine Kaya / Enbo Ma / Carolin Anders / Michael Hauer / Kaihong Zhou / Steven Lin / Matias Kaplan / Anthony T Iavarone / ...著者: Martin Jinek / Fuguo Jiang / David W Taylor / Samuel H Sternberg / Emine Kaya / Enbo Ma / Carolin Anders / Michael Hauer / Kaihong Zhou / Steven Lin / Matias Kaplan / Anthony T Iavarone / Emmanuelle Charpentier / Eva Nogales / Jennifer A Doudna / 要旨: Type II CRISPR (clustered regularly interspaced short palindromic repeats)-Cas (CRISPR-associated) systems use an RNA-guided DNA endonuclease, Cas9, to generate double-strand breaks in invasive DNA ...Type II CRISPR (clustered regularly interspaced short palindromic repeats)-Cas (CRISPR-associated) systems use an RNA-guided DNA endonuclease, Cas9, to generate double-strand breaks in invasive DNA during an adaptive bacterial immune response. Cas9 has been harnessed as a powerful tool for genome editing and gene regulation in many eukaryotic organisms. We report 2.6 and 2.2 angstrom resolution crystal structures of two major Cas9 enzyme subtypes, revealing the structural core shared by all Cas9 family members. The architectures of Cas9 enzymes define nucleic acid binding clefts, and single-particle electron microscopy reconstructions show that the two structural lobes harboring these clefts undergo guide RNA-induced reorientation to form a central channel where DNA substrates are bound. The observation that extensive structural rearrangements occur before target DNA duplex binding implicates guide RNA loading as a key step in Cas9 activation. | ||||||
履歴 |
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-構造の表示
構造ビューア | 分子: MolmilJmol/JSmol |
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-ダウンロードとリンク
-ダウンロード
PDBx/mmCIF形式 | 4cmp.cif.gz | 1.3 MB | 表示 | PDBx/mmCIF形式 |
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PDB形式 | pdb4cmp.ent.gz | 1.1 MB | 表示 | PDB形式 |
PDBx/mmJSON形式 | 4cmp.json.gz | ツリー表示 | PDBx/mmJSON形式 | |
その他 | その他のダウンロード |
-検証レポート
アーカイブディレクトリ | https://data.pdbj.org/pub/pdb/validation_reports/cm/4cmp ftp://data.pdbj.org/pub/pdb/validation_reports/cm/4cmp | HTTPS FTP |
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-関連構造データ
-リンク
-集合体
登録構造単位 |
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単位格子 |
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非結晶学的対称性 (NCS) | NCS oper: (Code: given Matrix: (0.99975, -0.02197, 0.0043), ベクター: |
-要素
#1: タンパク質 | 分子量: 158986.109 Da / 分子数: 2 / 由来タイプ: 組換発現 由来: (組換発現) STREPTOCOCCUS PYOGENES (化膿レンサ球菌) 株: SEROTYPE M1 / プラスミド: PEC-K-MBP / 発現宿主: ESCHERICHIA COLI (大腸菌) / 株 (発現宿主): BL21(DE3) / Variant (発現宿主): ROSETTA2 参照: UniProt: Q99ZW2, 加水分解酵素; エステル加水分解酵素 #2: 化合物 | ChemComp-SO4 / #3: 化合物 | ChemComp-MG / | #4: 水 | ChemComp-HOH / | 配列の詳細 | M-TERMINAL GAAS IS DERIVED FROM THE EXPRESSION | |
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-実験情報
-実験
実験 | 手法: X線回折 / 使用した結晶の数: 1 |
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-試料調製
結晶 | マシュー密度: 2.41 Å3/Da / 溶媒含有率: 49 % / 解説: NONE |
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結晶化 | pH: 8.5 詳細: 0.1 M TRIS PH 8.5, 0.3 M LITHIUM SULFATE, 15% PEG 3350 |
-データ収集
回折 | 平均測定温度: 100 K |
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放射光源 | 由来: シンクロトロン / サイト: SLS / ビームライン: X06SA / 波長: 1 |
検出器 | タイプ: DECTRIS PILATUS 6M / 検出器: PIXEL / 日付: 2013年8月31日 |
放射 | プロトコル: SINGLE WAVELENGTH / 単色(M)・ラウエ(L): M / 散乱光タイプ: x-ray |
放射波長 | 波長: 1 Å / 相対比: 1 |
反射 | 解像度: 2.62→47.52 Å / Num. obs: 92408 / % possible obs: 98.2 % / Observed criterion σ(I): 1.94 / 冗長度: 2.3 % / Biso Wilson estimate: 64.77 Å2 / Rmerge(I) obs: 0.05 / Net I/σ(I): 13.02 |
反射 シェル | 解像度: 2.62→2.69 Å / 冗長度: 2.3 % / Rmerge(I) obs: 0.64 / Mean I/σ(I) obs: 1.94 / % possible all: 98.5 |
-解析
ソフトウェア |
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精密化 | 構造決定の手法: 多重同系置換・異常分散 開始モデル: NONE 解像度: 2.62→47.481 Å / SU ML: 0.41 / σ(F): 1.36 / 位相誤差: 31.27 / 立体化学のターゲット値: ML
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溶媒の処理 | 減衰半径: 0.9 Å / VDWプローブ半径: 1.11 Å / 溶媒モデル: FLAT BULK SOLVENT MODEL | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
精密化ステップ | サイクル: LAST / 解像度: 2.62→47.481 Å
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拘束条件 |
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LS精密化 シェル |
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精密化 TLS | 手法: refined / Refine-ID: X-RAY DIFFRACTION
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精密化 TLSグループ |
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