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基本情報
登録情報 | データベース: PDB / ID: 8w2o | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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タイトル | Yeast U1 snRNP with humanized U1C Zinc-Finger domain | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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![]() | SPLICING / U1snRNP / U1C humanization | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
機能・相同性 | ![]() mRNA splice site recognition / U4/U6 snRNP / 7-methylguanosine cap hypermethylation / pICln-Sm protein complex / positive regulation of mRNA splicing, via spliceosome / snRNP binding / small nuclear ribonucleoprotein complex / splicing factor binding / SMN-Sm protein complex / spliceosomal tri-snRNP complex ...mRNA splice site recognition / U4/U6 snRNP / 7-methylguanosine cap hypermethylation / pICln-Sm protein complex / positive regulation of mRNA splicing, via spliceosome / snRNP binding / small nuclear ribonucleoprotein complex / splicing factor binding / SMN-Sm protein complex / spliceosomal tri-snRNP complex / commitment complex / U2-type prespliceosome assembly / U4 snRNP / U2 snRNP / poly(U) RNA binding / U1 snRNP / U2-type prespliceosome / pre-mRNA 5'-splice site binding / precatalytic spliceosome / spliceosomal complex assembly / mRNA 5'-splice site recognition / Prp19 complex / U5 snRNP / spliceosomal snRNP assembly / U1 snRNA binding / U4/U6 x U5 tri-snRNP complex / catalytic step 2 spliceosome / spliceosomal complex / mRNA splicing, via spliceosome / mRNA binding / RNA binding / zinc ion binding / nucleus / cytosol / cytoplasm 類似検索 - 分子機能 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
生物種 | ![]() ![]() | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
手法 | 電子顕微鏡法 / 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 3.49 Å | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
![]() | Shi, S.S. / Kuang, Z.L. / Zhao, R. | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
資金援助 | ![]()
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![]() | ![]() タイトル: Selected humanization of yeast U1 snRNP leads to global suppression of pre-mRNA splicing and mitochondrial dysfunction in the budding yeast. 著者: Subbaiah Chalivendra / Shasha Shi / Xueni Li / Zhiling Kuang / Joseph Giovinazzo / Lingdi Zhang / John Rossi / Jingxin Wang / Anthony J Saviola / Robb Welty / Shiheng Liu / Katherine F Vaeth ...著者: Subbaiah Chalivendra / Shasha Shi / Xueni Li / Zhiling Kuang / Joseph Giovinazzo / Lingdi Zhang / John Rossi / Jingxin Wang / Anthony J Saviola / Robb Welty / Shiheng Liu / Katherine F Vaeth / Z Hong Zhou / Kirk C Hansen / J Matthew Taliaferro / Rui Zhao / ![]() 要旨: The recognition of the 5' splice site (5' ss) is one of the earliest steps of pre-mRNA splicing. To better understand, the mechanism and regulation of 5' ss recognition, we selectively humanized ...The recognition of the 5' splice site (5' ss) is one of the earliest steps of pre-mRNA splicing. To better understand, the mechanism and regulation of 5' ss recognition, we selectively humanized components of the yeast U1 (yU1) snRNP to reveal the function of these components in 5' ss recognition and splicing. We targeted U1C and Luc7, two proteins that interact with and stabilize the yU1 snRNA and the 5' ss RNA duplex. We replaced the zinc-finger (ZnF) domain of yeast U1C (yU1C) with its human counterpart, which resulted in a cold-sensitive growth phenotype and moderate splicing defects. We next added an auxin-inducible degron to yeast Luc7 (yLuc7) protein (to mimic the lack of Luc7Ls in human U1 snRNP). We found that Luc7-depleted yU1 snRNP resulted in the concomitant loss of Prp40 and Snu71 (two other essential yU1 snRNP proteins), and further biochemical analyses suggest a model of how these three proteins interact with each other in the U1 snRNP. The loss of these proteins resulted in a significant growth retardation accompanied by a global suppression of pre-mRNA splicing. The splicing suppression led to mitochondrial dysfunction as revealed by a release of Fe into the growth medium and an induction of mitochondrial reactive oxygen species. Together, these observations indicate that the human U1C ZnF can substitute that of yeast, Luc7 is essential for the incorporation of the Luc7-Prp40-Snu71 trimer into yU1 snRNP, and splicing plays a major role in the regulation of mitochondrial function in yeast. | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
履歴 |
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構造ビューア | 分子: ![]() ![]() |
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ダウンロードとリンク
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PDBx/mmCIF形式 | ![]() | 735.3 KB | 表示 | ![]() |
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PDB形式 | ![]() | 556.1 KB | 表示 | ![]() |
PDBx/mmJSON形式 | ![]() | ツリー表示 | ![]() | |
その他 | ![]() |
-検証レポート
文書・要旨 | ![]() | 1.4 MB | 表示 | ![]() |
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文書・詳細版 | ![]() | 1.4 MB | 表示 | |
XML形式データ | ![]() | 101.2 KB | 表示 | |
CIF形式データ | ![]() | 160.9 KB | 表示 | |
アーカイブディレクトリ | ![]() ![]() | HTTPS FTP |
-関連構造データ
関連構造データ | ![]() 43753MC M: このデータのモデリングに利用したマップデータ C: 同じ文献を引用 ( |
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類似構造データ | 類似検索 - 機能・相同性 ![]() |
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リンク
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集合体
登録構造単位 | ![]()
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1 |
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要素
-U1 small nuclear ribonucleoprotein ... , 5種, 5分子 ABCDH
#1: タンパク質 | 分子量: 34506.148 Da / 分子数: 1 / Mutation: 0 / 由来タイプ: 組換発現 由来: (組換発現) ![]() ![]() 遺伝子: SNP1, YIL061C / 発現宿主: ![]() ![]() |
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#2: タンパク質 | 分子量: 27084.949 Da / 分子数: 1 Mutation: T2P,R3K,Y4F,E7D,H10D,S11T,T17S,L18P,S23T,L25C,V26S,K28R,N29K,L31K,R32E,I33N,T34V,A35K 由来タイプ: 組換発現 由来: (組換発現) ![]() ![]() 遺伝子: YHC1, YLR298C, L8003.21 / 発現宿主: ![]() ![]() |
#3: タンパク質 | 分子量: 40413.961 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 由来: (組換発現) ![]() ![]() 遺伝子: MUD1, YBR119W, YBR0915 / 発現宿主: ![]() ![]() |
#4: タンパク質 | 分子量: 65222.020 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 由来: (組換発現) ![]() ![]() 遺伝子: PRP42, MUD16, SNU65, YDR235W, YD8419.02 / 発現宿主: ![]() ![]() |
#8: タンパク質 | 分子量: 5974.760 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 由来: (組換発現) ![]() ![]() 遺伝子: SNU71, YGR013W / 発現宿主: ![]() ![]() |
-タンパク質 , 5種, 5分子 EFGIK
#5: タンパク質 | 分子量: 74834.742 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 由来: (組換発現) ![]() ![]() 遺伝子: PRP39, YML046W, YM9827.06 / 発現宿主: ![]() ![]() |
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#6: タンパク質 | 分子量: 57010.840 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 由来: (組換発現) ![]() ![]() 遺伝子: NAM8, MRE2, YHR086W / 発現宿主: ![]() ![]() |
#7: タンパク質 | 分子量: 56575.277 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 由来: (組換発現) ![]() ![]() 遺伝子: SNU56, MUD10, YDR240C / 発現宿主: ![]() ![]() |
#9: タンパク質 | 分子量: 30245.885 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 由来: (組換発現) ![]() ![]() 遺伝子: LUC7, EPE1, EXM2, YDL087C / 発現宿主: ![]() ![]() |
#10: タンパク質 | 分子量: 22426.990 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 由来: (組換発現) ![]() ![]() 遺伝子: SMB1, YER029C / 発現宿主: ![]() ![]() |
-Small nuclear ribonucleoprotein ... , 6種, 6分子 LMNOPQ
#11: タンパク質 | 分子量: 16296.798 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 由来: (組換発現) ![]() ![]() 遺伝子: SMD1, YGR074W / 発現宿主: ![]() ![]() |
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#12: タンパク質 | 分子量: 12876.066 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 由来: (組換発現) ![]() ![]() 遺伝子: SMD2, YLR275W, L9328.5 / 発現宿主: ![]() ![]() |
#13: タンパク質 | 分子量: 11240.139 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 由来: (組換発現) ![]() ![]() 遺伝子: SMD3, YLR147C, L9634.6 / 発現宿主: ![]() ![]() |
#14: タンパク質 | 分子量: 10385.098 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 由来: (組換発現) ![]() ![]() 遺伝子: SME1, YOR159C / 発現宿主: ![]() ![]() |
#15: タンパク質 | 分子量: 9669.945 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 由来: (組換発現) ![]() ![]() 遺伝子: SMX3, YPR182W, P9705.4 / 発現宿主: ![]() ![]() |
#16: タンパク質 | 分子量: 8490.809 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 由来: (組換発現) ![]() ![]() 遺伝子: SMX2, SNP2, YFL017W-A, YFL017Bw / 発現宿主: ![]() ![]() |
-RNA鎖 , 2種, 2分子 rR
#17: RNA鎖 | 分子量: 59778.191 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 由来: (組換発現) ![]() ![]() 発現宿主: ![]() ![]() |
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#18: RNA鎖 | 分子量: 182114.516 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 由来: (組換発現) ![]() ![]() 発現宿主: ![]() ![]() |
-詳細
Has protein modification | N |
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-実験情報
-実験
実験 | 手法: 電子顕微鏡法 |
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EM実験 | 試料の集合状態: PARTICLE / 3次元再構成法: 単粒子再構成法 |
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試料調製
構成要素 | 名称: U1snRNP / タイプ: COMPLEX / Entity ID: all / 由来: NATURAL | ||||||||||||||||||||
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由来(天然) | 生物種: ![]() ![]() | ||||||||||||||||||||
緩衝液 | pH: 7.9 / 詳細: 20 mM Hepes, pH7.9, 120 mM KCl, 2 mM EGTA | ||||||||||||||||||||
緩衝液成分 |
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試料 | 濃度: 1.5 mg/ml / 包埋: NO / シャドウイング: NO / 染色: NO / 凍結: YES / 詳細: This sample is monodisperse | ||||||||||||||||||||
試料支持 | グリッドの材料: COPPER / グリッドのサイズ: 400 divisions/in. / グリッドのタイプ: EMS Lacey Carbon | ||||||||||||||||||||
急速凍結 | 装置: FEI VITROBOT MARK IV / 凍結剤: ETHANE / 湿度: 100 % / 凍結前の試料温度: 277 K 詳細: The grids were obtained with the chamber at 100% humidity, 2.5 s blotting time, -6 blotting force and 15 s wait time and flash-frozen into liquid ethane with a Vitrobot Mark IV (Thermo Fisher Scientific) |
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電子顕微鏡撮影
実験機器 | ![]() モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company |
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顕微鏡 | モデル: FEI TITAN KRIOS |
電子銃 | 電子線源: ![]() |
電子レンズ | モード: BRIGHT FIELD / 最大 デフォーカス(公称値): 2200 nm / 最小 デフォーカス(公称値): 800 nm / Cs: 2.7 mm |
撮影 | 電子線照射量: 1 e/Å2 / フィルム・検出器のモデル: GATAN K3 (6k x 4k) |
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解析
EMソフトウェア | 名称: PHENIX / カテゴリ: モデル精密化 | ||||||||||||||||||||||||
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CTF補正 | タイプ: NONE | ||||||||||||||||||||||||
3次元再構成 | 解像度: 3.49 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / 粒子像の数: 138997 / 対称性のタイプ: POINT | ||||||||||||||||||||||||
拘束条件 |
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