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-基本情報
登録情報 | データベース: PDB / ID: 8uqm | ||||||
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タイトル | Escherichia coli transcription-translation coupled complex class B (TTC-B) containing RfaH in loaded state, NusA, mRNA with a 24 nt long spacer, and fMet-tRNAs in E-site and P-site of the ribosome | ||||||
要素 |
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キーワード | TRANSCRIPTION / translation / RfaH / gene expression / regulation / ops / ribosome / coupling | ||||||
機能・相同性 | 機能・相同性情報 transcription antitermination factor activity, DNA binding / negative regulation of cytoplasmic translational initiation / RNA polymerase complex / transcription elongation-coupled chromatin remodeling / submerged biofilm formation / cellular response to cell envelope stress / stringent response / bacterial-type RNA polymerase core enzyme binding / cytosolic DNA-directed RNA polymerase complex / regulation of DNA-templated transcription initiation ...transcription antitermination factor activity, DNA binding / negative regulation of cytoplasmic translational initiation / RNA polymerase complex / transcription elongation-coupled chromatin remodeling / submerged biofilm formation / cellular response to cell envelope stress / stringent response / bacterial-type RNA polymerase core enzyme binding / cytosolic DNA-directed RNA polymerase complex / regulation of DNA-templated transcription initiation / bacterial-type flagellum assembly / misfolded RNA binding / Group I intron splicing / RNA folding / bacterial-type flagellum-dependent cell motility / nitrate assimilation / positive regulation of ribosome biogenesis / translational termination / DnaA-L2 complex / negative regulation of DNA-templated DNA replication initiation / negative regulation of translational initiation / mRNA regulatory element binding translation repressor activity / ribosome assembly / assembly of large subunit precursor of preribosome / positive regulation of RNA splicing / transcription elongation factor complex / cytosolic ribosome assembly / regulation of DNA-templated transcription elongation / transcription antitermination / DNA-templated transcription initiation / cell motility / regulation of cell growth / translational initiation / DNA-templated transcription termination / maintenance of translational fidelity / ribonucleoside binding / mRNA 5'-UTR binding / DNA-directed 5'-3' RNA polymerase activity / DNA-directed RNA polymerase / ribosomal small subunit biogenesis / small ribosomal subunit rRNA binding / large ribosomal subunit / ribosome binding / ribosomal small subunit assembly / small ribosomal subunit / 5S rRNA binding / large ribosomal subunit rRNA binding / transferase activity / response to heat / cytosolic small ribosomal subunit / ribosomal large subunit assembly / protein-containing complex assembly / cytoplasmic translation / cytosolic large ribosomal subunit / intracellular iron ion homeostasis / tRNA binding / negative regulation of translation / protein dimerization activity / rRNA binding / ribosome / structural constituent of ribosome / ribonucleoprotein complex / translation / DNA-binding transcription factor activity / response to antibiotic / mRNA binding / nucleotide binding / magnesium ion binding / DNA binding / RNA binding / zinc ion binding / membrane / cytosol / cytoplasm 類似検索 - 分子機能 | ||||||
生物種 | Escherichia coli (大腸菌) synthetic construct (人工物) | ||||||
手法 | 電子顕微鏡法 / 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 5.3 Å | ||||||
データ登録者 | Molodtsov, V. / Wang, C. / Ebright, R.H. | ||||||
資金援助 | 米国, 1件
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引用 | ジャーナル: Nat Struct Mol Biol / 年: 2024 タイトル: Structural basis of RfaH-mediated transcription-translation coupling. 著者: Vadim Molodtsov / Chengyuan Wang / Jing Zhang / Jason T Kaelber / Gregor Blaha / Richard H Ebright / 要旨: The NusG paralog RfaH mediates bacterial transcription-translation coupling in genes that contain a DNA sequence element, termed an ops site, required for pausing RNA polymerase (RNAP) and for ...The NusG paralog RfaH mediates bacterial transcription-translation coupling in genes that contain a DNA sequence element, termed an ops site, required for pausing RNA polymerase (RNAP) and for loading RfaH onto the paused RNAP. Here, we report cryo-electron microscopy structures of transcription-translation complexes (TTCs) containing Escherichia coli RfaH. The results show that RfaH bridges RNAP and the ribosome, with the RfaH N-terminal domain interacting with RNAP and the RfaH C-terminal domain interacting with the ribosome. The results show that the distribution of translational and orientational positions of RNAP relative to the ribosome in RfaH-coupled TTCs is more restricted than in NusG-coupled TTCs because of the more restricted flexibility of the RfaH interdomain linker. The results further suggest that the structural organization of RfaH-coupled TTCs in the 'loading state', in which RNAP and RfaH are located at the ops site during formation of the TTC, is the same as the structural organization of RfaH-coupled TTCs in the 'loaded state', in which RNAP and RfaH are located at positions downstream of the ops site during function of the TTC. The results define the structural organization of RfaH-containing TTCs and set the stage for analysis of functions of RfaH during translation initiation and transcription-translation coupling. | ||||||
履歴 |
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-構造の表示
構造ビューア | 分子: MolmilJmol/JSmol |
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-ダウンロードとリンク
-ダウンロード
PDBx/mmCIF形式 | 8uqm.cif.gz | 5.8 MB | 表示 | PDBx/mmCIF形式 |
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PDB形式 | pdb8uqm.ent.gz | 表示 | PDB形式 | |
PDBx/mmJSON形式 | 8uqm.json.gz | ツリー表示 | PDBx/mmJSON形式 | |
その他 | その他のダウンロード |
-検証レポート
文書・要旨 | 8uqm_validation.pdf.gz | 1.7 MB | 表示 | wwPDB検証レポート |
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文書・詳細版 | 8uqm_full_validation.pdf.gz | 1.8 MB | 表示 | |
XML形式データ | 8uqm_validation.xml.gz | 291.9 KB | 表示 | |
CIF形式データ | 8uqm_validation.cif.gz | 520.9 KB | 表示 | |
アーカイブディレクトリ | https://data.pdbj.org/pub/pdb/validation_reports/uq/8uqm ftp://data.pdbj.org/pub/pdb/validation_reports/uq/8uqm | HTTPS FTP |
-関連構造データ
関連構造データ | 42474MC 8upoC 8uprC 8uqlC 8uqpC 8ur0C 8urhC 8uriC 8urxC 8uryC M: このデータのモデリングに利用したマップデータ C: 同じ文献を引用 (文献) |
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類似構造データ | 類似検索 - 機能・相同性F&H 検索 |
-リンク
-集合体
登録構造単位 |
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1 |
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-要素
-タンパク質 , 1種, 1分子 0
#1: タンパク質 | 分子量: 11586.374 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Escherichia coli (大腸菌) / 遺伝子: rplU, ECMP0215528_3699 / 発現宿主: Escherichia coli (大腸菌) / 参照: UniProt: A0A829CSJ4 |
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+50S ribosomal protein ... , 31種, 31分子 12349YZbcefghijklmnopqrstuvwxyz
-DNA鎖 , 2種, 2分子 56
#6: DNA鎖 | 分子量: 11042.110 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) synthetic construct (人工物) / 発現宿主: synthetic construct (人工物) |
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#7: DNA鎖 | 分子量: 10956.012 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) synthetic construct (人工物) / 発現宿主: synthetic construct (人工物) |
-RNA鎖 , 5種, 6分子 7ABDad
#8: RNA鎖 | 分子量: 12912.316 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) synthetic construct (人工物) / 発現宿主: synthetic construct (人工物) | ||||||
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#10: RNA鎖 | 分子量: 24496.617 Da / 分子数: 2 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Escherichia coli (大腸菌) / 発現宿主: Escherichia coli (大腸菌) / 参照: GenBank: 1870104878 #18: RNA鎖 | | 分子量: 499690.031 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Escherichia coli (大腸菌) / 発現宿主: Escherichia coli (大腸菌) / 参照: GenBank: 1732209707 #41: RNA鎖 | | 分子量: 941635.438 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Escherichia coli (大腸菌) / 発現宿主: Escherichia coli (大腸菌) / 参照: GenBank: 937521852 #44: RNA鎖 | | 分子量: 38790.090 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Escherichia coli (大腸菌) / 発現宿主: Escherichia coli (大腸菌) / 参照: GenBank: 1273279017 |
-DNA-directed RNA polymerase subunit ... , 4種, 5分子 AAACADAEAF
#11: タンパク質 | 分子量: 150820.875 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Escherichia coli (大腸菌) 遺伝子: rpoB, groN, nitB, rif, ron, stl, stv, tabD, b3987, JW3950 発現宿主: Escherichia coli (大腸菌) / 参照: UniProt: P0A8V2, DNA-directed RNA polymerase | ||||
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#13: タンパク質 | 分子量: 36558.680 Da / 分子数: 2 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Escherichia coli (大腸菌) / 遺伝子: rpoA, pez, phs, sez, b3295, JW3257 / 発現宿主: Escherichia coli (大腸菌) / 参照: UniProt: P0A7Z4, DNA-directed RNA polymerase #14: タンパク質 | | 分子量: 155366.781 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Escherichia coli (大腸菌) / 遺伝子: rpoC, tabB, b3988, JW3951 / 発現宿主: Escherichia coli (大腸菌) / 参照: UniProt: P0A8T7, DNA-directed RNA polymerase #15: タンパク質 | | 分子量: 10249.547 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Escherichia coli (大腸菌) / 遺伝子: rpoZ, b3649, JW3624 / 発現宿主: Escherichia coli (大腸菌) / 参照: UniProt: P0A800, DNA-directed RNA polymerase |
-Transcription ... , 2種, 2分子 ABAG
#12: タンパク質 | 分子量: 18364.217 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Escherichia coli (大腸菌) / 遺伝子: rfaH / 発現宿主: Escherichia coli (大腸菌) / 参照: UniProt: C3SK02 |
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#16: タンパク質 | 分子量: 54932.684 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Escherichia coli (大腸菌) / 遺伝子: nusA / 発現宿主: Escherichia coli (大腸菌) / 参照: UniProt: U9XV73 |
+30S ribosomal protein ... , 21種, 21分子 CEFGHIJKLMNOPQRSTUVWX
-非ポリマー , 2種, 3分子
#67: 化合物 | ChemComp-MG / |
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#68: 化合物 |
-詳細
研究の焦点であるリガンドがあるか | N |
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Has protein modification | Y |
-実験情報
-実験
実験 | 手法: 電子顕微鏡法 |
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EM実験 | 試料の集合状態: PARTICLE / 3次元再構成法: 単粒子再構成法 |
-試料調製
構成要素 | 名称: Escherichia coli transcription-translation coupled complex class B (TTC-B) containing RfaH in loaded state, NusA, mRNA with a 24 nt long spacer, and fMet-tRNAs in E-site and P-site of the ribosome タイプ: COMPLEX / Entity ID: #1-#66 / 由来: RECOMBINANT |
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分子量 | 実験値: NO |
由来(天然) | 生物種: Escherichia coli (大腸菌) |
由来(組換発現) | 生物種: Escherichia coli (大腸菌) |
緩衝液 | pH: 7.5 |
試料 | 包埋: NO / シャドウイング: NO / 染色: NO / 凍結: YES |
急速凍結 | 凍結剤: ETHANE |
-電子顕微鏡撮影
実験機器 | モデル: Talos Arctica / 画像提供: FEI Company |
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顕微鏡 | モデル: FEI TALOS ARCTICA |
電子銃 | 電子線源: FIELD EMISSION GUN / 加速電圧: 200 kV / 照射モード: FLOOD BEAM |
電子レンズ | モード: BRIGHT FIELD / 最大 デフォーカス(公称値): 2500 nm / 最小 デフォーカス(公称値): 1250 nm |
撮影 | 電子線照射量: 28 e/Å2 フィルム・検出器のモデル: GATAN K2 SUMMIT (4k x 4k) |
-解析
CTF補正 | タイプ: PHASE FLIPPING AND AMPLITUDE CORRECTION |
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3次元再構成 | 解像度: 5.3 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / 粒子像の数: 19976 / 対称性のタイプ: POINT |