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万見
- PDB-8qwf: ReChb - crRNA - target dsDNA complex in the presence of collatera... -

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基本情報

登録情報
データベース: PDB / ID: 8qwf
タイトルReChb - crRNA - target dsDNA complex in the presence of collateral dsDNA
要素
  • ReChb
  • crRNA
  • non target DNA
  • target DNA
キーワードBIOSYNTHETIC PROTEIN / Cas / cryo-EM / ancestral sequence reconstruction / biotechnology / DNA / RNA
機能・相同性DNA / DNA (> 10) / RNA / RNA (> 10)
機能・相同性情報
生物種synthetic construct (人工物)
手法電子顕微鏡法 / 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 3.08 Å
データ登録者Lopez-Alonso, J.P. / Ubarretxena-Belandia, I. / Tascon, I.
資金援助1件
組織認可番号国
Other private
引用ジャーナル: Nat Biotechnol / 年: 2024
タイトル: A resurrected ancestor of Cas12a expands target access and substrate recognition for nucleic acid editing and detection.
著者: Ylenia Jabalera / Igor Tascón / Sara Samperio / Jorge P López-Alonso / Monika Gonzalez-Lopez / Ana M Aransay / Guillermo Abascal-Palacios / Chase L Beisel / Iban Ubarretxena-Belandia / Raul Perez-Jimenez /
要旨: The properties of Cas12a nucleases constrict the range of accessible targets and their applications. In this study, we applied ancestral sequence reconstruction (ASR) to a set of Cas12a orthologs ...The properties of Cas12a nucleases constrict the range of accessible targets and their applications. In this study, we applied ancestral sequence reconstruction (ASR) to a set of Cas12a orthologs from hydrobacteria to reconstruct a common ancestor, ReChb, characterized by near-PAMless targeting and the recognition of diverse nucleic acid activators and collateral substrates. ReChb shares 53% sequence identity with the closest Cas12a ortholog but no longer requires a T-rich PAM and can achieve genome editing in human cells at sites inaccessible to the natural FnCas12a or the engineered and PAM-flexible enAsCas12a. Furthermore, ReChb can be triggered not only by double-stranded DNA but also by single-stranded RNA and DNA targets, leading to non-specific collateral cleavage of all three nucleic acid substrates with similar efficiencies. Finally, tertiary and quaternary structures of ReChb obtained by cryogenic electron microscopy reveal the molecular details underlying its expanded biophysical activities. Overall, ReChb expands the application space of Cas12a nucleases and underscores the potential of ASR for enhancing CRISPR technologies.
履歴
登録2023年10月19日登録サイト: PDBE / 処理サイト: PDBE
改定 1.02024年10月2日Provider: repository / タイプ: Initial release
改定 1.12024年11月13日Group: Data collection / Database references / Structure summary
カテゴリ: citation / citation_author ...citation / citation_author / em_admin / pdbx_entry_details
Item: _citation.country / _citation.journal_abbrev ..._citation.country / _citation.journal_abbrev / _citation.journal_id_ASTM / _citation.journal_id_CSD / _citation.journal_id_ISSN / _citation.pdbx_database_id_DOI / _citation.pdbx_database_id_PubMed / _citation.title / _citation_author.identifier_ORCID / _citation_author.name / _em_admin.last_update / _pdbx_entry_details.has_protein_modification

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構造の表示

構造ビューア分子:
MolmilJmol/JSmol

ダウンロードとリンク

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集合体

登録構造単位
A: ReChb
C: crRNA
T: non target DNA
N: target DNA
ヘテロ分子


分子量 (理論値)分子数
合計 (水以外)185,80410
ポリマ－185,6584
非ポリマー1466
水00
1


  • 登録構造と同一
  • 登録者・ソフトウェアが定義した集合体
  • 根拠: 電子顕微鏡法, not applicable
タイプ名称対称操作数
identity operation1_555x,y,z1

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要素

#1: タンパク質 ReChb / alpha-synthetic Cas


分子量: 148954.109 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) synthetic construct (人工物) / 発現宿主: Escherichia coli (大腸菌)
#2: RNA鎖 crRNA


分子量: 12696.498 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) synthetic construct (人工物) / 発現宿主: synthetic construct (人工物)
#3: DNA鎖 non target DNA


分子量: 11983.707 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) synthetic construct (人工物) / 発現宿主: synthetic construct (人工物)
#4: DNA鎖 target DNA


分子量: 12023.731 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 詳細: Ctagcatatttatcctaaggcgttaccccaatgggaggg / 由来: (組換発現) synthetic construct (人工物) / 発現宿主: synthetic construct (人工物)
#5: 化合物
ChemComp-MG / MAGNESIUM ION / マグネシウムジカチオン


分子量: 24.305 Da / 分子数: 6 / 由来タイプ: 合成 / 式: Mg
研究の焦点であるリガンドがあるかN
Has protein modificationN

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実験情報

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実験

実験手法: 電子顕微鏡法
EM実験試料の集合状態: PARTICLE / ３次元再構成法: 単粒子再構成法

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試料調製

構成要素名称: Quaternary complex of ReChb - crRNA - target dsDNA - collateral dsDNA
タイプ: COMPLEX / Entity ID: #1-#4 / 由来: MULTIPLE SOURCES
由来(天然)生物種: synthetic construct (人工物)
由来(組換発現)生物種: Escherichia coli (大腸菌)
緩衝液pH: 7.5
緩衝液成分
ID濃度名称式Buffer-ID
150 mMTris1
22 mMMagnesium chlorideMgCl21
3150 mMSodium chlorideNaCl1
40.05 %CHAPS1
試料濃度: 2.5 mg/ml / 包埋: NO / シャドウイング: NO / 染色: NO / 凍結: YES
試料支持グリッドの材料: COPPER / グリッドのサイズ: 300 divisions/in. / グリッドのタイプ: Quantifoil R1.2/1.3
急速凍結装置: LEICA EM GP / 凍結剤: ETHANE / 湿度: 95 % / 詳細: 2s blotting

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電子顕微鏡撮影

実験機器
モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company
顕微鏡モデル: FEI TITAN KRIOS
電子銃電子線源: FIELD EMISSION GUN / 加速電圧: 300 kV / 照射モード: FLOOD BEAM
電子レンズモード: BRIGHT FIELD / 倍率（公称値）: 105000 X / 最大 デフォーカス（公称値）: 1600 nm / 最小 デフォーカス（公称値）: 1000 nm / Cs: 2.7 mm / C2レンズ絞り径: 50 µm
試料ホルダ凍結剤: NITROGEN
試料ホルダーモデル: FEI TITAN KRIOS AUTOGRID HOLDER
撮影平均露光時間: 2.12 sec. / 電子線照射量: 50.2 e/Å2
フィルム・検出器のモデル: GATAN K3 BIOQUANTUM (6k x 4k)
実像数: 34123
電子光学装置エネルギーフィルター名称: GIF Bioquantum / エネルギーフィルタースリット幅: 20 eV

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解析

EMソフトウェア
ID名称バージョンカテゴリ
1Topaz粒子像選択
2EPU2画像取得
4cryoSPARC4.3.0CTF補正
7Cootモデルフィッティング
9cryoSPARC4.3.0初期オイラー角割当
10cryoSPARC4.3.0最終オイラー角割当
11cryoSPARC4.3.0分類
12cryoSPARC3.4.0３次元再構成
13PHENIXモデル精密化
CTF補正タイプ: PHASE FLIPPING AND AMPLITUDE CORRECTION
粒子像の選択選択した粒子像数: 1526906
対称性点対称性: C1 (非対称)
3次元再構成解像度: 3.08 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / 粒子像の数: 300509 / クラス平均像の数: 1 / 対称性のタイプ: POINT
原子モデル構築プロトコル: FLEXIBLE FIT / 空間: REAL
原子モデル構築詳細: ModelAngelo / Source name: Other / タイプ: other
拘束条件
Refine-IDタイプDev ideal数
ELECTRON MICROSCOPYf_bond_d0.00211882
ELECTRON MICROSCOPYf_angle_d0.49516325
ELECTRON MICROSCOPYf_dihedral_angle_d16.2282098
ELECTRON MICROSCOPYf_chiral_restr0.0381753
ELECTRON MICROSCOPYf_plane_restr0.0031839

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万見について

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お知らせ

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2022年2月9日: EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

  • EMDBのヘッダファイルのバージョン3が、公式のフォーマットとなりました。
  • これまでは公式だったバージョン1.9は、アーカイブから削除されます。

関連情報:EMDBヘッダ

外部リンク:wwPDBはEMDBデータモデルのバージョン3へ移行します

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2020年8月12日: 新型コロナ情報

新型コロナ情報

URL: https://pdbj.org/emnavi/covid19.php

新ページ: EM Navigatorに新型コロナウイルスの特設ページを開設しました。

関連情報:Covid-19情報 / 2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

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2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

新型コロナウイルスの構造データ

関連情報:万見生物種 / 2020年8月12日: 新型コロナ情報

外部リンク:COVID-19特集ページ - PDBj / 今月の分子2020年2月：コロナウイルスプロテーアーゼ

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2019年1月31日: EMDBのIDの桁数の変更

EMDBのIDの桁数の変更

  • EMDBエントリに付与されているアクセスコード(EMDB-ID)は4桁の数字(例、EMD-1234)でしたが、間もなく枯渇します。これまでの4桁のID番号は4桁のまま変更されませんが、4桁の数字を使い切った後に発行されるIDは5桁以上の数字(例、EMD-12345)になります。5桁のIDは2019年の春頃から発行される見通しです。
  • EM Navigator/万見では、接頭語「EMD-」は省略されています。

関連情報:Q: 「EMD」とは何ですか？ / 万見/EM NavigatorにおけるID/アクセスコードの表記

外部リンク:EMDB Accession Codes are Changing Soon! / PDBjへお問い合わせ

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2017年7月12日: PDB大規模アップデート

PDB大規模アップデート

  • 新バージョンのPDBx/mmCIF辞書形式に基づくデータがリリースされました。
  • 今回の更新はバージョン番号が4から5になる大規模なもので、全エントリデータの書き換えが行われる「Remediation」というアップデートに該当します。
  • このバージョンアップで、電子顕微鏡の実験手法に関する多くの項目の書式が改定されました(例：em_softwareなど)。
  • EM NavigatorとYorodumiでも、この改定に基づいた表示内容になります。

外部リンク:wwPDB Remediation / OneDepデータ基準に準拠した、より強化された内容のモデル構造ファイルが、PDBアーカイブで公開されました。

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万見 (Yorodumi)

幾万の構造データを、幾万の視点から

  • 万見(Yorodumi)は、EMDB/PDB/SASBDBなどの構造データを閲覧するためのページです。
  • EM Navigatorの詳細ページの後継、Omokage検索のフロントエンドも兼ねています。

関連情報:EMDB / PDB / SASBDB / 3つのデータバンクの比較 / 万見検索 / 2016年8月31日: 新しいEM Navigatorと万見 / 万見文献 / Jmol/JSmol / 機能・相同性情報 / 新しいEM Navigatorと万見の変更点

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