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-基本情報
登録情報 | データベース: PDB / ID: 8owm | ||||||
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タイトル | Crystal structure of glutamate dehydrogenase 2 from Arabidopsis thaliana binding Ca, NAD and 2,2-dihydroxyglutarate | ||||||
要素 | Glutamate dehydrogenase 2 | ||||||
キーワード | OXIDOREDUCTASE / glutamic acid / calcium / NAD cofactor / nitrogen metabolism / 2 / 2-dihydroxyglutarate | ||||||
機能・相同性 | 機能・相同性情報 glutamate dehydrogenase [NAD(P)+] activity / glutamate dehydrogenase [NAD(P)+] / glutamate dehydrogenase (NADP+) activity / glutamate dehydrogenase (NAD+) activity / plant-type vacuole / amino acid metabolic process / cobalt ion binding / copper ion binding / mitochondrion / zinc ion binding ...glutamate dehydrogenase [NAD(P)+] activity / glutamate dehydrogenase [NAD(P)+] / glutamate dehydrogenase (NADP+) activity / glutamate dehydrogenase (NAD+) activity / plant-type vacuole / amino acid metabolic process / cobalt ion binding / copper ion binding / mitochondrion / zinc ion binding / ATP binding / plasma membrane 類似検索 - 分子機能 | ||||||
生物種 | Arabidopsis thaliana (シロイヌナズナ) | ||||||
手法 | X線回折 / シンクロトロン / 分子置換 / 解像度: 1.7 Å | ||||||
データ登録者 | Grzechowiak, M. / Ruszkowski, M. | ||||||
資金援助 | ポーランド, 1件
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引用 | ジャーナル: Plant Physiol Biochem / 年: 2023 タイトル: Structural and functional studies of Arabidopsis thaliana glutamate dehydrogenase isoform 2 demonstrate enzyme dynamics and identify its calcium binding site. 著者: Marta Grzechowiak / Joanna Sliwiak / Mariusz Jaskolski / Milosz Ruszkowski / 要旨: Glutamate dehydrogenase (GDH) is an enzyme at the crossroad of plant nitrogen and carbon metabolism. GDH catalyzes the conversion of 2-oxoglutarate into glutamate (2OG → Glu), utilizing ammonia as ...Glutamate dehydrogenase (GDH) is an enzyme at the crossroad of plant nitrogen and carbon metabolism. GDH catalyzes the conversion of 2-oxoglutarate into glutamate (2OG → Glu), utilizing ammonia as cosubstrate and NADH as coenzyme. The GDH reaction is reversible, meaning that the NAD-dependent reaction (Glu → 2OG) releases ammonia. In Arabidopsis thaliana, three GDH isoforms exist, AtGDH1, AtGDH2, and AtGDH3. The subject of this work is AtGDH2. Previous reports have suggested that enzymes homologous to AtGDH2 contain a calcium-binding EF-hand motif located in the coenzyme binding domain. Here, we show that while AtGDH2 indeed does bind calcium, the binding occurs elsewhere and the region predicted to be the EF-hand motif has a completely different structure. As the true calcium binding site is > 20 Å away from the active site, it seems to play a structural, rather than catalytic role. We also performed comparative kinetic characterization of AtGDH1 and AtGDH2 using spectroscopic methods and isothermal titration calorimetry, to note that the isoenzymes generally exhibit similar behavior, with calcium having only a minor effect. However, the spatial and temporal changes in the gene expression profiles of the three AtGDH genes point to AtGDH2 as the most prevalent isoform. | ||||||
履歴 |
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-構造の表示
構造ビューア | 分子: MolmilJmol/JSmol |
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-ダウンロードとリンク
-ダウンロード
PDBx/mmCIF形式 | 8owm.cif.gz | 1007.2 KB | 表示 | PDBx/mmCIF形式 |
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PDB形式 | pdb8owm.ent.gz | 829.8 KB | 表示 | PDB形式 |
PDBx/mmJSON形式 | 8owm.json.gz | ツリー表示 | PDBx/mmJSON形式 | |
その他 | その他のダウンロード |
-検証レポート
文書・要旨 | 8owm_validation.pdf.gz | 4 MB | 表示 | wwPDB検証レポート |
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文書・詳細版 | 8owm_full_validation.pdf.gz | 4 MB | 表示 | |
XML形式データ | 8owm_validation.xml.gz | 109.3 KB | 表示 | |
CIF形式データ | 8owm_validation.cif.gz | 157.3 KB | 表示 | |
アーカイブディレクトリ | https://data.pdbj.org/pub/pdb/validation_reports/ow/8owm ftp://data.pdbj.org/pub/pdb/validation_reports/ow/8owm | HTTPS FTP |
-関連構造データ
関連構造データ | 8ownC 6yeiS C: 同じ文献を引用 (文献) S: 精密化の開始モデル |
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類似構造データ | 類似検索 - 機能・相同性F&H 検索 |
実験データセット #1 | データ参照: 10.18150/II5MT4 / データの種類: diffraction image data / Metadata reference: 10.18150/II5MT4 |
-リンク
-集合体
登録構造単位 |
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1 |
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単位格子 |
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-要素
-タンパク質 , 1種, 6分子 ABCDEF
#1: タンパク質 | 分子量: 45027.188 Da / 分子数: 6 / 由来タイプ: 組換発現 由来: (組換発現) Arabidopsis thaliana (シロイヌナズナ) 遺伝子: GDH2, At5g07440, T2I1_150 / 発現宿主: Escherichia coli BL21(DE3) (大腸菌) / Variant (発現宿主): -Gold / 参照: UniProt: Q38946, glutamate dehydrogenase [NAD(P)+] |
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-非ポリマー , 8種, 2156分子
#2: 化合物 | ChemComp-NAD / #3: 化合物 | ChemComp-GOL / #4: 化合物 | ChemComp-EDO / #5: 化合物 | ChemComp-U5C / #6: 化合物 | ChemComp-CA / #7: 化合物 | #8: 化合物 | ChemComp-PEG / #9: 水 | ChemComp-HOH / | |
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-詳細
研究の焦点であるリガンドがあるか | Y |
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-実験情報
-実験
実験 | 手法: X線回折 / 使用した結晶の数: 1 |
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-試料調製
結晶 | マシュー密度: 2.87 Å3/Da / 溶媒含有率: 57.16 % |
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結晶化 | 温度: 273 K / 手法: 蒸気拡散法, シッティングドロップ法 / pH: 6.5 詳細: 0.12MMonosaccharides (0.02M D-Glucose; 0.02M D-Mannose; 0.02M D-Galactose; 0.02M L-Fucose; 0.02M D-Xylose; 0.02M N-Acetyl-D-Glucosamine ),0.1M Imidazole/MES buffer pH 6.5, 20% v/v Glycerol and 10% w/v PEG 4000 |
-データ収集
回折 | 平均測定温度: 100 K / Serial crystal experiment: N |
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放射光源 | 由来: シンクロトロン / サイト: PETRA III, EMBL c/o DESY / ビームライン: P13 (MX1) / 波長: 0.9762 Å |
検出器 | タイプ: DECTRIS EIGER X 16M / 検出器: PIXEL / 日付: 2021年6月21日 |
放射 | プロトコル: SINGLE WAVELENGTH / 単色(M)・ラウエ(L): M / 散乱光タイプ: x-ray |
放射波長 | 波長: 0.9762 Å / 相対比: 1 |
反射 | 解像度: 1.7→65.7 Å / Num. obs: 318817 / % possible obs: 96.9 % / 冗長度: 3.55 % / Biso Wilson estimate: 23.46 Å2 / CC1/2: 0.998 / Rmerge(I) obs: 0.062 / Rrim(I) all: 0.075 / Net I/σ(I): 10.76 |
反射 シェル | 解像度: 1.7→1.8 Å / 冗長度: 2.92 % / Rmerge(I) obs: 0.758 / Mean I/σ(I) obs: 1.32 / Num. unique obs: 50659 / CC1/2: 0.624 / Rrim(I) all: 0.927 / % possible all: 95.2 |
-解析
ソフトウェア |
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精密化 | 構造決定の手法: 分子置換 開始モデル: 6yei 解像度: 1.7→65.7 Å / SU ML: 0.1703 / 交差検証法: FREE R-VALUE / σ(F): 1.96 / 位相誤差: 18.7346 立体化学のターゲット値: GeoStd + Monomer Library + CDL v1.2
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溶媒の処理 | 減衰半径: 0.9 Å / VDWプローブ半径: 1.11 Å / 溶媒モデル: FLAT BULK SOLVENT MODEL | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
原子変位パラメータ | Biso mean: 31.58 Å2 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
精密化ステップ | サイクル: LAST / 解像度: 1.7→65.7 Å
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拘束条件 |
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LS精密化 シェル |
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精密化 TLS | 手法: refined / Refine-ID: X-RAY DIFFRACTION
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精密化 TLSグループ |
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