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- PDB-8hvr: Cryo-EM structure of AfsR-dependent transcription activation comp... -

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基本情報

登録情報
データベース: PDB / ID: 8hvr
タイトルCryo-EM structure of AfsR-dependent transcription activation complex with afsS promoter
要素
  • (DNA (65-MER)) x 2
  • (DNA-directed RNA polymerase subunit ...) x 4
  • Putative transcriptional factor regulator
  • RNA polymerase principal sigma factor HrdB
  • RNA polymerase-binding protein RbpA
  • Regulatory protein AfsR
キーワードGENE REGULATION / RNA polymerase / SARP regulator / TRANSCRIPTION
機能・相同性
機能・相同性情報


pigment binding / bacterial-type RNA polymerase holo enzyme binding / sigma factor activity / phosphorelay signal transduction system / bacterial-type RNA polymerase core enzyme binding / rRNA transcription / cytosolic DNA-directed RNA polymerase complex / antibiotic biosynthetic process / DNA-directed RNA polymerase complex / DNA-templated transcription initiation ...pigment binding / bacterial-type RNA polymerase holo enzyme binding / sigma factor activity / phosphorelay signal transduction system / bacterial-type RNA polymerase core enzyme binding / rRNA transcription / cytosolic DNA-directed RNA polymerase complex / antibiotic biosynthetic process / DNA-directed RNA polymerase complex / DNA-templated transcription initiation / ADP binding / DNA-directed RNA polymerase activity / ribonucleoside binding / DNA-directed RNA polymerase / protein dimerization activity / DNA-templated transcription / regulation of DNA-templated transcription / magnesium ion binding / DNA binding / zinc ion binding / ATP binding / cytoplasm
類似検索 - 分子機能
Bacterial transcriptional activator domain / : / Bacterial transcriptional activator domain / Bacterial transcriptional activator domain / CarD-like, C-terminal domain / : / : / CarD, C-terminal domain / CarD-like/TRCF, RNAP-interacting domain / CarD-like/TRCF, RNAP-interacting domain superfamily ...Bacterial transcriptional activator domain / : / Bacterial transcriptional activator domain / Bacterial transcriptional activator domain / CarD-like, C-terminal domain / : / : / CarD, C-terminal domain / CarD-like/TRCF, RNAP-interacting domain / CarD-like/TRCF, RNAP-interacting domain superfamily / CarD-like/TRCF RID domain / CarD-like/TRCF domain / Tetratricopeptide repeat / OmpR/PhoB-type DNA-binding domain / Transcriptional regulatory protein, C terminal / OmpR/PhoB-type DNA-binding domain profile. / Transcriptional regulatory protein, C terminal / NB-ARC / NB-ARC domain / Tetratricopeptide repeat / Signal transduction response regulator, C-terminal effector / Sigma-70 factors family signature 1. / RNA polymerase sigma factor RpoD, C-terminal / RNA polymerase sigma factor RpoD / : / RNA polymerase sigma-70 region 1.2 / Sigma-70 factor, region 1.2 / RNA polymerase sigma-70 region 3 / Sigma-70 region 3 / Sigma-70 factors family signature 2. / RNA polymerase sigma-70 / RNA polymerase sigma-70 region 4 / Sigma-70, region 4 / RNA polymerase sigma-70 region 2 / RNA polymerase sigma-70 like domain / Sigma-70 region 2 / RNA polymerase sigma factor, region 2 / RNA polymerase sigma factor, region 3/4-like / DNA-directed RNA polymerase, omega subunit / DNA-directed RNA polymerase, subunit beta-prime, bacterial type / DNA-directed RNA polymerase, beta subunit, external 1 domain superfamily / DNA-directed RNA polymerase, beta subunit, external 1 domain / RNA polymerase beta subunit external 1 domain / RNA polymerase, alpha subunit, C-terminal / Bacterial RNA polymerase, alpha chain C terminal domain / TPR repeat region circular profile. / DNA-directed RNA polymerase, alpha subunit / DNA-directed RNA polymerase beta subunit, bacterial-type / TPR repeat profile. / Tetratricopeptide repeats / Tetratricopeptide repeat / DNA-directed RNA polymerase, subunit beta-prime / RNA polymerase Rpb6 / RNA polymerase, subunit omega/Rpo6/RPB6 / RNA polymerase Rpb6 / RNA polymerase Rpb2, domain 2 superfamily / RNA polymerase Rpb1, domain 3 superfamily / RPB6/omega subunit-like superfamily / DNA-directed RNA polymerase, insert domain / DNA-directed RNA polymerase, RpoA/D/Rpb3-type / RNA polymerase Rpb3/RpoA insert domain / RNA polymerase Rpb3/Rpb11 dimerisation domain / RNA polymerases D / RNA polymerase Rpb1, clamp domain superfamily / RNA polymerase Rpb1, domain 3 / RNA polymerase Rpb1, domain 3 / RNA polymerase Rpb1, domain 1 / RNA polymerase, beta subunit, protrusion / RNA polymerase beta subunit / RNA polymerase Rpb1, domain 1 / RNA polymerase, alpha subunit / RNA polymerase Rpb1, domain 5 / RNA polymerase Rpb1, domain 4 / DNA-directed RNA polymerase, insert domain superfamily / RNA polymerase Rpb1, domain 2 / RNA polymerase Rpb1, domain 5 / RNA polymerase Rpb1, domain 4 / RNA polymerase Rpb2, domain 2 / RNA polymerase Rpb2, domain 2 / RNA polymerase, RBP11-like subunit / RNA polymerase, N-terminal / RNA polymerase Rpb1, funnel domain superfamily / RNA polymerase I subunit A N-terminus / RNA polymerase, beta subunit, conserved site / RNA polymerase Rpb2, domain 7 / RNA polymerase Rpb2, domain 3 / RNA polymerase Rpb2, OB-fold / RNA polymerase Rpb2, domain 7 / RNA polymerase Rpb2, domain 3 / RNA polymerases beta chain signature. / DNA-directed RNA polymerase, subunit 2, hybrid-binding domain / DNA-directed RNA polymerase, subunit 2 / DNA-directed RNA polymerase, subunit 2, hybrid-binding domain superfamily / RNA polymerase Rpb2, domain 6 / Tetratricopeptide-like helical domain superfamily / Winged helix-like DNA-binding domain superfamily / P-loop containing nucleoside triphosphate hydrolase
類似検索 - ドメイン・相同性
DNA / DNA (> 10) / DNA-directed RNA polymerase subunit alpha / : / RNA polymerase principal sigma factor HrdB / Regulatory protein AfsR / DNA-directed RNA polymerase subunit beta' / DNA-directed RNA polymerase subunit omega / DNA-directed RNA polymerase subunit beta / Transcriptional factor regulator
類似検索 - 構成要素
生物種Streptomyces coelicolor A3
手法電子顕微鏡法 / 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 3.35 Å
データ登録者Wang, Y. / Zheng, J.
資金援助 中国, 1件
組織認可番号国
National Natural Science Foundation of China (NSFC)31770068, 32070040 中国
引用ジャーナル: PLoS Biol / 年: 2024
タイトル: Structural and functional characterization of AfsR, an SARP family transcriptional activator of antibiotic biosynthesis in Streptomyces.
著者: Yiqun Wang / Xu Yang / Feng Yu / Zixin Deng / Shuangjun Lin / Jianting Zheng /
要旨: Streptomyces antibiotic regulatory proteins (SARPs) are widely distributed activators of antibiotic biosynthesis. Streptomyces coelicolor AfsR is an SARP regulator with an additional nucleotide- ...Streptomyces antibiotic regulatory proteins (SARPs) are widely distributed activators of antibiotic biosynthesis. Streptomyces coelicolor AfsR is an SARP regulator with an additional nucleotide-binding oligomerization domain (NOD) and a tetratricopeptide repeat (TPR) domain. Here, we present cryo-electron microscopy (cryo-EM) structures and in vitro assays to demonstrate how the SARP domain activates transcription and how it is modulated by NOD and TPR domains. The structures of transcription initiation complexes (TICs) show that the SARP domain forms a side-by-side dimer to simultaneously engage the afs box overlapping the -35 element and the σHrdB region 4 (R4), resembling a sigma adaptation mechanism. The SARP extensively interacts with the subunits of the RNA polymerase (RNAP) core enzyme including the β-flap tip helix (FTH), the β' zinc-binding domain (ZBD), and the highly flexible C-terminal domain of the α subunit (αCTD). Transcription assays of full-length AfsR and truncated proteins reveal the inhibitory effect of NOD and TPR on SARP transcription activation, which can be eliminated by ATP binding. In vitro phosphorylation hardly affects transcription activation of AfsR, but counteracts the disinhibition of ATP binding. Overall, our results present a detailed molecular view of how AfsR serves to activate transcription.
履歴
登録2022年12月27日登録サイト: PDBJ / 処理サイト: PDBJ
改定 1.02023年12月27日Provider: repository / タイプ: Initial release
改定 1.12024年4月3日Group: Database references / カテゴリ: citation / citation_author
Item: _citation.country / _citation.journal_abbrev ..._citation.country / _citation.journal_abbrev / _citation.journal_id_CSD / _citation.journal_id_ISSN / _citation.journal_volume / _citation.page_first / _citation.page_last / _citation.pdbx_database_id_DOI / _citation.pdbx_database_id_PubMed / _citation.title / _citation.year

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構造の表示

構造ビューア分子:
MolmilJmol/JSmol

ダウンロードとリンク

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集合体

登録構造単位
A: DNA-directed RNA polymerase subunit alpha
B: DNA-directed RNA polymerase subunit alpha
C: DNA-directed RNA polymerase subunit beta
D: DNA-directed RNA polymerase subunit beta'
E: DNA-directed RNA polymerase subunit omega
F: RNA polymerase principal sigma factor HrdB
G: RNA polymerase-binding protein RbpA
H: Putative transcriptional factor regulator
I: Regulatory protein AfsR
J: Regulatory protein AfsR
K: DNA-directed RNA polymerase subunit alpha
O: DNA (65-MER)
P: DNA (65-MER)
ヘテロ分子


分子量 (理論値)分子数
合計 (水以外)587,73316
ポリマ－587,57813
非ポリマー1553
水00
1


  • 登録構造と同一
  • 登録者が定義した集合体
  • 根拠: gel filtration
タイプ名称対称操作数
identity operation1_5551

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要素

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DNA-directed RNA polymerase subunit ... , 4種, 6分子 ABKCDE

#1: タンパク質 DNA-directed RNA polymerase subunit alpha / RNAP subunit alpha / RNA polymerase subunit alpha / Transcriptase subunit alpha


分子量: 36734.641 Da / 分子数: 3 / 由来タイプ: 組換発現
由来: (組換発現) Streptomyces coelicolor A3(2) (バクテリア)
遺伝子: rpoA, GTW64_13255 / 発現宿主: Escherichia coli BL21(DE3) (大腸菌) / 参照: UniProt: A0A6G2M9E1, DNA-directed RNA polymerase
#2: タンパク質 DNA-directed RNA polymerase subunit beta / RNAP subunit beta / RNA polymerase subunit beta / Transcriptase subunit beta


分子量: 128644.945 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現
由来: (組換発現) Streptomyces coelicolor A3(2) (バクテリア)
遺伝子: rpoB, SCO4654, SCD82.26 / 発現宿主: Escherichia coli BL21(DE3) (大腸菌) / 参照: UniProt: Q9L0L0, DNA-directed RNA polymerase
#3: タンパク質 DNA-directed RNA polymerase subunit beta' / RNAP subunit beta' / RNA polymerase subunit beta' / Transcriptase subunit beta'


分子量: 145912.219 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現
由来: (組換発現) Streptomyces coelicolor A3(2) (バクテリア)
遺伝子: rpoC, SCO4655, SCD40A.01, SCD82.27 / 発現宿主: Escherichia coli BL21(DE3) (大腸菌) / 参照: UniProt: Q8CJT1, DNA-directed RNA polymerase
#4: タンパク質 DNA-directed RNA polymerase subunit omega / RNAP omega subunit / RNA polymerase omega subunit / Transcriptase subunit omega


分子量: 9716.941 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現
由来: (組換発現) Streptomyces coelicolor A3(2) (バクテリア)
遺伝子: rpoZ, SCO1478, SC9C5.02c / 発現宿主: Escherichia coli BL21(DE3) (大腸菌) / 参照: UniProt: Q9KXS1, DNA-directed RNA polymerase

-
タンパク質 , 4種, 5分子 FGHIJ

#5: タンパク質 RNA polymerase principal sigma factor HrdB / RNA polymerase sigma factor SigA


分子量: 58188.953 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現
由来: (組換発現) Streptomyces coelicolor A3(2) (バクテリア)
遺伝子: hrdB, sigA, SCO5820, SC5B8.10 / 発現宿主: Escherichia coli BL21(DE3) (大腸菌) / 参照: UniProt: P18183
#6: タンパク質 RNA polymerase-binding protein RbpA


分子量: 14146.094 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現
由来: (組換発現) Streptomyces coelicolor A3(2) (バクテリア)
遺伝子: rbpA / 発現宿主: Escherichia coli BL21(DE3) (大腸菌) / 参照: UniProt: A0A6M9XI42
#7: タンパク質 Putative transcriptional factor regulator


分子量: 17855.338 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現
由来: (組換発現) Streptomyces coelicolor A3(2) (バクテリア)
遺伝子: SCD8A.05 / 発現宿主: Escherichia coli BL21(DE3) (大腸菌) / 参照: UniProt: Q9L0Q9
#8: タンパク質 Regulatory protein AfsR


分子量: 31479.572 Da / 分子数: 2 / 由来タイプ: 組換発現
由来: (組換発現) Streptomyces coelicolor A3(2) (バクテリア)
遺伝子: afsR, afsB, SCO4426, SCD6.04c / 発現宿主: Escherichia coli BL21(DE3) (大腸菌) / 参照: UniProt: P25941

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DNA鎖 , 2種, 2分子 OP

#9: DNA鎖 DNA (65-MER)


分子量: 19863.656 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 合成
由来: (合成) Streptomyces coelicolor A3(2) (バクテリア)
#10: DNA鎖 DNA (65-MER)


分子量: 20086.846 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 合成
由来: (合成) Streptomyces coelicolor A3(2) (バクテリア)

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非ポリマー , 2種, 3分子

#11: 化合物 ChemComp-MG / MAGNESIUM ION / マグネシウムジカチオン


分子量: 24.305 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 合成 / 式: Mg / タイプ: SUBJECT OF INVESTIGATION
#12: 化合物 ChemComp-ZN / ZINC ION


分子量: 65.409 Da / 分子数: 2 / 由来タイプ: 合成 / 式: Zn / タイプ: SUBJECT OF INVESTIGATION

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詳細

研究の焦点であるリガンドがあるかY

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実験情報

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実験

実験手法: 電子顕微鏡法
EM実験試料の集合状態: PARTICLE / ３次元再構成法: 単粒子再構成法

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試料調製

構成要素名称: Cryo-EM structure of AfsR-dependent transcription activation complex with afsS promoter
タイプ: COMPLEX / Entity ID: #1-#5, #7-#10, #6 / 由来: RECOMBINANT
分子量値: 0.56 MDa / 実験値: YES
由来(天然)生物種: Streptomyces coelicolor A3(2) (バクテリア)
由来(組換発現)生物種: Escherichia coli BL21(DE3) (大腸菌)
緩衝液pH: 8
緩衝液成分
ID濃度名称式Buffer-ID
120 mMTRISTRIS1
250 mMKClKCl1
33 mMDTTDTT1
45 mMMgCl2MgCl21
試料濃度: 0.8 mg/ml / 包埋: NO / シャドウイング: NO / 染色: NO / 凍結: YES
試料支持グリッドの材料: GOLD / グリッドのサイズ: 300 divisions/in. / グリッドのタイプ: Quantifoil R1.2/1.3
急速凍結装置: FEI VITROBOT MARK IV / 凍結剤: ETHANE / 湿度: 100 % / 凍結前の試料温度: 289 K

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電子顕微鏡撮影

実験機器
モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company
顕微鏡モデル: FEI TITAN KRIOS
電子銃電子線源: FIELD EMISSION GUN / 加速電圧: 300 kV / 照射モード: FLOOD BEAM
電子レンズモード: BRIGHT FIELD / 倍率（公称値）: 130000 X / 最大 デフォーカス（公称値）: 2000 nm / 最小 デフォーカス（公称値）: 1000 nm / Cs: 2.7 mm / C2レンズ絞り径: 70 µm / アライメント法: BASIC
試料ホルダ凍結剤: NITROGEN
試料ホルダーモデル: FEI TITAN KRIOS AUTOGRID HOLDER
最高温度: 77 K / 最低温度: 77 K
撮影電子線照射量: 40 e/Å2 / 検出モード: COUNTING
フィルム・検出器のモデル: GATAN K2 QUANTUM (4k x 4k)
電子光学装置エネルギーフィルター名称: GIF Bioquantum
画像スキャン動画フレーム数/画像: 32

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解析

ソフトウェア名称: PHENIX / バージョン: 1.19.2_4158: / 分類: 精密化
EMソフトウェア
ID名称バージョンカテゴリ詳細
2SerialEM3.8.6画像取得
9PHENIX1.20.1-4487モデル精密化automated refinement using real-space maps
CTF補正タイプ: PHASE FLIPPING AND AMPLITUDE CORRECTION
粒子像の選択選択した粒子像数: 193644
対称性点対称性: C1 (非対称)
3次元再構成解像度: 3.35 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / 粒子像の数: 95223 / 対称性のタイプ: POINT
原子モデル構築空間: REAL
拘束条件
Refine-IDタイプDev ideal数
ELECTRON MICROSCOPYf_bond_d0.00434829
ELECTRON MICROSCOPYf_angle_d0.68847634
ELECTRON MICROSCOPYf_dihedral_angle_d15.9425671
ELECTRON MICROSCOPYf_chiral_restr0.0455423
ELECTRON MICROSCOPYf_plane_restr0.0055839

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万見について

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お知らせ

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2022年2月9日: EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

  • EMDBのヘッダファイルのバージョン3が、公式のフォーマットとなりました。
  • これまでは公式だったバージョン1.9は、アーカイブから削除されます。

関連情報:EMDBヘッダ

外部リンク:wwPDBはEMDBデータモデルのバージョン3へ移行します

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2020年8月12日: 新型コロナ情報

新型コロナ情報

URL: https://pdbj.org/emnavi/covid19.php

新ページ: EM Navigatorに新型コロナウイルスの特設ページを開設しました。

関連情報:Covid-19情報 / 2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

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2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

新型コロナウイルスの構造データ

関連情報:万見生物種 / 2020年8月12日: 新型コロナ情報

外部リンク:COVID-19特集ページ - PDBj / 今月の分子2020年2月：コロナウイルスプロテーアーゼ

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2019年1月31日: EMDBのIDの桁数の変更

EMDBのIDの桁数の変更

  • EMDBエントリに付与されているアクセスコード(EMDB-ID)は4桁の数字(例、EMD-1234)でしたが、間もなく枯渇します。これまでの4桁のID番号は4桁のまま変更されませんが、4桁の数字を使い切った後に発行されるIDは5桁以上の数字(例、EMD-12345)になります。5桁のIDは2019年の春頃から発行される見通しです。
  • EM Navigator/万見では、接頭語「EMD-」は省略されています。

関連情報:Q: 「EMD」とは何ですか？ / 万見/EM NavigatorにおけるID/アクセスコードの表記

外部リンク:EMDB Accession Codes are Changing Soon! / PDBjへお問い合わせ

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2017年7月12日: PDB大規模アップデート

PDB大規模アップデート

  • 新バージョンのPDBx/mmCIF辞書形式に基づくデータがリリースされました。
  • 今回の更新はバージョン番号が4から5になる大規模なもので、全エントリデータの書き換えが行われる「Remediation」というアップデートに該当します。
  • このバージョンアップで、電子顕微鏡の実験手法に関する多くの項目の書式が改定されました(例：em_softwareなど)。
  • EM NavigatorとYorodumiでも、この改定に基づいた表示内容になります。

外部リンク:wwPDB Remediation / OneDepデータ基準に準拠した、より強化された内容のモデル構造ファイルが、PDBアーカイブで公開されました。

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万見 (Yorodumi)

幾万の構造データを、幾万の視点から

  • 万見(Yorodumi)は、EMDB/PDB/SASBDBなどの構造データを閲覧するためのページです。
  • EM Navigatorの詳細ページの後継、Omokage検索のフロントエンドも兼ねています。

関連情報:EMDB / PDB / SASBDB / 3つのデータバンクの比較 / 万見検索 / 2016年8月31日: 新しいEM Navigatorと万見 / 万見文献 / Jmol/JSmol / 機能・相同性情報 / 新しいEM Navigatorと万見の変更点

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