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万見
- PDB-8chf: cryo-EM Structure of Craf:14-3-3:Mek1 -

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基本情報

登録情報
データベース: PDB / ID: 8chf
タイトルcryo-EM Structure of Craf:14-3-3:Mek1
要素
  • 14-3-3 protein zeta isoform X1
  • Dual specificity mitogen-activated protein kinase kinase 1
  • RAF proto-oncogene serine/threonine-protein kinase
キーワードSTRUCTURAL PROTEIN / Kinase
機能・相同性
機能・相同性情報


death-inducing signaling complex assembly / epithelial cell proliferation involved in lung morphogenesis / positive regulation of endodermal cell differentiation / intermediate filament cytoskeleton organization / placenta blood vessel development / regulation of axon regeneration / mitogen-activated protein kinase kinase / labyrinthine layer development / MAP-kinase scaffold activity / type B pancreatic cell proliferation ...death-inducing signaling complex assembly / epithelial cell proliferation involved in lung morphogenesis / positive regulation of endodermal cell differentiation / intermediate filament cytoskeleton organization / placenta blood vessel development / regulation of axon regeneration / mitogen-activated protein kinase kinase / labyrinthine layer development / MAP-kinase scaffold activity / type B pancreatic cell proliferation / cerebellar cortex formation / regulation of Rho protein signal transduction / SHOC2 M1731 mutant abolishes MRAS complex function / Gain-of-function MRAS complexes activate RAF signaling / Rap1 signalling / Signaling by MAP2K mutants / regulation of cell motility / insulin secretion involved in cellular response to glucose stimulus / regulation of Golgi inheritance / spindle pole body / trachea formation / Negative feedback regulation of MAPK pathway / regulation of early endosome to late endosome transport / positive regulation of axonogenesis / regulation of stress-activated MAPK cascade / GP1b-IX-V activation signalling / IFNG signaling activates MAPKs / Frs2-mediated activation / regulation of cell differentiation / ERBB2-ERBB3 signaling pathway / protein kinase activator activity / MAPK3 (ERK1) activation / endodermal cell differentiation / face development / pseudopodium / MAP kinase kinase activity / Bergmann glial cell differentiation / neurotrophin TRK receptor signaling pathway / somatic stem cell population maintenance / Uptake and function of anthrax toxins / thyroid gland development / MAP kinase kinase kinase activity / extrinsic apoptotic signaling pathway via death domain receptors / type II interferon-mediated signaling pathway / negative regulation of protein-containing complex assembly / Schwann cell development / activation of adenylate cyclase activity / negative regulation of extrinsic apoptotic signaling pathway via death domain receptors / keratinocyte differentiation / response to muscle stretch / protein serine/threonine/tyrosine kinase activity / myelination / CD209 (DC-SIGN) signaling / ERK1 and ERK2 cascade / protein serine/threonine kinase activator activity / MAP3K8 (TPL2)-dependent MAPK1/3 activation / : / insulin-like growth factor receptor signaling pathway / thymus development / Signal transduction by L1 / cell motility / RAF activation / wound healing / Signaling by high-kinase activity BRAF mutants / MAP2K and MAPK activation / positive regulation of protein serine/threonine kinase activity / neuron differentiation / Stimuli-sensing channels / Negative regulation of MAPK pathway / Signaling by RAF1 mutants / Signaling by moderate kinase activity BRAF mutants / Paradoxical activation of RAF signaling by kinase inactive BRAF / Signaling downstream of RAS mutants / chemotaxis / cellular senescence / Signaling by BRAF and RAF1 fusions / MAPK cascade / late endosome / insulin receptor signaling pathway / positive regulation of peptidyl-serine phosphorylation / heart development / scaffold protein binding / protein tyrosine kinase activity / regulation of apoptotic process / mitochondrial outer membrane / positive regulation of MAPK cascade / positive regulation of ERK1 and ERK2 cascade / early endosome / non-specific serine/threonine protein kinase / protein kinase activity / protein phosphorylation / negative regulation of cell population proliferation / protein serine kinase activity / focal adhesion / protein serine/threonine kinase activity / centrosome / positive regulation of gene expression / negative regulation of apoptotic process / apoptotic process / positive regulation of DNA-templated transcription
類似検索 - 分子機能
: / Raf-like Ras-binding domain / Raf-like Ras-binding / Ras-binding domain (RBD) profile. / Raf-like Ras-binding domain / Diacylglycerol/phorbol-ester binding / : / Phorbol esters/diacylglycerol binding domain (C1 domain) / Zinc finger phorbol-ester/DAG-type signature. / Zinc finger phorbol-ester/DAG-type profile. ...: / Raf-like Ras-binding domain / Raf-like Ras-binding / Ras-binding domain (RBD) profile. / Raf-like Ras-binding domain / Diacylglycerol/phorbol-ester binding / : / Phorbol esters/diacylglycerol binding domain (C1 domain) / Zinc finger phorbol-ester/DAG-type signature. / Zinc finger phorbol-ester/DAG-type profile. / Protein kinase C conserved region 1 (C1) domains (Cysteine-rich domains) / Protein kinase C-like, phorbol ester/diacylglycerol-binding domain / C1-like domain superfamily / 14-3-3 proteins signature 2. / 14-3-3 protein, conserved site / 14-3-3 proteins signature 1. / 14-3-3 protein / 14-3-3 homologues / 14-3-3 domain / 14-3-3 domain superfamily / 14-3-3 protein / Ubiquitin-like domain superfamily / Serine/threonine-protein kinase, active site / Serine/Threonine protein kinases active-site signature. / Protein kinase domain / Serine/Threonine protein kinases, catalytic domain / Protein kinase, ATP binding site / Protein kinases ATP-binding region signature. / Protein kinase domain profile. / Protein kinase domain / Protein kinase-like domain superfamily
類似検索 - ドメイン・相同性
Chem-29L / 14-3-3 protein zeta isoform X1 / RAF proto-oncogene serine/threonine-protein kinase / Dual specificity mitogen-activated protein kinase kinase 1
類似検索 - 構成要素
生物種Homo sapiens (ヒト)
Spodoptera frugiperda (ツマジロクサヨトウ)
手法電子顕微鏡法 / 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 4.25 Å
データ登録者Dedden, D. / Ulrich, G.
資金援助 ドイツ, 1件
組織認可番号国
Other private ドイツ
引用ジャーナル: J Mol Biol / 年: 2024
タイトル: Cryo-EM Structures of CRAF/14-3-3 and CRAF/14-3-3/MEK1 Complexes.
著者: Dirk Dedden / Julius Nitsche / Elisabeth V Schneider / Maren Thomsen / Daniel Schwarz / Birgitta Leuthner / Ulrich Grädler /
要旨: RAF protein kinases are essential effectors in the MAPK pathway and are important cancer drug targets. Structural understanding of RAF activation is so far based on cryo-electron microscopy (cryo-EM) ...RAF protein kinases are essential effectors in the MAPK pathway and are important cancer drug targets. Structural understanding of RAF activation is so far based on cryo-electron microscopy (cryo-EM) and X-ray structures of BRAF in different conformational states as inactive or active complexes with KRAS, 14-3-3 and MEK1. In this study, we have solved the first cryo-EM structures of CRAF/14-3-3 at 3.4 Å resolution and CRAF/14-3-3/MEK1 at 4.2 Å resolution using CRAF kinase domain expressed as constitutively active Y340D/Y341D mutant in insect cells. The overall architecture of our CRAF/14-3-3 and CRAF/14-3-3/MEK1 cryo-EM structures is highly similar to corresponding BRAF structures in complex with 14-3-3 or 14-3-3/MEK1 and represent the activated dimeric RAF conformation. Our CRAF cryo-EM structures provide additional insights into structural understanding of the activated CRAF/14-3-3/MEK1 complex.
履歴
登録2023年2月7日登録サイト: PDBE / 処理サイト: PDBE
改定 1.02024年2月21日Provider: repository / タイプ: Initial release
改定 1.12024年2月28日Group: Database references / カテゴリ: citation / Item: _citation.journal_volume / _citation.title

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構造の表示

構造ビューア分子:
MolmilJmol/JSmol

ダウンロードとリンク

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集合体

登録構造単位
A: RAF proto-oncogene serine/threonine-protein kinase
B: RAF proto-oncogene serine/threonine-protein kinase
C: 14-3-3 protein zeta isoform X1
D: 14-3-3 protein zeta isoform X1
E: Dual specificity mitogen-activated protein kinase kinase 1
F: Dual specificity mitogen-activated protein kinase kinase 1
ヘテロ分子


分子量 (理論値)分子数
合計 (水以外)290,1798
ポリマ－289,5106
非ポリマー6692
水00
1


  • 登録構造と同一
  • 登録者・ソフトウェアが定義した集合体
  • 根拠: gel filtration
タイプ名称対称操作数
identity operation1_5551
Buried area12400 Å2
ΔGint-63 kcal/mol
Surface area71730 Å2
手法PISA

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要素

#1: タンパク質 RAF proto-oncogene serine/threonine-protein kinase / Proto-oncogene c-RAF / cRaf / Raf-1


分子量: 73184.477 Da / 分子数: 2 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Homo sapiens (ヒト) / 遺伝子: RAF1, RAF
発現宿主: Spodoptera frugiperda (ツマジロクサヨトウ)
参照: UniProt: P04049, non-specific serine/threonine protein kinase
#2: タンパク質 14-3-3 protein zeta isoform X1


分子量: 28108.514 Da / 分子数: 2 / 由来タイプ: 天然
由来: (天然) Spodoptera frugiperda (ツマジロクサヨトウ)
参照: UniProt: A0A9R0D7T1
#3: タンパク質 Dual specificity mitogen-activated protein kinase kinase 1 / MAP kinase kinase 1 / MAPKK 1 / MKK1 / ERK activator kinase 1 / MAPK/ERK kinase 1 / MEK 1


分子量: 43461.938 Da / 分子数: 2 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Homo sapiens (ヒト) / 遺伝子: MAP2K1, MEK1, PRKMK1
発現宿主: Spodoptera frugiperda (ツマジロクサヨトウ)
参照: UniProt: Q02750, mitogen-activated protein kinase kinase
#4: 化合物 ChemComp-29L / 2-{4-[(1E)-1-(hydroxyimino)-2,3-dihydro-1H-inden-5-yl]-3-(pyridin-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl}ethanol / GDC-0879


分子量: 334.372 Da / 分子数: 2 / 由来タイプ: 合成 / 式: C19H18N4O2 / タイプ: SUBJECT OF INVESTIGATION
研究の焦点であるリガンドがあるかY

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実験情報

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実験

実験手法: 電子顕微鏡法
EM実験試料の集合状態: PARTICLE / ３次元再構成法: 単粒子再構成法

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試料調製

構成要素名称: Complex of dimer phosphorylated C-raf kinase domain with 14-3-3 dimer and 2 subunits of Mek1 containing ligand GDC-0623
タイプ: COMPLEX / Entity ID: #1-#3 / 由来: MULTIPLE SOURCES
由来(天然)生物種: Homo sapiens (ヒト)
由来(組換発現)生物種: Spodoptera frugiperda (ツマジロクサヨトウ)
緩衝液pH: 7.5
試料濃度: 0.4 mg/ml / 包埋: NO / シャドウイング: NO / 染色: NO / 凍結: YES
試料支持グリッドの材料: COPPER / グリッドのサイズ: 300 divisions/in. / グリッドのタイプ: Quantifoil R1.2/1.3
急速凍結装置: FEI VITROBOT MARK IV / 凍結剤: ETHANE-PROPANE / 湿度: 100 % / 凍結前の試料温度: 298 K

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電子顕微鏡撮影

顕微鏡モデル: TFS GLACIOS
電子銃電子線源: FIELD EMISSION GUN / 加速電圧: 200 kV / 照射モード: FLOOD BEAM
電子レンズモード: BRIGHT FIELD / 倍率（公称値）: 150000 X / 最大 デフォーカス（公称値）: 2300 nm / 最小 デフォーカス（公称値）: 700 nm / Cs: 2.7 mm / C2レンズ絞り径: 50 µm
試料ホルダ凍結剤: NITROGEN
試料ホルダーモデル: FEI TITAN KRIOS AUTOGRID HOLDER
撮影平均露光時間: 7 sec. / 電子線照射量: 60 e/Å2
フィルム・検出器のモデル: FEI FALCON IV (4k x 4k)
撮影したグリッド数: 1 / 実像数: 2732
画像スキャンサンプリングサイズ: 0.9142 µm / 横: 4096 / 縦: 4096

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解析

CTF補正タイプ: PHASE FLIPPING AND AMPLITUDE CORRECTION
3次元再構成解像度: 4.25 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / 粒子像の数: 79383 / アルゴリズム: FOURIER SPACE / 対称性のタイプ: POINT
原子モデル構築プロトコル: RIGID BODY FIT
精密化解像度: 4.25→4.25 Å / Cor.coef. Fo:Fc: 0.931 / SU B: 70.636 / SU ML: 0.767 / ESU R: 0.375
立体化学のターゲット値: MAXIMUM LIKELIHOOD WITH PHASES
詳細: HYDROGENS HAVE BEEN ADDED IN THE RIDING POSITIONS
Rfactor反射数%反射
Rwork0.44498 --
obs0.44498 361986 100 %
溶媒の処理溶媒モデル: PARAMETERS FOR MASK CACLULATION
原子変位パラメータBiso mean: 161.235 Å2
精密化ステップサイクル: 1 / 合計: 12526
拘束条件
Refine-IDタイプDev ideal数
ELECTRON MICROSCOPYf_bond_d0.00412762
ELECTRON MICROSCOPYf_angle_d0.75317210
ELECTRON MICROSCOPYf_dihedral_angle_d6.1211737
ELECTRON MICROSCOPYf_chiral_restr0.0471903
ELECTRON MICROSCOPYf_plane_restr0.0062194
LS精密化 シェル解像度: 4.2→4.309 Å / Total num. of bins used: 20
Rfactor反射数%反射
Rfree0 0 -
Rwork0.607 26993 -
obs--100 %

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万見について

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お知らせ

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2022年2月9日: EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

  • EMDBのヘッダファイルのバージョン3が、公式のフォーマットとなりました。
  • これまでは公式だったバージョン1.9は、アーカイブから削除されます。

関連情報:EMDBヘッダ

外部リンク:wwPDBはEMDBデータモデルのバージョン3へ移行します

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2020年8月12日: 新型コロナ情報

新型コロナ情報

URL: https://pdbj.org/emnavi/covid19.php

新ページ: EM Navigatorに新型コロナウイルスの特設ページを開設しました。

関連情報:Covid-19情報 / 2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

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2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

新型コロナウイルスの構造データ

関連情報:万見生物種 / 2020年8月12日: 新型コロナ情報

外部リンク:COVID-19特集ページ - PDBj / 今月の分子2020年2月：コロナウイルスプロテーアーゼ

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2019年1月31日: EMDBのIDの桁数の変更

EMDBのIDの桁数の変更

  • EMDBエントリに付与されているアクセスコード(EMDB-ID)は4桁の数字(例、EMD-1234)でしたが、間もなく枯渇します。これまでの4桁のID番号は4桁のまま変更されませんが、4桁の数字を使い切った後に発行されるIDは5桁以上の数字(例、EMD-12345)になります。5桁のIDは2019年の春頃から発行される見通しです。
  • EM Navigator/万見では、接頭語「EMD-」は省略されています。

関連情報:Q: 「EMD」とは何ですか？ / 万見/EM NavigatorにおけるID/アクセスコードの表記

外部リンク:EMDB Accession Codes are Changing Soon! / PDBjへお問い合わせ

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2017年7月12日: PDB大規模アップデート

PDB大規模アップデート

  • 新バージョンのPDBx/mmCIF辞書形式に基づくデータがリリースされました。
  • 今回の更新はバージョン番号が4から5になる大規模なもので、全エントリデータの書き換えが行われる「Remediation」というアップデートに該当します。
  • このバージョンアップで、電子顕微鏡の実験手法に関する多くの項目の書式が改定されました(例：em_softwareなど)。
  • EM NavigatorとYorodumiでも、この改定に基づいた表示内容になります。

外部リンク:wwPDB Remediation / OneDepデータ基準に準拠した、より強化された内容のモデル構造ファイルが、PDBアーカイブで公開されました。

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万見 (Yorodumi)

幾万の構造データを、幾万の視点から

  • 万見(Yorodumi)は、EMDB/PDB/SASBDBなどの構造データを閲覧するためのページです。
  • EM Navigatorの詳細ページの後継、Omokage検索のフロントエンドも兼ねています。

関連情報:EMDB / PDB / SASBDB / 3つのデータバンクの比較 / 万見検索 / 2016年8月31日: 新しいEM Navigatorと万見 / 万見文献 / Jmol/JSmol / 機能・相同性情報 / 新しいEM Navigatorと万見の変更点

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