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万見
- PDB-8a9u: Full AAV3B-VP1KO virion -

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基本情報

登録情報
データベース: PDB / ID: 8a9u
タイトルFull AAV3B-VP1KO virion
要素Capsid protein VP1
キーワードVIRUS / Adeno-Associated Virus / AAV / AAV3B / AAV serotype 3B / Full / VP1KO
機能・相同性Phospholipase A2-like domain / Phospholipase A2-like domain / Parvovirus coat protein VP2 / Parvovirus coat protein VP1/VP2 / Parvovirus coat protein VP2 / Capsid/spike protein, ssDNA virus / T=1 icosahedral viral capsid / structural molecule activity / Capsid protein VP1
機能・相同性情報
生物種Homo sapiens (ヒト)
手法電子顕微鏡法 / 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 3.1 Å
データ登録者Arriaga, I. / Abrescia, N.G.A.
資金援助1件
組織認可番号国
Not funded
引用ジャーナル: Hum Gene Ther / 年: 2022
タイトル: Cellular and Structural Characterization of VP1 and VP2 Knockout Mutants of AAV3B Serotype and Implications for AAV Manufacturing.
著者: Iker Arriaga / Aitor Navarro / Amaia Etxabe / César Trigueros / R Jude Samulski / Philippe Moullier / Achille François / Nicola G A Abrescia /
要旨: AAV virion biology is still lacking a complete understanding of the role that the various structural subunits (VP1, 2, and 3) play in virus assembly, infectivity, and therapeutic delivery for ...AAV virion biology is still lacking a complete understanding of the role that the various structural subunits (VP1, 2, and 3) play in virus assembly, infectivity, and therapeutic delivery for clinical indications. In this study, we focus on the less studied adeno-associated virus AAV3B and generate a collection of AAV plasmid substrates that assemble virion particles deficient specifically in VP1, VP2, or VP1 and 2 structural subunits. Using a collection of biological and structural assays, we observed that virions devoid of VP1, VP2, or VP1 and 2 efficiently assembled virion particles, indistinguishable by cryoelectron microscopy (cryo-EM) from that of wild type (WT), but unique in virion transduction (WT > VP2 > VP1 > VP1 and 2 mutants). We also observed that the missing structural subunit was mostly compensated by additional VP3 protomers in the formed virion particle. Using cryo-EM analysis, virions fell into three classes, namely full, empty, and partially filled, based on comparison of density values within the capsid. Further, we characterize virions described as "broken" or "disassembled" particles, and provide structural information that supports the particle dissolution occurring through the two-fold symmetry sites. Finally, we highlight the unique value of employing cryo-EM as an essential tool for release criteria with respect to AAV manufacturing.
履歴
登録2022年6月29日登録サイト: PDBE / 処理サイト: PDBE
改定 1.02022年9月21日Provider: repository / タイプ: Initial release
改定 1.12022年11月23日Group: Database references / カテゴリ: citation / citation_author
Item: _citation.journal_volume / _citation.page_first ..._citation.journal_volume / _citation.page_first / _citation.page_last / _citation.title / _citation_author.name
改定 1.22024年11月13日Group: Data collection / Refinement description / Structure summary
カテゴリ: chem_comp_atom / chem_comp_bond ...chem_comp_atom / chem_comp_bond / em_3d_fitting_list / em_admin / pdbx_entry_details / pdbx_initial_refinement_model / pdbx_modification_feature
Item: _em_3d_fitting_list.accession_code / _em_3d_fitting_list.initial_refinement_model_id ..._em_3d_fitting_list.accession_code / _em_3d_fitting_list.initial_refinement_model_id / _em_3d_fitting_list.source_name / _em_3d_fitting_list.type / _em_admin.last_update

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構造の表示

構造ビューア分子:
MolmilJmol/JSmol

ダウンロードとリンク

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集合体

登録構造単位
0: Capsid protein VP1


分子量 (理論値)分子数
合計 (水以外)66,7281
ポリマ－66,7281
非ポリマー00
水00
1
0: Capsid protein VP1
x 60


分子量 (理論値)分子数
合計 (水以外)4,003,69760
ポリマ－4,003,69760
非ポリマー00
水0
タイプ名称対称操作数
identity operation1_555x,y,z1
point symmetry operation59

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要素

#1: タンパク質 Capsid protein VP1


分子量: 66728.281 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現
詳細: For pXR3b-VP1KO, the ATG start codon of VP1 was changed to TGA, and the GAT codon of Asp4 was changed to GAC to remove an alternative ATG. Thus this sample only has VP2 and VP3.
由来: (組換発現) Homo sapiens (ヒト) / プラスミド: pXR3b / 詳細 (発現宿主): AAV2 rep and AAV3B cap genes / 細胞株 (発現宿主): Pro10TM / 発現宿主: Homo sapiens (ヒト) / 参照: UniProt: O56139
Has protein modificationY

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実験情報

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実験

実験手法: 電子顕微鏡法
EM実験試料の集合状態: PARTICLE / ３次元再構成法: 単粒子再構成法

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試料調製

構成要素名称: Adeno-associated virus - 3 / タイプ: VIRUS
詳細: For the recombinant production of the VP1KO virion, we used the Pro10TM cell line.
Entity ID: all / 由来: RECOMBINANT
由来(天然)生物種: Adeno-associated virus - 3 (アデノ随伴ウイルス)
株: 3B
由来(組換発現)生物種: Homo sapiens (ヒト)
ウイルスについての詳細中空か: YES / エンベロープを持つか: NO / 単離: SEROTYPE / タイプ: VIRION
天然宿主生物種: Homo sapiens
ウイルス殻直径: 260 nm / 三角数 (T数): 1
緩衝液pH: 7.4
試料包埋: NO / シャドウイング: NO / 染色: NO / 凍結: YES / 詳細: VP1KO 4.23E+13 vg/ml
試料支持グリッドの材料: COPPER / グリッドのサイズ: 300 divisions/in. / グリッドのタイプ: Quantifoil R1.2/1.3
急速凍結装置: FEI VITROBOT MARK III / 凍結剤: ETHANE / 湿度: 85 % / 凍結前の試料温度: 283 K
詳細: Parameters: 2 seconds of blot time, -2 offset value, after 45 seconds of incubation. Quantifoil Cu 300-mesh R1.2/1.3 holey-carbon grids with an extra layer of carbon on top added in-house.

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電子顕微鏡撮影

顕微鏡モデル: TFS GLACIOS
電子銃電子線源: FIELD EMISSION GUN / 加速電圧: 200 kV / 照射モード: FLOOD BEAM
電子レンズモード: BRIGHT FIELD / 倍率（公称値）: 92000 X / 最大 デフォーカス（公称値）: 2500 nm / 最小 デフォーカス（公称値）: 1000 nm
撮影電子線照射量: 50 e/Å2
フィルム・検出器のモデル: FEI FALCON III (4k x 4k)
実像数: 2384

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解析

ソフトウェア名称: PHENIX / バージョン: 1.20.1_4487: / 分類: 精密化
EMソフトウェア
ID名称バージョンカテゴリ
2RELION3.1粒子像選択
5CTFFIND4.1.13CTF補正
8PHENIXモデルフィッティング
10PHENIXモデル精密化
11RELION3.1初期オイラー角割当
12RELION3.1最終オイラー角割当
14RELION3.1３次元再構成
CTF補正タイプ: PHASE FLIPPING AND AMPLITUDE CORRECTION
粒子像の選択選択した粒子像数: 401717
対称性点対称性: I (正20面体型対称)
3次元再構成解像度: 3.1 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / 粒子像の数: 340947 / 対称性のタイプ: POINT
原子モデル構築プロトコル: RIGID BODY FIT / 空間: REAL
原子モデル構築PDB-ID: 3KIC

3kic


Accession code: 3KIC / Source name: PDB / タイプ: experimental model
精密化最高解像度: 3.1 Å
拘束条件
Refine-IDタイプDev ideal数
ELECTRON MICROSCOPYf_bond_d0.00325668
ELECTRON MICROSCOPYf_angle_d0.52935040
ELECTRON MICROSCOPYf_dihedral_angle_d4.6513396
ELECTRON MICROSCOPYf_chiral_restr0.043642
ELECTRON MICROSCOPYf_plane_restr0.0044668

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万見について

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お知らせ

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2022年2月9日: EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

  • EMDBのヘッダファイルのバージョン3が、公式のフォーマットとなりました。
  • これまでは公式だったバージョン1.9は、アーカイブから削除されます。

関連情報:EMDBヘッダ

外部リンク:wwPDBはEMDBデータモデルのバージョン3へ移行します

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2020年8月12日: 新型コロナ情報

新型コロナ情報

URL: https://pdbj.org/emnavi/covid19.php

新ページ: EM Navigatorに新型コロナウイルスの特設ページを開設しました。

関連情報:Covid-19情報 / 2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

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2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

新型コロナウイルスの構造データ

関連情報:万見生物種 / 2020年8月12日: 新型コロナ情報

外部リンク:COVID-19特集ページ - PDBj / 今月の分子2020年2月：コロナウイルスプロテーアーゼ

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2019年1月31日: EMDBのIDの桁数の変更

EMDBのIDの桁数の変更

  • EMDBエントリに付与されているアクセスコード(EMDB-ID)は4桁の数字(例、EMD-1234)でしたが、間もなく枯渇します。これまでの4桁のID番号は4桁のまま変更されませんが、4桁の数字を使い切った後に発行されるIDは5桁以上の数字(例、EMD-12345)になります。5桁のIDは2019年の春頃から発行される見通しです。
  • EM Navigator/万見では、接頭語「EMD-」は省略されています。

関連情報:Q: 「EMD」とは何ですか？ / 万見/EM NavigatorにおけるID/アクセスコードの表記

外部リンク:EMDB Accession Codes are Changing Soon! / PDBjへお問い合わせ

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2017年7月12日: PDB大規模アップデート

PDB大規模アップデート

  • 新バージョンのPDBx/mmCIF辞書形式に基づくデータがリリースされました。
  • 今回の更新はバージョン番号が4から5になる大規模なもので、全エントリデータの書き換えが行われる「Remediation」というアップデートに該当します。
  • このバージョンアップで、電子顕微鏡の実験手法に関する多くの項目の書式が改定されました(例：em_softwareなど)。
  • EM NavigatorとYorodumiでも、この改定に基づいた表示内容になります。

外部リンク:wwPDB Remediation / OneDepデータ基準に準拠した、より強化された内容のモデル構造ファイルが、PDBアーカイブで公開されました。

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万見 (Yorodumi)

幾万の構造データを、幾万の視点から

  • 万見(Yorodumi)は、EMDB/PDB/SASBDBなどの構造データを閲覧するためのページです。
  • EM Navigatorの詳細ページの後継、Omokage検索のフロントエンドも兼ねています。

関連情報:EMDB / PDB / SASBDB / 3つのデータバンクの比較 / 万見検索 / 2016年8月31日: 新しいEM Navigatorと万見 / 万見文献 / Jmol/JSmol / 機能・相同性情報 / 新しいEM Navigatorと万見の変更点

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