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- PDB-7zgr: Polymerase module of yeast CPF in complex with Mpe1, the yPIM of ... -

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基本情報

登録情報
データベース: PDB / ID: 7zgr
タイトルPolymerase module of yeast CPF in complex with Mpe1, the yPIM of Cft2 and the pre-cleaved CYC1 RNA
要素
  • Cleavage factor two protein 2
  • MPE1 isoform 1
  • Polyadenylation factor subunit 2
  • Protein CFT1
  • mRNA 3'-end-processing protein YTH1
  • pre-cleaved CYC1
キーワードRNA BINDING PROTEIN / CPF / 3'-end processing
機能・相同性
機能・相同性情報


Processing of Intronless Pre-mRNAs / termination of RNA polymerase II transcription, poly(A)-coupled / intracellular organelle / mRNA cleavage and polyadenylation specificity factor complex / mRNA 3'-end processing / : / termination of RNA polymerase II transcription / mRNA processing / ubiquitin protein ligase activity / nucleic acid binding ...Processing of Intronless Pre-mRNAs / termination of RNA polymerase II transcription, poly(A)-coupled / intracellular organelle / mRNA cleavage and polyadenylation specificity factor complex / mRNA 3'-end processing / : / termination of RNA polymerase II transcription / mRNA processing / ubiquitin protein ligase activity / nucleic acid binding / mitochondrion / RNA binding / zinc ion binding / nucleus / metal ion binding
類似検索 - 分子機能
E3 ubiquitin-protein ligase RBBP6 family / DWNN domain / DWNN domain / DWNN domain profile. / DWNN / Cleavage and polyadenylation specificity factor 2, C-terminal / CPSF2, metallo-hydrolase domain / Cleavage and polyadenylation factor 2 C-terminal / Cleavage and polyadenylation specificity factor subunit 2 / CPSF complex subunit CPSF4-like ...E3 ubiquitin-protein ligase RBBP6 family / DWNN domain / DWNN domain / DWNN domain profile. / DWNN / Cleavage and polyadenylation specificity factor 2, C-terminal / CPSF2, metallo-hydrolase domain / Cleavage and polyadenylation factor 2 C-terminal / Cleavage and polyadenylation specificity factor subunit 2 / CPSF complex subunit CPSF4-like / RNA-binding, Nab2-type zinc finger / Pre-mRNA 3' end processing protein Pfs2-like / Metallo-beta-lactamase superfamily domain / Beta-Casp domain / Beta-Casp domain / Zinc finger C-x8-C-x5-C-x3-H type (and similar) / Zinc finger, CCCH-type superfamily / zinc finger / Zinc finger, CCCH-type / Zinc finger C3H1-type profile. / Cleavage/polyadenylation specificity factor, A subunit, C-terminal / CPSF A subunit region / Metallo-beta-lactamase / Ribonuclease Z/Hydroxyacylglutathione hydrolase-like / zinc finger / Zinc finger, CCHC-type superfamily / Zinc finger, CCHC-type / Zinc finger CCHC-type profile. / Zinc finger, RING/FYVE/PHD-type / Trp-Asp (WD) repeats profile. / Trp-Asp (WD) repeats circular profile. / WD domain, G-beta repeat / WD40 repeats / WD40 repeat / WD40-repeat-containing domain superfamily / WD40/YVTN repeat-like-containing domain superfamily
類似検索 - ドメイン・相同性
RNA / RNA (> 10) / MPE1 isoform 1 / mRNA 3'-end-processing protein / Polyadenylation factor subunit 2 / Protein CFT1 / Cleavage factor two protein 2
類似検索 - 構成要素
生物種Saccharomyces cerevisiae (パン酵母)
手法電子顕微鏡法 / 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 2.6 Å
データ登録者Rodriguez-Molina, J.B. / Passmore, L.A.
資金援助European Union, 英国, 2件
組織認可番号国
European Research Council (ERC)725685European Union
Medical Research Council (MRC, United Kingdom)MC_U105192715 英国
引用ジャーナル: Mol Cell / 年: 2022
タイトル: Mpe1 senses the binding of pre-mRNA and controls 3' end processing by CPF.
著者: Juan B Rodríguez-Molina / Francis J O'Reilly / Holly Fagarasan / Eleanor Sheekey / Sarah Maslen / J Mark Skehel / Juri Rappsilber / Lori A Passmore /
要旨: Most eukaryotic messenger RNAs (mRNAs) are processed at their 3' end by the cleavage and polyadenylation specificity factor (CPF/CPSF). CPF mediates the endonucleolytic cleavage of the pre-mRNA and ...Most eukaryotic messenger RNAs (mRNAs) are processed at their 3' end by the cleavage and polyadenylation specificity factor (CPF/CPSF). CPF mediates the endonucleolytic cleavage of the pre-mRNA and addition of a polyadenosine (poly(A)) tail, which together define the 3' end of the mature transcript. The activation of CPF is highly regulated to maintain the fidelity of RNA processing. Here, using cryo-EM of yeast CPF, we show that the Mpe1 subunit directly contacts the polyadenylation signal sequence in nascent pre-mRNA. The region of Mpe1 that contacts RNA also promotes the activation of CPF endonuclease activity and controls polyadenylation. The Cft2 subunit of CPF antagonizes the RNA-stabilized configuration of Mpe1. In vivo, the depletion or mutation of Mpe1 leads to widespread defects in transcription termination by RNA polymerase II, resulting in transcription interference on neighboring genes. Together, our data suggest that Mpe1 plays a major role in accurate 3' end processing, activating CPF, and ensuring timely transcription termination.
履歴
登録2022年4月4日登録サイト: PDBE / 処理サイト: PDBE
改定 1.02022年5月25日Provider: repository / タイプ: Initial release
改定 1.12022年6月1日Group: Database references / カテゴリ: citation / citation_author
Item: _citation.country / _citation.journal_abbrev ..._citation.country / _citation.journal_abbrev / _citation.journal_id_ASTM / _citation.journal_id_CSD / _citation.journal_id_ISSN / _citation.pdbx_database_id_DOI / _citation.pdbx_database_id_PubMed / _citation.title / _citation.year / _citation_author.identifier_ORCID
改定 1.22022年7月20日Group: Database references / カテゴリ: citation / Item: _citation.journal_volume / _citation.page_first

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構造の表示

構造ビューア分子:
MolmilJmol/JSmol

ダウンロードとリンク

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集合体

登録構造単位
A: Protein CFT1
B: mRNA 3'-end-processing protein YTH1
C: Cleavage factor two protein 2
D: Polyadenylation factor subunit 2
E: pre-cleaved CYC1
F: MPE1 isoform 1
ヘテロ分子


分子量 (理論値)分子数
合計 (水以外)375,5488
ポリマ－375,4176
非ポリマー1312
水00
1


  • 登録構造と同一
  • 登録者が定義した集合体
  • 根拠: gel filtration
タイプ名称対称操作数
identity operation1_5551

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要素

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タンパク質 , 5種, 5分子 ABCDF

#1: タンパク質 Protein CFT1 / Cleavage factor two protein 1


分子量: 153577.156 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現
由来: (組換発現) Saccharomyces cerevisiae (パン酵母)
株: ATCC 204508 / S288c / 遺伝子: CFT1, YHH1, YDR301W
発現宿主: Spodoptera frugiperda (ツマジロクサヨトウ)
参照: UniProt: Q06632
#2: タンパク質 mRNA 3'-end-processing protein YTH1


分子量: 24594.498 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現
由来: (組換発現) Saccharomyces cerevisiae (パン酵母)
遺伝子: YTH1, GI527_G0006153
発現宿主: Spodoptera frugiperda (ツマジロクサヨトウ)
参照: UniProt: A0A6A5Q2R8
#3: タンパク質 Cleavage factor two protein 2 / 105 kDa protein associated with polyadenylation factor I


分子量: 80993.055 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現
由来: (組換発現) Saccharomyces cerevisiae (パン酵母)
株: ATCC 204508 / S288c / 遺伝子: CFT2, YDH1, YLR115W, L2946
発現宿主: Spodoptera frugiperda (ツマジロクサヨトウ)
参照: UniProt: Q12102
#4: タンパク質 Polyadenylation factor subunit 2


分子量: 53211.117 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現
由来: (組換発現) Saccharomyces cerevisiae (パン酵母)
遺伝子: PFS2, GI527_G0004795
発現宿主: Spodoptera frugiperda (ツマジロクサヨトウ)
参照: UniProt: A0A6A5Q543
#6: タンパク質 MPE1 isoform 1


分子量: 49711.848 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現
由来: (組換発現) Saccharomyces cerevisiae (パン酵母)
遺伝子: MPE1, GI527_G0003582
発現宿主: Spodoptera frugiperda (ツマジロクサヨトウ)
参照: UniProt: A0A6A5PV64

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RNA鎖 / 非ポリマー , 2種, 3分子 E

#5: RNA鎖 pre-cleaved CYC1


分子量: 13329.796 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 合成 / 由来: (合成) Saccharomyces cerevisiae (パン酵母)
#7: 化合物 ChemComp-ZN / ZINC ION


分子量: 65.409 Da / 分子数: 2 / 由来タイプ: 合成 / 式: Zn / タイプ: SUBJECT OF INVESTIGATION

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詳細

研究の焦点であるリガンドがあるかY

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実験情報

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実験

実験手法: 電子顕微鏡法
EM実験試料の集合状態: PARTICLE / ３次元再構成法: 単粒子再構成法

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試料調製

構成要素名称: polymerase module-Mpe1-yPIM-RNA / タイプ: COMPLEX / Entity ID: #1-#6 / 由来: RECOMBINANT
分子量実験値: NO
由来(天然)生物種: Saccharomyces cerevisiae (パン酵母)
由来(組換発現)生物種: Spodoptera frugiperda (ツマジロクサヨトウ)
緩衝液pH: 8 / 詳細: 20 mM HEPES pH 8, 50 mM NaCl, 0.5 mM TCEP
試料包埋: NO / シャドウイング: NO / 染色: NO / 凍結: YES
試料支持グリッドの材料: GOLD / グリッドのサイズ: 300 divisions/in. / グリッドのタイプ: UltrAuFoil R1.2/1.3
急速凍結装置: FEI VITROBOT MARK IV / 凍結剤: ETHANE / 湿度: 100 % / 凍結前の試料温度: 277.15 K

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電子顕微鏡撮影

実験機器
モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company
顕微鏡モデル: FEI TITAN KRIOS
電子銃電子線源: FIELD EMISSION GUN / 加速電圧: 300 kV / 照射モード: FLOOD BEAM
電子レンズモード: BRIGHT FIELD / 倍率（公称値）: 105000 X / 最大 デフォーカス（公称値）: 3100 nm / 最小 デフォーカス（公称値）: 500 nm / Cs: 2.7 mm / C2レンズ絞り径: 50 µm / アライメント法: COMA FREE
試料ホルダ凍結剤: NITROGEN
撮影電子線照射量: 40 e/Å2
フィルム・検出器のモデル: GATAN K3 BIOQUANTUM (6k x 4k)
撮影したグリッド数: 2 / 実像数: 19524
電子光学装置エネルギーフィルタースリット幅: 20 eV

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解析

ソフトウェア名称: PHENIX / バージョン: 1.18.2_3874: / 分類: 精密化
EMソフトウェア
ID名称バージョンカテゴリ
1RELION3.1粒子像選択
2EPU画像取得
4GctfCTF補正
7UCSF Chimeraモデルフィッティング
9RELION3.1初期オイラー角割当
10RELION3.1最終オイラー角割当
11RELION3.1分類
12RELION3.1３次元再構成
13PHENIXモデル精密化
CTF補正タイプ: PHASE FLIPPING AND AMPLITUDE CORRECTION
粒子像の選択選択した粒子像数: 13905256
対称性点対称性: C1 (非対称)
3次元再構成解像度: 2.6 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / 粒子像の数: 846349 / 対称性のタイプ: POINT
原子モデル構築プロトコル: OTHER / 空間: REAL
原子モデル構築
IDPDB-ID 3D fitting-ID
17ZGP

7zgp

1
21ZGQ

1zgq

1
拘束条件
Refine-IDタイプDev ideal数
ELECTRON MICROSCOPYf_bond_d0.00314830
ELECTRON MICROSCOPYf_angle_d0.53720113
ELECTRON MICROSCOPYf_dihedral_angle_d15.5165489
ELECTRON MICROSCOPYf_chiral_restr0.0442273
ELECTRON MICROSCOPYf_plane_restr0.0032561

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万見について

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お知らせ

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2022年2月9日: EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

  • EMDBのヘッダファイルのバージョン3が、公式のフォーマットとなりました。
  • これまでは公式だったバージョン1.9は、アーカイブから削除されます。

関連情報:EMDBヘッダ

外部リンク:wwPDBはEMDBデータモデルのバージョン3へ移行します

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2020年8月12日: 新型コロナ情報

新型コロナ情報

URL: https://pdbjlvh1.pdbj.org/emnavi/covid19.php

新ページ: EM Navigatorに新型コロナウイルスの特設ページを開設しました。

関連情報:Covid-19情報 / 2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

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2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

新型コロナウイルスの構造データ

関連情報:万見生物種 / 2020年8月12日: 新型コロナ情報

外部リンク:COVID-19特集ページ - PDBj / 今月の分子2020年2月：コロナウイルスプロテーアーゼ

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2019年1月31日: EMDBのIDの桁数の変更

EMDBのIDの桁数の変更

  • EMDBエントリに付与されているアクセスコード(EMDB-ID)は4桁の数字(例、EMD-1234)でしたが、間もなく枯渇します。これまでの4桁のID番号は4桁のまま変更されませんが、4桁の数字を使い切った後に発行されるIDは5桁以上の数字(例、EMD-12345)になります。5桁のIDは2019年の春頃から発行される見通しです。
  • EM Navigator/万見では、接頭語「EMD-」は省略されています。

関連情報:Q: 「EMD」とは何ですか？ / 万見/EM NavigatorにおけるID/アクセスコードの表記

外部リンク:EMDB Accession Codes are Changing Soon! / PDBjへお問い合わせ

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2017年7月12日: PDB大規模アップデート

PDB大規模アップデート

  • 新バージョンのPDBx/mmCIF辞書形式に基づくデータがリリースされました。
  • 今回の更新はバージョン番号が4から5になる大規模なもので、全エントリデータの書き換えが行われる「Remediation」というアップデートに該当します。
  • このバージョンアップで、電子顕微鏡の実験手法に関する多くの項目の書式が改定されました(例：em_softwareなど)。
  • EM NavigatorとYorodumiでも、この改定に基づいた表示内容になります。

外部リンク:wwPDB Remediation / OneDepデータ基準に準拠した、より強化された内容のモデル構造ファイルが、PDBアーカイブで公開されました。

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万見 (Yorodumi)

幾万の構造データを、幾万の視点から

  • 万見(Yorodumi)は、EMDB/PDB/SASBDBなどの構造データを閲覧するためのページです。
  • EM Navigatorの詳細ページの後継、Omokage検索のフロントエンドも兼ねています。

関連情報:EMDB / PDB / SASBDB / 3つのデータバンクの比較 / 万見検索 / 2016年8月31日: 新しいEM Navigatorと万見 / 万見文献 / Jmol/JSmol / 機能・相同性情報 / 新しいEM Navigatorと万見の変更点

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