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基本情報
登録情報 | データベース: PDB / ID: 7c97 | ||||||
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タイトル | Cryo-EM structure of an Escherichia coli RNAP-promoter open complex (RPo) with SspA | ||||||
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![]() | TRANSFERASE/DNA / Stringent starvation protein A / RNA polymerase / promoter escape / zinc binding domain / GENE REGULATION / TRANSFERASE-DNA complex | ||||||
機能・相同性 | ![]() glutathione dehydrogenase (ascorbate) activity / L-ascorbic acid metabolic process / sigma factor antagonist complex / RNA polymerase complex / submerged biofilm formation / cellular response to cell envelope stress / cytosolic DNA-directed RNA polymerase complex / regulation of DNA-templated transcription initiation / sigma factor activity / response to starvation ...glutathione dehydrogenase (ascorbate) activity / L-ascorbic acid metabolic process / sigma factor antagonist complex / RNA polymerase complex / submerged biofilm formation / cellular response to cell envelope stress / cytosolic DNA-directed RNA polymerase complex / regulation of DNA-templated transcription initiation / sigma factor activity / response to starvation / bacterial-type flagellum assembly / glutathione transferase / glutathione transferase activity / bacterial-type flagellum-dependent cell motility / nitrate assimilation / glutathione metabolic process / transcription elongation factor complex / regulation of DNA-templated transcription elongation / transcription antitermination / DNA-templated transcription initiation / cell motility / ribonucleoside binding / DNA-directed 5'-3' RNA polymerase activity / DNA-directed RNA polymerase / response to heat / protein-containing complex assembly / intracellular iron ion homeostasis / protein dimerization activity / response to antibiotic / negative regulation of DNA-templated transcription / DNA-templated transcription / positive regulation of DNA-templated transcription / magnesium ion binding / DNA binding / zinc ion binding / membrane / metal ion binding / cytoplasm / cytosol 類似検索 - 分子機能 | ||||||
生物種 | ![]() ![]() | ||||||
手法 | 電子顕微鏡法 / 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 3.68 Å | ||||||
![]() | Lin, W. / Feng, Y. | ||||||
![]() | ![]() タイトル: Structural basis for transcription inhibition by E. coli SspA. 著者: Fulin Wang / Jing Shi / Dingwei He / Bei Tong / Chao Zhang / Aijia Wen / Yu Zhang / Yu Feng / Wei Lin / ![]() 要旨: Stringent starvation protein A (SspA) is an RNA polymerase (RNAP)-associated protein involved in nucleotide metabolism, acid tolerance and virulence of bacteria. Despite extensive biochemical and ...Stringent starvation protein A (SspA) is an RNA polymerase (RNAP)-associated protein involved in nucleotide metabolism, acid tolerance and virulence of bacteria. Despite extensive biochemical and genetic analyses, the precise regulatory role of SspA in transcription is still unknown, in part, because of a lack of structural information for bacterial RNAP in complex with SspA. Here, we report a 3.68 Å cryo-EM structure of an Escherichia coli RNAP-promoter open complex (RPo) with SspA. Unexpectedly, the structure reveals that SspA binds to the E. coli σ70-RNAP holoenzyme as a homodimer, interacting with σ70 region 4 and the zinc binding domain of EcoRNAP β' subunit simultaneously. Results from fluorescent polarization assays indicate the specific interactions between SspA and σ70 region 4 confer its σ selectivity, thereby avoiding its interactions with σs or other alternative σ factors. In addition, results from in vitro transcription assays verify that SspA inhibits transcription probably through suppressing promoter escape. Together, the results here provide a foundation for understanding the unique physiological function of SspA in transcription regulation in bacteria. | ||||||
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構造ビューア | 分子: ![]() ![]() |
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PDB形式 | ![]() | 636.5 KB | 表示 | ![]() |
PDBx/mmJSON形式 | ![]() | ツリー表示 | ![]() | |
その他 | ![]() |
-検証レポート
文書・要旨 | ![]() | 1.1 MB | 表示 | ![]() |
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文書・詳細版 | ![]() | 1.3 MB | 表示 | |
XML形式データ | ![]() | 131.7 KB | 表示 | |
CIF形式データ | ![]() | 197.9 KB | 表示 | |
アーカイブディレクトリ | ![]() ![]() | HTTPS FTP |
-関連構造データ
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リンク
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集合体
登録構造単位 | ![]()
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1 |
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要素
-DNA鎖 , 2種, 2分子 HG
#1: DNA鎖 | 分子量: 19671.666 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 合成 詳細: Nontemplate strand DNA of transcription initiation scaffold(RPo) 由来: (合成) ![]() ![]() |
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#8: DNA鎖 | 分子量: 19159.285 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 合成 詳細: Template strand DNA of transcription initiation scaffold(RPo) 由来: (合成) ![]() ![]() |
-タンパク質 , 2種, 3分子 IJF
#2: タンパク質 | 分子量: 24332.885 Da / 分子数: 2 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) ![]() ![]() ![]() ![]() 参照: UniProt: H4IXP2, UniProt: P0ACA3*PLUS, glutathione transferase #7: タンパク質 | | 分子量: 70352.242 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) ![]() ![]() ![]() ![]() |
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-DNA-directed RNA polymerase subunit ... , 4種, 6分子 KABCDE
#3: タンパク質 | 分子量: 36558.680 Da / 分子数: 3 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) ![]() ![]() ![]() ![]() 参照: UniProt: F4VJT6, UniProt: P0A7Z4*PLUS, DNA-directed RNA polymerase #4: タンパク質 | | 分子量: 150804.922 Da / 分子数: 1 / Mutation: D516V / 由来タイプ: 組換発現 由来: (組換発現) ![]() ![]() 株: K12 遺伝子: rpoB, groN, nitB, rif, ron, stl, stv, tabD, b3987, JW3950 発現宿主: ![]() ![]() #5: タンパク質 | | 分子量: 155366.781 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) ![]() ![]() ![]() ![]() 参照: UniProt: M9GTE2, UniProt: P0A8T7*PLUS, DNA-directed RNA polymerase #6: タンパク質 | | 分子量: 10249.547 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) ![]() ![]() ![]() ![]() 参照: UniProt: T9C803, UniProt: P0A800*PLUS, DNA-directed RNA polymerase |
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-非ポリマー , 2種, 3分子 ![](data/chem/img/MG.gif)
![](data/chem/img/ZN.gif)
![](data/chem/img/ZN.gif)
#9: 化合物 | ChemComp-MG / |
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#10: 化合物 |
-詳細
研究の焦点であるリガンドがあるか | Y |
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-実験情報
-実験
実験 | 手法: 電子顕微鏡法 |
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EM実験 | 試料の集合状態: PARTICLE / 3次元再構成法: 単粒子再構成法 |
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試料調製
構成要素 | 名称: Escherichia coli RNAP-promoter open complex (RPo) with stringent starvation protein A(SspA) タイプ: COMPLEX / Entity ID: #1-#8 / 由来: RECOMBINANT |
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分子量 | 値: 0.55 MDa / 実験値: NO |
由来(天然) | 生物種: ![]() ![]() |
由来(組換発現) | 生物種: ![]() ![]() |
緩衝液 | pH: 7.9 |
試料 | 包埋: NO / シャドウイング: NO / 染色: NO / 凍結: YES |
急速凍結 | 凍結剤: ETHANE |
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電子顕微鏡撮影
実験機器 | ![]() モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company |
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顕微鏡 | モデル: FEI TITAN KRIOS |
電子銃 | 電子線源: ![]() |
電子レンズ | モード: BRIGHT FIELD |
撮影 | 電子線照射量: 59 e/Å2 / 検出モード: COUNTING フィルム・検出器のモデル: GATAN K2 SUMMIT (4k x 4k) |
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解析
EMソフトウェア |
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CTF補正 | タイプ: PHASE FLIPPING AND AMPLITUDE CORRECTION | ||||||||||||
対称性 | 点対称性: C1 (非対称) | ||||||||||||
3次元再構成 | 解像度: 3.68 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / 粒子像の数: 60145 / 対称性のタイプ: POINT |