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-基本情報
登録情報 | データベース: PDB / ID: 6awc | ||||||||||||
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タイトル | Structure of 30S ribosomal subunit and RNA polymerase complex in rotated state | ||||||||||||
要素 |
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キーワード | RIBOSOME / 30S subunit RNA polymerase complex | ||||||||||||
機能・相同性 | 機能・相同性情報 DNA-directed RNA polymerase complex / ribonucleoside binding / DNA-directed 5'-3' RNA polymerase activity / DNA-directed RNA polymerase / ribosomal small subunit biogenesis / small ribosomal subunit rRNA binding / ribosomal small subunit assembly / small ribosomal subunit / cytosolic small ribosomal subunit / tRNA binding ...DNA-directed RNA polymerase complex / ribonucleoside binding / DNA-directed 5'-3' RNA polymerase activity / DNA-directed RNA polymerase / ribosomal small subunit biogenesis / small ribosomal subunit rRNA binding / ribosomal small subunit assembly / small ribosomal subunit / cytosolic small ribosomal subunit / tRNA binding / protein dimerization activity / rRNA binding / ribosome / structural constituent of ribosome / ribonucleoprotein complex / translation / mRNA binding / DNA-templated transcription / magnesium ion binding / DNA binding / RNA binding / zinc ion binding / cytosol / cytoplasm 類似検索 - 分子機能 | ||||||||||||
生物種 | Escherichia coli (大腸菌) | ||||||||||||
手法 | 電子顕微鏡法 / 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 7.9 Å | ||||||||||||
データ登録者 | Demo, G. / Rasouly, A. / Vasilyev, N. / Loveland, A.B. / Diaz-Avalos, R. / Grigorieff, N. / Nudler, E. / Korostelev, A.A. | ||||||||||||
資金援助 | 米国, 3件
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引用 | ジャーナル: Elife / 年: 2017 タイトル: Structure of RNA polymerase bound to ribosomal 30S subunit. 著者: Gabriel Demo / Aviram Rasouly / Nikita Vasilyev / Vladimir Svetlov / Anna B Loveland / Ruben Diaz-Avalos / Nikolaus Grigorieff / Evgeny Nudler / Andrei A Korostelev / 要旨: In bacteria, mRNA transcription and translation are coupled to coordinate optimal gene expression and maintain genome stability. Coupling is thought to involve direct interactions between RNA ...In bacteria, mRNA transcription and translation are coupled to coordinate optimal gene expression and maintain genome stability. Coupling is thought to involve direct interactions between RNA polymerase (RNAP) and the translational machinery. We present cryo-EM structures of RNAP core bound to the small ribosomal 30S subunit. The complex is stable under cell-like ionic conditions, consistent with functional interaction between RNAP and the 30S subunit. The RNA exit tunnel of RNAP aligns with the Shine-Dalgarno-binding site of the 30S subunit. Ribosomal protein S1 forms a wall of the tunnel between RNAP and the 30S subunit, consistent with its role in directing mRNAs onto the ribosome. The nucleic-acid-binding cleft of RNAP samples distinct conformations, suggesting different functional states during transcription-translation coupling. The architecture of the 30S•RNAP complex provides a structural basis for co-localization of the transcriptional and translational machineries, and inform future mechanistic studies of coupled transcription and translation. | ||||||||||||
履歴 |
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-構造の表示
ムービー |
ムービービューア |
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構造ビューア | 分子: MolmilJmol/JSmol |
-ダウンロードとリンク
-ダウンロード
PDBx/mmCIF形式 | 6awc.cif.gz | 1.7 MB | 表示 | PDBx/mmCIF形式 |
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PDB形式 | pdb6awc.ent.gz | 表示 | PDB形式 | |
PDBx/mmJSON形式 | 6awc.json.gz | ツリー表示 | PDBx/mmJSON形式 | |
その他 | その他のダウンロード |
-検証レポート
文書・要旨 | 6awc_validation.pdf.gz | 1.1 MB | 表示 | wwPDB検証レポート |
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文書・詳細版 | 6awc_full_validation.pdf.gz | 1.3 MB | 表示 | |
XML形式データ | 6awc_validation.xml.gz | 183.8 KB | 表示 | |
CIF形式データ | 6awc_validation.cif.gz | 295.6 KB | 表示 | |
アーカイブディレクトリ | https://data.pdbj.org/pub/pdb/validation_reports/aw/6awc ftp://data.pdbj.org/pub/pdb/validation_reports/aw/6awc | HTTPS FTP |
-関連構造データ
-リンク
-集合体
登録構造単位 |
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1 |
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-要素
-RNA鎖 , 1種, 1分子 A
#1: RNA鎖 | 分子量: 498725.406 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 天然 / 由来: (天然) Escherichia coli (大腸菌) |
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-DNA-directed RNA polymerase subunit ... , 4種, 5分子 0102030405
#2: タンパク質 | 分子量: 25339.830 Da / 分子数: 2 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Escherichia coli (大腸菌) / 遺伝子: rpoA, Z4665, ECs4160 / 発現宿主: Escherichia coli (大腸菌) / 参照: UniProt: P0A7Z6, DNA-directed RNA polymerase #3: タンパク質 | | 分子量: 150560.562 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Escherichia coli (大腸菌) / 遺伝子: rpoB, ECS88_4448 / 発現宿主: Escherichia coli (大腸菌) / 参照: UniProt: B7MIX3, DNA-directed RNA polymerase #4: タンパク質 | | 分子量: 151537.594 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Escherichia coli (大腸菌) / 遺伝子: rpoC, Z5561, ECs4911 / 発現宿主: Escherichia coli (大腸菌) / 参照: UniProt: P0A8T8, DNA-directed RNA polymerase #5: タンパク質 | | 分子量: 6552.496 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Escherichia coli (大腸菌) / 遺伝子: rpoZ, ECS88_4064 / 発現宿主: Escherichia coli (大腸菌) / 参照: UniProt: B7MFL0, DNA-directed RNA polymerase |
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+30S ribosomal protein ... , 21種, 21分子 BEFGHIJKLMNOPQRSTUVWX
-実験情報
-実験
実験 | 手法: 電子顕微鏡法 |
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EM実験 | 試料の集合状態: PARTICLE / 3次元再構成法: 単粒子再構成法 |
-試料調製
構成要素 |
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分子量 | 値: 1.3 MDa / 実験値: NO | ||||||||||||||||||||||||
由来(天然) |
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由来(組換発現) | 生物種: Escherichia coli (大腸菌) | ||||||||||||||||||||||||
緩衝液 | pH: 7 詳細: 20 mM Tris-HCl, pH 7.0, 100 mM NH4Cl, 10 mM MgCl2, 0.5 mM EDTA, 6 mM BME | ||||||||||||||||||||||||
試料 | 包埋: NO / シャドウイング: NO / 染色: NO / 凍結: YES / 詳細: 50 nM 30S, 150 nM RNAP | ||||||||||||||||||||||||
試料支持 | グリッドの材料: COPPER / グリッドのサイズ: 400 divisions/in. / グリッドのタイプ: C-flat-1.2/1.3 | ||||||||||||||||||||||||
急速凍結 | 装置: FEI VITROBOT MARK IV / 凍結剤: ETHANE / 湿度: 95 % / 凍結前の試料温度: 283 K 詳細: 2.5 uL of 50 nM 30S and 150 nM RNAP was applied to the grid. After a 30 second incubation, the grid was blotted for 5 seconds at blotting power 8. |
-電子顕微鏡撮影
実験機器 | モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company |
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顕微鏡 | モデル: FEI TITAN KRIOS |
電子銃 | 電子線源: FIELD EMISSION GUN / 加速電圧: 300 kV / 照射モード: FLOOD BEAM |
電子レンズ | モード: BRIGHT FIELD / 倍率(公称値): 25000 X / 最大 デフォーカス(公称値): 3000 nm / 最小 デフォーカス(公称値): 800 nm / Cs: 2.7 mm / アライメント法: COMA FREE |
試料ホルダ | 凍結剤: NITROGEN 試料ホルダーモデル: FEI TITAN KRIOS AUTOGRID HOLDER |
撮影 | 電子線照射量: 40 e/Å2 / 検出モード: SUPER-RESOLUTION フィルム・検出器のモデル: GATAN K2 SUMMIT (4k x 4k) 撮影したグリッド数: 1 / 実像数: 2527 詳細: The average electron dose 40.0 (e-/A2) represents the total dose for one collected movie. |
画像スキャン | 動画フレーム数/画像: 50 / 利用したフレーム数/画像: 1-50 |
-解析
EMソフトウェア |
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CTF補正 | タイプ: PHASE FLIPPING AND AMPLITUDE CORRECTION | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
粒子像の選択 | 選択した粒子像数: 184530 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
対称性 | 点対称性: C1 (非対称) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
3次元再構成 | 解像度: 7.9 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / 粒子像の数: 10090 / クラス平均像の数: 1 / 対称性のタイプ: POINT | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
原子モデル構築 | B value: 500 / プロトコル: OTHER / 空間: REAL / Target criteria: Correlation Coefficient |