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-基本情報
登録情報 | データベース: PDB / ID: 5lcw | ||||||
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タイトル | Cryo-EM structure of the Anaphase-promoting complex/Cyclosome, in complex with the Mitotic checkpoint complex (APC/C-MCC) at 4.2 angstrom resolution | ||||||
要素 |
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キーワード | CELL CYCLE / Complex / Ubiquitin / E3 ligase / Ubiquitin ligase / Cullin / RING / Mitosis / Spindle checkpoint / Degron | ||||||
機能・相同性 | 機能・相同性情報 metaphase/anaphase transition of cell cycle / mitotic spindle assembly checkpoint MAD1-MAD2 complex / metaphase/anaphase transition of meiosis I / Inhibition of the proteolytic activity of APC/C required for the onset of anaphase by mitotic spindle checkpoint components / mitotic checkpoint complex / positive regulation of anaphase-promoting complex-dependent catabolic process / positive regulation of mitotic cell cycle spindle assembly checkpoint / regulation of meiotic nuclear division / establishment of centrosome localization / meiotic sister chromatid cohesion, centromeric ...metaphase/anaphase transition of cell cycle / mitotic spindle assembly checkpoint MAD1-MAD2 complex / metaphase/anaphase transition of meiosis I / Inhibition of the proteolytic activity of APC/C required for the onset of anaphase by mitotic spindle checkpoint components / mitotic checkpoint complex / positive regulation of anaphase-promoting complex-dependent catabolic process / positive regulation of mitotic cell cycle spindle assembly checkpoint / regulation of meiotic nuclear division / establishment of centrosome localization / meiotic sister chromatid cohesion, centromeric / positive regulation of synapse maturation / Conversion from APC/C:Cdc20 to APC/C:Cdh1 in late anaphase / regulation of mitotic cell cycle spindle assembly checkpoint / protein branched polyubiquitination / Inactivation of APC/C via direct inhibition of the APC/C complex / APC/C:Cdc20 mediated degradation of mitotic proteins / Phosphorylation of Emi1 / anaphase-promoting complex / Aberrant regulation of mitotic exit in cancer due to RB1 defects / regulation of meiotic cell cycle / anaphase-promoting complex-dependent catabolic process / metaphase/anaphase transition of mitotic cell cycle / positive regulation of synaptic plasticity / regulation of exit from mitosis / anaphase-promoting complex binding / Phosphorylation of the APC/C / nuclear pore nuclear basket / outer kinetochore / protein localization to chromosome, centromeric region / positive regulation of mitotic metaphase/anaphase transition / positive regulation of ubiquitin protein ligase activity / ubiquitin ligase activator activity / protein K11-linked ubiquitination / enzyme-substrate adaptor activity / positive regulation of dendrite morphogenesis / regulation of mitotic metaphase/anaphase transition / ubiquitin-ubiquitin ligase activity / negative regulation of ubiquitin protein ligase activity / mitotic sister chromatid cohesion / mitotic metaphase chromosome alignment / mitotic spindle assembly checkpoint signaling / establishment of mitotic spindle orientation / Regulation of APC/C activators between G1/S and early anaphase / mitotic sister chromatid segregation / cullin family protein binding / Transcriptional Regulation by VENTX / negative regulation of mitotic cell cycle / mitotic spindle assembly / ubiquitin-like ligase-substrate adaptor activity / positive regulation of axon extension / protein K48-linked ubiquitination / heterochromatin / Amplification of signal from unattached kinetochores via a MAD2 inhibitory signal / Mitotic Prometaphase / EML4 and NUDC in mitotic spindle formation / regulation of mitotic cell cycle / Resolution of Sister Chromatid Cohesion / APC/C:Cdc20 mediated degradation of Cyclin B / APC-Cdc20 mediated degradation of Nek2A / nuclear periphery / Autodegradation of Cdh1 by Cdh1:APC/C / APC/C:Cdc20 mediated degradation of Securin / SCF-beta-TrCP mediated degradation of Emi1 / Assembly of the pre-replicative complex / RHO GTPases Activate Formins / Cdc20:Phospho-APC/C mediated degradation of Cyclin A / brain development / APC/C:Cdh1 mediated degradation of Cdc20 and other APC/C:Cdh1 targeted proteins in late mitosis/early G1 / negative regulation of protein catabolic process / CDK-mediated phosphorylation and removal of Cdc6 / mitotic spindle / kinetochore / spindle pole / spindle / ubiquitin-protein transferase activity / Separation of Sister Chromatids / microtubule cytoskeleton / ubiquitin protein ligase activity / Antigen processing: Ubiquitination & Proteasome degradation / mitotic cell cycle / nervous system development / Senescence-Associated Secretory Phenotype (SASP) / ubiquitin-dependent protein catabolic process / protein phosphatase binding / molecular adaptor activity / cell differentiation / non-specific serine/threonine protein kinase / protein kinase activity / Ub-specific processing proteases / protein ubiquitination / cell division / negative regulation of gene expression / protein serine kinase activity / protein serine/threonine kinase activity / centrosome / ubiquitin protein ligase binding / negative regulation of apoptotic process / nucleolus / apoptotic process / perinuclear region of cytoplasm 類似検索 - 分子機能 | ||||||
生物種 | Homo sapiens (ヒト) | ||||||
手法 | 電子顕微鏡法 / 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 4.2 Å | ||||||
データ登録者 | Alfieri, C. / Chang, L. / Zhang, Z. / Yang, J. / Maslen, S. / Skehel, M. / Barford, D. | ||||||
引用 | ジャーナル: Nature / 年: 2016 タイトル: Molecular basis of APC/C regulation by the spindle assembly checkpoint. 著者: Claudio Alfieri / Leifu Chang / Ziguo Zhang / Jing Yang / Sarah Maslen / Mark Skehel / David Barford / 要旨: In the dividing eukaryotic cell, the spindle assembly checkpoint (SAC) ensures that each daughter cell inherits an identical set of chromosomes. The SAC coordinates the correct attachment of sister ...In the dividing eukaryotic cell, the spindle assembly checkpoint (SAC) ensures that each daughter cell inherits an identical set of chromosomes. The SAC coordinates the correct attachment of sister chromatid kinetochores to the mitotic spindle with activation of the anaphase-promoting complex (APC/C), the E3 ubiquitin ligase responsible for initiating chromosome separation. In response to unattached kinetochores, the SAC generates the mitotic checkpoint complex (MCC), which inhibits the APC/C and delays chromosome segregation. By cryo-electron microscopy, here we determine the near-atomic resolution structure of a human APC/C–MCC complex (APC/C(MCC)). Degron-like sequences of the MCC subunit BubR1 block degron recognition sites on Cdc20, the APC/C coactivator subunit responsible for substrate interactions. BubR1 also obstructs binding of the initiating E2 enzyme UbcH10 to repress APC/C ubiquitination activity. Conformational variability of the complex enables UbcH10 association, and structural analysis shows how the Cdc20 subunit intrinsic to the MCC (Cdc20(MCC)) is ubiquitinated, a process that results in APC/C reactivation when the SAC is silenced. | ||||||
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構造ビューア | 分子: MolmilJmol/JSmol |
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文書・詳細版 | 5lcw_full_validation.pdf.gz | 1.4 MB | 表示 | |
XML形式データ | 5lcw_validation.xml.gz | 253.3 KB | 表示 | |
CIF形式データ | 5lcw_validation.cif.gz | 381.8 KB | 表示 | |
アーカイブディレクトリ | https://data.pdbj.org/pub/pdb/validation_reports/lc/5lcw ftp://data.pdbj.org/pub/pdb/validation_reports/lc/5lcw | HTTPS FTP |
-関連構造データ
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-集合体
登録構造単位 |
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1 |
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非結晶学的対称性 (NCS) | NCSドメイン:
NCSドメイン領域: Component-ID: _ / Refine code: _
NCSアンサンブル:
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-要素
-Anaphase-promoting complex subunit ... , 11種, 13分子 ABDEGWILMNOXY
#1: タンパク質 | 分子量: 216775.516 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Homo sapiens (ヒト) / 遺伝子: ANAPC1, TSG24 / 発現宿主: Trichoplusia ni (イラクサキンウワバ) / 参照: UniProt: Q9H1A4 | ||||||||||||
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#2: タンパク質 | 分子量: 9854.647 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Homo sapiens (ヒト) / 遺伝子: ANAPC11, HSPC214 / 発現宿主: Trichoplusia ni (イラクサキンウワバ) / 参照: UniProt: Q9NYG5 | ||||||||||||
#4: タンパク質 | 分子量: 14286.727 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Homo sapiens (ヒト) / 遺伝子: ANAPC15, C11orf51, HSPC020 / 発現宿主: Trichoplusia ni (イラクサキンウワバ) / 参照: UniProt: P60006 | ||||||||||||
#5: タンパク質 | 分子量: 11677.995 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Homo sapiens (ヒト) / 遺伝子: ANAPC16, C10orf104, CENP-27 / 発現宿主: Trichoplusia ni (イラクサキンウワバ) / 参照: UniProt: Q96DE5 | ||||||||||||
#7: タンパク質 | 分子量: 9793.999 Da / 分子数: 2 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Homo sapiens (ヒト) / 遺伝子: CDC26, ANAPC12, C9orf17 / 発現宿主: Trichoplusia ni (イラクサキンウワバ) / 参照: UniProt: Q8NHZ8 #8: タンパク質 | | 分子量: 92219.227 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Homo sapiens (ヒト) / 遺伝子: ANAPC4, APC4 / 発現宿主: Trichoplusia ni (イラクサキンウワバ) / 参照: UniProt: Q9UJX5 #10: タンパク質 | | 分子量: 21282.143 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Homo sapiens (ヒト) / 遺伝子: ANAPC10, APC10 / 発現宿主: Trichoplusia ni (イラクサキンウワバ) / 参照: UniProt: Q9UM13 #11: タンパク質 | | 分子量: 8528.309 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Homo sapiens (ヒト) / 遺伝子: ANAPC13 / 発現宿主: Trichoplusia ni (イラクサキンウワバ) / 参照: UniProt: Q9BS18 #12: タンパク質 | | 分子量: 93938.977 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Homo sapiens (ヒト) / 遺伝子: ANAPC2, APC2, KIAA1406 / 発現宿主: Trichoplusia ni (イラクサキンウワバ) / 参照: UniProt: Q9UJX6 #13: タンパク質 | | 分子量: 85179.766 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Homo sapiens (ヒト) / 遺伝子: ANAPC5, APC5 / 発現宿主: Trichoplusia ni (イラクサキンウワバ) / 参照: UniProt: Q9UJX4 #17: タンパク質 | 分子量: 66929.367 Da / 分子数: 2 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Homo sapiens (ヒト) / 遺伝子: ANAPC7, APC7 / 発現宿主: Trichoplusia ni (イラクサキンウワバ) / 参照: UniProt: Q9UJX3 |
-Cell division cycle protein ... , 5種, 8分子 CPFHJKQR
#3: タンパク質 | 分子量: 68921.031 Da / 分子数: 2 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Homo sapiens (ヒト) / 遺伝子: CDC23, ANAPC8 / 発現宿主: Trichoplusia ni (イラクサキンウワバ) / 参照: UniProt: Q9UJX2 #6: タンパク質 | 分子量: 91973.125 Da / 分子数: 2 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Homo sapiens (ヒト) / 遺伝子: CDC27, ANAPC3, D0S1430E, D17S978E / 発現宿主: Trichoplusia ni (イラクサキンウワバ) / 参照: UniProt: P30260 #9: タンパク質 | 分子量: 71747.516 Da / 分子数: 2 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Homo sapiens (ヒト) / 遺伝子: CDC16, ANAPC6 / 発現宿主: Trichoplusia ni (イラクサキンウワバ) / 参照: UniProt: Q13042 #14: タンパク質 | | 分子量: 41226.332 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Homo sapiens (ヒト) / 遺伝子: CDC20 / 発現宿主: Trichoplusia ni (イラクサキンウワバ) / 参照: UniProt: Q12834 #15: タンパク質 | | 分子量: 54796.508 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Homo sapiens (ヒト) / 遺伝子: CDC20 / 発現宿主: Trichoplusia ni (イラクサキンウワバ) / 参照: UniProt: Q12834 |
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-タンパク質 , 2種, 2分子 SZ
#16: タンパク質 | 分子量: 39055.797 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Homo sapiens (ヒト) / 遺伝子: BUB1B, BUBR1, MAD3L, SSK1 / 発現宿主: Trichoplusia ni (イラクサキンウワバ) 参照: UniProt: O60566, non-specific serine/threonine protein kinase |
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#18: タンパク質 | 分子量: 23533.883 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Homo sapiens (ヒト) / 遺伝子: MAD2L1, MAD2 / 発現宿主: Trichoplusia ni (イラクサキンウワバ) / 参照: UniProt: Q13257 |
-詳細
Has protein modification | Y |
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-実験情報
-実験
実験 | 手法: 電子顕微鏡法 |
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EM実験 | 試料の集合状態: PARTICLE / 3次元再構成法: 単粒子再構成法 |
-試料調製
構成要素 | 名称: Anaphase-promoting complex/Cyclosome, in complex with the Mitotic checkpoint complex in closed conformation (APC/C-MCC-closed) at 4.2 angstrom resolution タイプ: COMPLEX / Entity ID: #1-#21 / 由来: RECOMBINANT |
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分子量 | 値: 1.6 MDa / 実験値: NO |
由来(天然) | 生物種: Homo sapiens (ヒト) |
由来(組換発現) | 生物種: Trichoplusia ni (イラクサキンウワバ) / プラスミド: MultiBac |
緩衝液 | pH: 8 |
試料 | 包埋: NO / シャドウイング: NO / 染色: NO / 凍結: YES |
急速凍結 | 凍結剤: ETHANE |
-電子顕微鏡撮影
実験機器 | モデル: Tecnai Polara / 画像提供: FEI Company |
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顕微鏡 | モデル: FEI POLARA 300 |
電子銃 | 電子線源: FIELD EMISSION GUN / 加速電圧: 300 kV / 照射モード: FLOOD BEAM |
電子レンズ | モード: BRIGHT FIELD |
撮影 | 電子線照射量: 27 e/Å2 フィルム・検出器のモデル: FEI FALCON II (4k x 4k) |
-解析
ソフトウェア | 名称: REFMAC / バージョン: 5.8.0144 / 分類: 精密化 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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EMソフトウェア | 名称: RELION / バージョン: 1.4 / カテゴリ: 3次元再構成 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
CTF補正 | タイプ: PHASE FLIPPING AND AMPLITUDE CORRECTION | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
3次元再構成 | 解像度: 4.2 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / 粒子像の数: 155263 / 対称性のタイプ: POINT | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
精密化 | 解像度: 4.2→4.2 Å / Cor.coef. Fo:Fc: 0.982 / SU B: 43.678 / SU ML: 0.52 / ESU R: 1.096 立体化学のターゲット値: MAXIMUM LIKELIHOOD WITH PHASES
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溶媒の処理 | イオンプローブ半径: 0.8 Å / 減衰半径: 0.8 Å / VDWプローブ半径: 1.2 Å / 溶媒モデル: MASK | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
原子変位パラメータ | Biso mean: 313.189 Å2
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精密化ステップ | サイクル: 1 / 合計: 72092 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
拘束条件 |
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