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万見
- EMDB-8294: Structure of 2x duplex target DNA-bound Cascade/I-C -

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基本情報

登録情報
データベース: EMDB / ID: EMD-8294
タイトルStructure of 2x duplex target DNA-bound Cascade/I-C
マップデータapo Cascade/I-C
試料
  • 複合体: apo-Cascade/I-C
生物種Desulfovibrio vulgaris (バクテリア)
手法単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 6.7 Å
データ登録者Hochstrasser ML / Taylor DW / Kornfeld JK / Nogales E / Doudna JA
資金援助 米国, 1件
OrganizationGrant number国
National Science Foundation (NSF, United States)1244557 米国
引用ジャーナル: Mol Cell / 年: 2016
タイトル: DNA Targeting by a Minimal CRISPR RNA-Guided Cascade.
著者: Megan L Hochstrasser / David W Taylor / Jack E Kornfeld / Eva Nogales / Jennifer A Doudna /
要旨: Bacteria employ surveillance complexes guided by CRISPR (clustered, regularly interspaced, short palindromic repeats) RNAs (crRNAs) to target foreign nucleic acids for destruction. Although most ...Bacteria employ surveillance complexes guided by CRISPR (clustered, regularly interspaced, short palindromic repeats) RNAs (crRNAs) to target foreign nucleic acids for destruction. Although most type I and type III CRISPR systems require four or more distinct proteins to form multi-subunit surveillance complexes, the type I-C systems use just three proteins to achieve crRNA maturation and double-stranded DNA target recognition. We show that each protein plays multiple functional and structural roles: Cas5c cleaves pre-crRNAs and recruits Cas7 to position the RNA guide for DNA binding and unwinding by Cas8c. Cryoelectron microscopy reconstructions of free and DNA-bound forms of the Cascade/I-C surveillance complex reveal conformational changes that enable R-loop formation with distinct positioning of each DNA strand. This streamlined type I-C system explains how CRISPR pathways can evolve compact structures that retain full functionality as RNA-guided DNA capture platforms.
履歴
登録2016年7月18日-
ヘッダ(付随情報) 公開2016年8月31日-
マップ公開2016年8月31日-
更新2019年12月25日-
現状2019年12月25日処理サイト: RCSB / 状態: 公開

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構造の表示

ムービー
  • 表面図（断面を密度値に従い着色）
  • 表面レベル: 0.082
  • UCSF Chimeraによる作画
  • ダウンロード
  • 表面図（半径に従い着色）
  • 表面レベル: 0.082
  • UCSF Chimeraによる作画
  • ダウンロード
ムービービューア
構造ビューアEMマップ:
SurfViewMolmilJmol/JSmol
添付画像

emd_8294.png

ダウンロードとリンク

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マップ

ファイルダウンロード / ファイル: emd_8294.map.gz / 形式: CCP4 / 大きさ: 15.6 MB / タイプ: IMAGE STORED AS FLOATING POINT NUMBER (4 BYTES)
注釈apo Cascade/I-C
投影像・断面図

画像のコントロール

大きさ
明度
コントラスト
その他
軸Z (Sec.)Y (Row.)X (Col.)
2.04 Å/pix.
x 160 pix.
= 326.4 Å		2.04 Å/pix.
x 160 pix.
= 326.4 Å		2.04 Å/pix.
x 160 pix.
= 326.4 Å

表面

投影像

断面 (1/3)

断面 (1/2)

断面 (2/3)

画像は Spider により作成

ボクセルのサイズX=Y=Z: 2.04 Å
密度

ヒストグラム

ヒストグラム (対数)
表面レベル登録者による: 0.082 / ムービー #1: 0.082
最小 - 最大-0.10696636 - 0.31502187
平均 (標準偏差)-0.0003334375 (±0.012508408)
対称性空間群: 1
詳細

EMDB XML:

マップ形状
Axis orderXYZ
Origin000
サイズ160160160
Spacing160160160
セルA=B=C: 326.4 Å
α=β=γ: 90.0 °

CCP4マップ ヘッダ情報:

modeImage stored as Reals
Å/pix. X/Y/Z2.042.042.04
M x/y/z160160160
origin x/y/z0.0000.0000.000
length x/y/z326.400326.400326.400
α/β/γ90.00090.00090.000
start NX/NY/NZ000
NX/NY/NZ281156
MAP C/R/S123
start NC/NR/NS000
NC/NR/NS160160160
D min/max/mean-0.1070.315-0.000

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添付データ

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試料の構成要素

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全体 : apo-Cascade/I-C

全体名称: apo-Cascade/I-C
要素
  • 複合体: apo-Cascade/I-C

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超分子 #1: apo-Cascade/I-C

超分子名称: apo-Cascade/I-C / タイプ: complex / ID: 1 / 親要素: 0 / 含まれる分子: #1
由来(天然)生物種: Desulfovibrio vulgaris (バクテリア)
組換発現生物種: Escherichia coli (大腸菌) / 組換プラスミド: pHMGWA
分子量理論値: 342 KDa

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実験情報

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構造解析

手法クライオ電子顕微鏡法
解析単粒子再構成法
試料の集合状態particle

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試料調製

濃度0.25 mg/mL
緩衝液pH: 7.5
構成要素:
濃度名称式
20.0 mMHEPES
100.0 mMpotassium chlorideKCl
1.0 mMTCEP
グリッドモデル: Protochip C-flat 4/2 / 材質: COPPER / 支持フィルム - 材質: CARBON / 支持フィルム - トポロジー: CONTINUOUS / 前処理 - タイプ: PLASMA CLEANING
凍結凍結剤: ETHANE / チャンバー内湿度: 100 % / チャンバー内温度: 277 K / 装置: FEI VITROBOT MARK IV
詳細The sample was monodisperse.

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電子顕微鏡法

顕微鏡FEI TITAN
撮影フィルム・検出器のモデル: GATAN K2 SUMMIT (4k x 4k)
検出モード: SUPER-RESOLUTION / 撮影したグリッド数: 1 / 実像数: 170 / 平均露光時間: 18.0 sec. / 平均電子線量: 40.5 e/Å2
電子線加速電圧: 300 kV / 電子線源: FIELD EMISSION GUN
電子光学系照射モード: FLOOD BEAM / 撮影モード: BRIGHT FIELD / 最大 デフォーカス（公称値）: 4.5 µm / 最小 デフォーカス（公称値）: 2.0 µm / 倍率（公称値）: 17000
試料ステージ試料ホルダーモデル: GATAN 626 SINGLE TILT LIQUID NITROGEN CRYO TRANSFER HOLDER
ホルダー冷却材: NITROGEN

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画像解析

粒子像選択選択した数: 57000
CTF補正ソフトウェア - 名称: CTFFIND (ver. 3)
初期モデルモデルのタイプ: OTHER / 詳細: Negative stain reconstruction of sample
最終 再構成解像度のタイプ: BY AUTHOR / 解像度: 6.7 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / ソフトウェア - 名称: RELION (ver. 1.4) / 使用した粒子像数: 28000
初期 角度割当タイプ: PROJECTION MATCHING / ソフトウェア - 名称: EMAN (ver. 2)
最終 角度割当タイプ: PROJECTION MATCHING / ソフトウェア - 名称: EMAN (ver. 2)
最終 3次元分類クラス数: 3 / ソフトウェア - 名称: RELION (ver. 1.4)

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万見について

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お知らせ

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2022年2月9日: EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

  • EMDBのヘッダファイルのバージョン3が、公式のフォーマットとなりました。
  • これまでは公式だったバージョン1.9は、アーカイブから削除されます。

関連情報:EMDBヘッダ

外部リンク:wwPDBはEMDBデータモデルのバージョン3へ移行します

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2020年8月12日: 新型コロナ情報

新型コロナ情報

URL: https://pdbj.org/emnavi/covid19.php

新ページ: EM Navigatorに新型コロナウイルスの特設ページを開設しました。

関連情報:Covid-19情報 / 2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

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2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

新型コロナウイルスの構造データ

関連情報:万見生物種 / 2020年8月12日: 新型コロナ情報

外部リンク:COVID-19特集ページ - PDBj / 今月の分子2020年2月：コロナウイルスプロテーアーゼ

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2019年1月31日: EMDBのIDの桁数の変更

EMDBのIDの桁数の変更

  • EMDBエントリに付与されているアクセスコード(EMDB-ID)は4桁の数字(例、EMD-1234)でしたが、間もなく枯渇します。これまでの4桁のID番号は4桁のまま変更されませんが、4桁の数字を使い切った後に発行されるIDは5桁以上の数字(例、EMD-12345)になります。5桁のIDは2019年の春頃から発行される見通しです。
  • EM Navigator/万見では、接頭語「EMD-」は省略されています。

関連情報:Q: 「EMD」とは何ですか？ / 万見/EM NavigatorにおけるID/アクセスコードの表記

外部リンク:EMDB Accession Codes are Changing Soon! / PDBjへお問い合わせ

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2017年7月12日: PDB大規模アップデート

PDB大規模アップデート

  • 新バージョンのPDBx/mmCIF辞書形式に基づくデータがリリースされました。
  • 今回の更新はバージョン番号が4から5になる大規模なもので、全エントリデータの書き換えが行われる「Remediation」というアップデートに該当します。
  • このバージョンアップで、電子顕微鏡の実験手法に関する多くの項目の書式が改定されました(例：em_softwareなど)。
  • EM NavigatorとYorodumiでも、この改定に基づいた表示内容になります。

外部リンク:wwPDB Remediation / OneDepデータ基準に準拠した、より強化された内容のモデル構造ファイルが、PDBアーカイブで公開されました。

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万見 (Yorodumi)

幾万の構造データを、幾万の視点から

  • 万見(Yorodumi)は、EMDB/PDB/SASBDBなどの構造データを閲覧するためのページです。
  • EM Navigatorの詳細ページの後継、Omokage検索のフロントエンドも兼ねています。

関連情報:EMDB / PDB / SASBDB / 3つのデータバンクの比較 / 万見検索 / 2016年8月31日: 新しいEM Navigatorと万見 / 万見文献 / Jmol/JSmol / 機能・相同性情報 / 新しいEM Navigatorと万見の変更点

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