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基本情報
登録情報 | ![]() | |||||||||
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タイトル | Antibody (1B2) Bound Rifamycin Synthetase Module 1 in the Transacylation Mode | |||||||||
![]() | Antibody (1B2) Bound Rifamycin Synthetase Module 1 in the Transacylation Mode | |||||||||
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![]() | Polyketide Synthase Module / Antibody (Fab) / Transferase-Immune System complex | |||||||||
機能・相同性 | ![]() 6-deoxyerythronolide-B synthase / fatty acid synthase activity / phosphopantetheine binding / 3-oxoacyl-[acyl-carrier-protein] synthase activity / antibiotic biosynthetic process / fatty acid biosynthetic process 類似検索 - 分子機能 | |||||||||
生物種 | ![]() ![]() | |||||||||
手法 | 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 3.96 Å | |||||||||
![]() | Cogan DP / Liu C / West RC / Chen M | |||||||||
資金援助 | ![]()
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![]() | ![]() タイトル: Molecular Basis for Asynchronous Chain Elongation During Rifamycin Antibiotic Biosynthesis. 著者: Chengli Liu / Ryan C West / Muyuan Chen / Whitaker Cohn / George Wang / Aryan M Mandot / Selena Kim / Dillon P Cogan / ![]() 要旨: The rifamycin synthetase (RIFS) from the bacterium is a large (3.5 MDa) multienzyme system that catalyzes over 40 chemical reactions to generate a complex precursor to the antibiotic rifamycin B. It ...The rifamycin synthetase (RIFS) from the bacterium is a large (3.5 MDa) multienzyme system that catalyzes over 40 chemical reactions to generate a complex precursor to the antibiotic rifamycin B. It is considered a hybrid enzymatic assembly line and consists of an N-terminal nonribosomal peptide synthetase loading module followed by a decamodular polyketide synthase (PKS). While the biosynthetic functions are known for each enzymatic domain of RIFS, structural and biochemical analyses of this system from purified components are relatively scarce. Here, we examine the biosynthetic mechanism of RIFS through complementary crosslinking, kinetic, and structural analyses of its first PKS module (M1). Thiol-selective crosslinking of M1 provided a plausible molecular basis for previously observed conformational asymmetry with respect to ketosynthase (KS)-substrate carrier protein (CP) interactions during polyketide chain elongation. Our data suggest that C-terminal dimeric interfaces-which are ubiquitous in bacterial PKSs-force their adjacent CP domains to co-migrate between two equivalent KS active site chambers. Cryogenic electron microscopy analysis of M1 further supported this observation while uncovering its unique architecture. Single-turnover kinetic analysis of M1 indicated that although removal of C-terminal dimeric interfaces supported 2-fold greater KS-CP interactions, it did not increase the partial product occupancy of the homodimeric protein. Our findings cast light on molecular details of natural antibiotic biosynthesis that will aid in the design of artificial megasynth(et)ases with untold product structures and bioactivities. | |||||||||
履歴 |
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構造の表示
添付画像 |
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ダウンロードとリンク
-EMDBアーカイブ
マップデータ | ![]() | 171.6 MB | ![]() | |
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ヘッダ (付随情報) | ![]() ![]() | 27 KB 27 KB | 表示 表示 | ![]() |
画像 | ![]() | 24.5 KB | ||
Filedesc metadata | ![]() | 8 KB | ||
その他 | ![]() ![]() ![]() | 10.7 MB 317.8 MB 317.8 MB | ||
アーカイブディレクトリ | ![]() ![]() | HTTPS FTP |
-検証レポート
文書・要旨 | ![]() | 1.2 MB | 表示 | ![]() |
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文書・詳細版 | ![]() | 1.2 MB | 表示 | |
XML形式データ | ![]() | 17 KB | 表示 | |
CIF形式データ | ![]() | 20.3 KB | 表示 | |
アーカイブディレクトリ | ![]() ![]() | HTTPS FTP |
-関連構造データ
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リンク
EMDBのページ | ![]() ![]() |
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「今月の分子」の関連する項目 |
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マップ
ファイル | ![]() | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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注釈 | Antibody (1B2) Bound Rifamycin Synthetase Module 1 in the Transacylation Mode | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
投影像・断面図 | 画像のコントロール
画像は Spider により作成 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
ボクセルのサイズ | X=Y=Z: 1.1 Å | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
密度 |
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対称性 | 空間群: 1 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
詳細 | EMDB XML:
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-添付データ
-追加マップ: Additional Map
ファイル | emd_71445_additional_1.map | ||||||||||||
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注釈 | Additional Map | ||||||||||||
投影像・断面図 |
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密度ヒストグラム |
-ハーフマップ: Half Map B
ファイル | emd_71445_half_map_1.map | ||||||||||||
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注釈 | Half Map B | ||||||||||||
投影像・断面図 |
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密度ヒストグラム |
-ハーフマップ: Half Map A
ファイル | emd_71445_half_map_2.map | ||||||||||||
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注釈 | Half Map A | ||||||||||||
投影像・断面図 |
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密度ヒストグラム |
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試料の構成要素
-全体 : Two antibody fragments (Fabs) in complex with homodimeric polyket...
全体 | 名称: Two antibody fragments (Fabs) in complex with homodimeric polyketide synthase module 1 of the rifamycin synthetase |
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要素 |
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-超分子 #1: Two antibody fragments (Fabs) in complex with homodimeric polyket...
超分子 | 名称: Two antibody fragments (Fabs) in complex with homodimeric polyketide synthase module 1 of the rifamycin synthetase タイプ: complex / ID: 1 / 親要素: 0 / 含まれる分子: all |
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由来(天然) | 生物種: ![]() |
分子量 | 理論値: 454.49469 KDa |
-分子 #1: 6-deoxyerythronolide-B synthase
分子 | 名称: 6-deoxyerythronolide-B synthase / タイプ: protein_or_peptide / ID: 1 / コピー数: 2 / 光学異性体: LEVO / EC番号: 6-deoxyerythronolide-B synthase |
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由来(天然) | 生物種: ![]() |
分子量 | 理論値: 175.359844 KDa |
組換発現 | 生物種: ![]() ![]() |
配列 | 文字列: MASTDSEKVA EYLRRATLDL RAARQRIREL EGEPIAIVGM ACRLPGGVAS PEDLWRLVAE RVDAVSEFPG DRGWDLDSLI DPDRERAGT SYVGQGGFLH DAGEFDAGFF GISPREAVAM DPQQRLLLET SWEALENAGV DPIALKGTDT GVFSGLMGQG Y GSGAVAPE ...文字列: MASTDSEKVA EYLRRATLDL RAARQRIREL EGEPIAIVGM ACRLPGGVAS PEDLWRLVAE RVDAVSEFPG DRGWDLDSLI DPDRERAGT SYVGQGGFLH DAGEFDAGFF GISPREAVAM DPQQRLLLET SWEALENAGV DPIALKGTDT GVFSGLMGQG Y GSGAVAPE LEGFVTTGVA SSVASGRVSY VLGLEGPAVT VDTACSSSLV AMHLAAQALR QGECSMALAG GVTVMATPGS FV EFSRQRA LAPDGRCKAF AAAADGTGWS EGVGVVVLER LSVARERGHR ILAVLRGSAV NQDGASNGLT APNGLSQQRV IRR ALAAAG LAPSDVDVVE AHGTGTTLGD PIEAQALLAT YGQERKQPLW LGSLKSNIGH AQAAAGVAGV IKMVQALRHE TLPP TLHVD KPTLEVDWSA GAIELLTEAR AWPRNGRPRR AGVSSFGVSG TNAHLILEEA PAEEPVAAPE LPVVPLVVSA RSTES LSGQ AERLASLLEG DVSLTEVAGA LVSRRAVLDE RAVVVAGSRE EAVTGLRALN TAGSGTPGKV VWVFPGQGTQ WAGMGR ELL AESPVFAERI AECAAALAPW IDWSLVDVLR GEGDLGRVDV LQPACFAVMV GLAAVWESVG VRPDAVVGHS QGEIAAA CV SGALSLEDAA KVVALRSQAI AAELSGRGGM ASVALGEDDV VSRLVDGVEV AAVNGPSSVV IAGDAHALDA TLEILSGE G IRVRRVAVDY ASHTRHVEDI RDTLAETLAG ISAQAPAVPF YSTVTSEWVR DAGVLDGGYW YRNLRNQVRF GAAATALLE QGHTVFVEVS AHPVTVQPLS ELTGDAIGTL RREDGGLRRL LASMGELFVR GIDVDWTAMV PAAGWVDLPT YAFEHRHYWL EPAEPASAG DPLLGTVVST PGSDRLTAVA QWSRRAQPWA VDGLVPNAAL VEAAIRLGDL AGTPVVGELV VDAPVVLPRR G SREVQLIV GEPGEQRRRP IEVFSREADE PWTRHAHGTL APAAAAVPEP AAAGDATDVT VAGLRDADRY GIHPALLDAA VR TVVGDDL LPSVWTGVSL LASGATAVTV TPTATGLRLT DPAGQPVLTV ESVRGTPFVA EQGTTDALFR VDWPEIPLPT AET ADFLPY EATSAEATLS ALQAWLADPA ETRLAVVTGD CTEPGAAAIW GLVRSAQSEH PGRIVLADLD DPAVLPAVVA SGEP QVRVR NGVASVPRLT RVTPRQDARP LDPEGTVLIT GGTGTLGALT ARHLVTAHGV RHLVLVSRRG EAPELQEELT ALGAS VAIA ACDVADRAQL EAVLRAIPAE HPLTAVIHTA GVLDDGVVTE LTPDRLATVR RPKVDAARLL DELTREADLA AFVLFS SAA GVLGNPGQAG YAAANAELDA LARQRNSLDL PAVSIAWGYW ATVSGMTEHL GDADLRRNQR IGMSGLPADE GMALLDA AI ATGGTLVAAK FDVAALRATA KAGGPVPPLL RGLAPLPRRA AAKTASLTER LAGLAETEQA AALLDLVRRH AAEVLGHS G AESVHSGRTF KDAGFDSLTA VELRNRLAAA TGLTLSPAMI FDYPKPPALA DHLRAKLFGT EVRGEAPSAL AGLDALEAA LPEVPATERE ELVQRLERML AALRPVAQAA DASGTGANPS GDDLGEAGVD ELLEALGREL DGDGNSSSVD KLAAALEHHH HHH UniProtKB: 6-deoxyerythronolide-B synthase |
-分子 #2: 6-deoxyerythronolide-B synthase
分子 | 名称: 6-deoxyerythronolide-B synthase / タイプ: protein_or_peptide / ID: 2 / コピー数: 1 / 光学異性体: LEVO / EC番号: 6-deoxyerythronolide-B synthase |
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由来(天然) | 生物種: ![]() |
分子量 | 理論値: 175.700172 KDa |
組換発現 | 生物種: ![]() ![]() |
配列 | 文字列: MASTDSEKVA EYLRRATLDL RAARQRIREL EGEPIAIVGM ACRLPGGVAS PEDLWRLVAE RVDAVSEFPG DRGWDLDSLI DPDRERAGT SYVGQGGFLH DAGEFDAGFF GISPREAVAM DPQQRLLLET SWEALENAGV DPIALKGTDT GVFSGLMGQG Y GSGAVAPE ...文字列: MASTDSEKVA EYLRRATLDL RAARQRIREL EGEPIAIVGM ACRLPGGVAS PEDLWRLVAE RVDAVSEFPG DRGWDLDSLI DPDRERAGT SYVGQGGFLH DAGEFDAGFF GISPREAVAM DPQQRLLLET SWEALENAGV DPIALKGTDT GVFSGLMGQG Y GSGAVAPE LEGFVTTGVA SSVASGRVSY VLGLEGPAVT VDTACSSSLV AMHLAAQALR QGECSMALAG GVTVMATPGS FV EFSRQRA LAPDGRCKAF AAAADGTGWS EGVGVVVLER LSVARERGHR ILAVLRGSAV NQDGASNGLT APNGLSQQRV IRR ALAAAG LAPSDVDVVE AHGTGTTLGD PIEAQALLAT YGQERKQPLW LGSLKSNIGH AQAAAGVAGV IKMVQALRHE TLPP TLHVD KPTLEVDWSA GAIELLTEAR AWPRNGRPRR AGVSSFGVSG TNAHLILEEA PAEEPVAAPE LPVVPLVVSA RSTES LSGQ AERLASLLEG DVSLTEVAGA LVSRRAVLDE RAVVVAGSRE EAVTGLRALN TAGSGTPGKV VWVFPGQGTQ WAGMGR ELL AESPVFAERI AECAAALAPW IDWSLVDVLR GEGDLGRVDV LQPACFAVMV GLAAVWESVG VRPDAVVGHS QGEIAAA CV SGALSLEDAA KVVALRSQAI AAELSGRGGM ASVALGEDDV VSRLVDGVEV AAVNGPSSVV IAGDAHALDA TLEILSGE G IRVRRVAVDY ASHTRHVEDI RDTLAETLAG ISAQAPAVPF YSTVTSEWVR DAGVLDGGYW YRNLRNQVRF GAAATALLE QGHTVFVEVS AHPVTVQPLS ELTGDAIGTL RREDGGLRRL LASMGELFVR GIDVDWTAMV PAAGWVDLPT YAFEHRHYWL EPAEPASAG DPLLGTVVST PGSDRLTAVA QWSRRAQPWA VDGLVPNAAL VEAAIRLGDL AGTPVVGELV VDAPVVLPRR G SREVQLIV GEPGEQRRRP IEVFSREADE PWTRHAHGTL APAAAAVPEP AAAGDATDVT VAGLRDADRY GIHPALLDAA VR TVVGDDL LPSVWTGVSL LASGATAVTV TPTATGLRLT DPAGQPVLTV ESVRGTPFVA EQGTTDALFR VDWPEIPLPT AET ADFLPY EATSAEATLS ALQAWLADPA ETRLAVVTGD CTEPGAAAIW GLVRSAQSEH PGRIVLADLD DPAVLPAVVA SGEP QVRVR NGVASVPRLT RVTPRQDARP LDPEGTVLIT GGTGTLGALT ARHLVTAHGV RHLVLVSRRG EAPELQEELT ALGAS VAIA ACDVADRAQL EAVLRAIPAE HPLTAVIHTA GVLDDGVVTE LTPDRLATVR RPKVDAARLL DELTREADLA AFVLFS SAA GVLGNPGQAG YAAANAELDA LARQRNSLDL PAVSIAWGYW ATVSGMTEHL GDADLRRNQR IGMSGLPADE GMALLDA AI ATGGTLVAAK FDVAALRATA KAGGPVPPLL RGLAPLPRRA AAKTASLTER LAGLAETEQA AALLDLVRRH AAEVLGHS G AESVHSGRTF KDAGFD(4HH)LTA VELRNRLAAA TGLTLSPAMI FDYPKPPALA DHLRAKLFGT EVRGEAPSAL AGLDA LEAA LPEVPATERE ELVQRLERML AALRPVAQAA DASGTGANPS GDDLGEAGVD ELLEALGREL DGDGNSSSVD KLAAAL EHH HHHH UniProtKB: 6-deoxyerythronolide-B synthase |
-分子 #3: Antibody Fragment 1B2 Heavy Chain
分子 | 名称: Antibody Fragment 1B2 Heavy Chain / タイプ: protein_or_peptide / ID: 3 / コピー数: 2 / 光学異性体: LEVO |
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由来(天然) | 生物種: ![]() |
分子量 | 理論値: 26.447611 KDa |
組換発現 | 生物種: ![]() ![]() |
配列 | 文字列: MAEVQLVQSG GGLVQPGRSL RLSCTASGFT FGDYAMSWVR QAPGKGLEWV GFIRSKAYGG TTEYAASVKG RFTISRDDSK SIAYLQMNS LKTEDTAVYY CTRGGTLFDY WGQGTLVTVS SASTKGPSVF PLAPSSKSTS GGTAALGCLV KDYFPEPVTV S WNSGALTS ...文字列: MAEVQLVQSG GGLVQPGRSL RLSCTASGFT FGDYAMSWVR QAPGKGLEWV GFIRSKAYGG TTEYAASVKG RFTISRDDSK SIAYLQMNS LKTEDTAVYY CTRGGTLFDY WGQGTLVTVS SASTKGPSVF PLAPSSKSTS GGTAALGCLV KDYFPEPVTV S WNSGALTS GVHTFPAVLQ SSGLYSLSSV VTVPSSSLGT QTYICNVNHK PSNTKVDKKV EPKSCAALVP RGSAHHHHHH AA DYKDDDD KA |
-分子 #4: Antibody Fragment 1B2 Light Chain
分子 | 名称: Antibody Fragment 1B2 Light Chain / タイプ: protein_or_peptide / ID: 4 / コピー数: 2 / 光学異性体: LEVO |
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由来(天然) | 生物種: ![]() |
分子量 | 理論値: 25.715832 KDa |
組換発現 | 生物種: ![]() ![]() |
配列 | 文字列: LFAIPLVVPF YSHSALDVVM TQSPLSLPVT PGEPASISCR SSQSLLHSNG YNYLDWYLQK PGQSPQLLIY LGSNRASGVP DRFSGSGSG TDFTLKISRV EAEDVGVYYC MQSLQTPRLT FGPGTKVDIK RTVAAPSVFI FPPSDEQLKS GTASVVCLLN N FYPRGAKV ...文字列: LFAIPLVVPF YSHSALDVVM TQSPLSLPVT PGEPASISCR SSQSLLHSNG YNYLDWYLQK PGQSPQLLIY LGSNRASGVP DRFSGSGSG TDFTLKISRV EAEDVGVYYC MQSLQTPRLT FGPGTKVDIK RTVAAPSVFI FPPSDEQLKS GTASVVCLLN N FYPRGAKV QWKVDNALQS GNSQESVTEQ DSKDSTYSLS STLTLSKADY EKHKVYACEV THQGLSSPVT KSFNRGEC |
-実験情報
-構造解析
手法 | クライオ電子顕微鏡法 |
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![]() | 単粒子再構成法 |
試料の集合状態 | particle |
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試料調製
濃度 | 10 mg/mL | |||||||||
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緩衝液 | pH: 7.2 構成要素:
詳細: 100 mM citric acid, 10 mM HEPES, pH 7.2 (NaOH) | |||||||||
グリッド | モデル: Quantifoil R2/1 / 材質: COPPER / メッシュ: 300 / 支持フィルム - 材質: CARBON / 支持フィルム - トポロジー: HOLEY / 前処理 - タイプ: GLOW DISCHARGE / 前処理 - 時間: 30 sec. / 前処理 - 雰囲気: AIR / 前処理 - 気圧: 0.036000000000000004 kPa | |||||||||
凍結 | 凍結剤: ETHANE / チャンバー内湿度: 100 % / チャンバー内温度: 277.15 K / 装置: FEI VITROBOT MARK IV |
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電子顕微鏡法
顕微鏡 | TFS KRIOS |
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撮影 | フィルム・検出器のモデル: GATAN K3 BIOQUANTUM (6k x 4k) 撮影したグリッド数: 1 / 実像数: 10005 / 平均露光時間: 5.72 sec. / 平均電子線量: 50.0 e/Å2 |
電子線 | 加速電圧: 300 kV / 電子線源: ![]() |
電子光学系 | 照射モード: FLOOD BEAM / 撮影モード: BRIGHT FIELD / Cs: 2.7 mm / 最大 デフォーカス(公称値): 3.988 µm / 最小 デフォーカス(公称値): 1.188 µm |
試料ステージ | 試料ホルダーモデル: FEI TITAN KRIOS AUTOGRID HOLDER ホルダー冷却材: NITROGEN |
実験機器 | ![]() モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company |
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画像解析
-原子モデル構築 1
初期モデル | Chain - Source name: AlphaFold / Chain - Initial model type: in silico model |
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精密化 | 空間: REAL / プロトコル: RIGID BODY FIT |
得られたモデル | ![]() PDB-9pat: |