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万見
- EMDB-5343: Molecular architecture of the human VP16-Mediator-RNA polymerase ... -

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基本情報

登録情報
データベース: EMDB / ID: EMD-5343
タイトルMolecular architecture of the human VP16-Mediator-RNA polymerase II-TFIIF assembly
マップデータnone
試料
  • 試料: Assembly of VP16-bound human Mediator, RNA polymerase II, and TFIIF
  • タンパク質・ペプチド: core Mediator
  • タンパク質・ペプチド: RNA polymerase II
  • タンパク質・ペプチド: TFIIF
キーワードtranscription / Mediator / RNA polymerase II / TFIIF / activator
機能・相同性
機能・相同性情報


RPB4-RPB7 complex / nuclear-transcribed mRNA catabolic process, deadenylation-dependent decay / RNA Polymerase I Transcription Initiation / Processing of Capped Intron-Containing Pre-mRNA / RNA Polymerase III Transcription Initiation From Type 2 Promoter / RNA Pol II CTD phosphorylation and interaction with CE / Formation of the Early Elongation Complex / mRNA Capping / RNA polymerase II transcribes snRNA genes / TP53 Regulates Transcription of DNA Repair Genes ...RPB4-RPB7 complex / nuclear-transcribed mRNA catabolic process, deadenylation-dependent decay / RNA Polymerase I Transcription Initiation / Processing of Capped Intron-Containing Pre-mRNA / RNA Polymerase III Transcription Initiation From Type 2 Promoter / RNA Pol II CTD phosphorylation and interaction with CE / Formation of the Early Elongation Complex / mRNA Capping / RNA polymerase II transcribes snRNA genes / TP53 Regulates Transcription of DNA Repair Genes / RNA Polymerase II Promoter Escape / RNA Polymerase II Transcription Pre-Initiation And Promoter Opening / RNA Polymerase II Transcription Initiation / RNA Polymerase II Transcription Initiation And Promoter Clearance / termination of RNA polymerase II transcription / RNA Polymerase II Pre-transcription Events / termination of RNA polymerase III transcription / RNA-templated transcription / Formation of TC-NER Pre-Incision Complex / positive regulation of nuclear-transcribed mRNA poly(A) tail shortening / RNA Polymerase I Promoter Escape / transcription initiation at RNA polymerase III promoter / termination of RNA polymerase I transcription / Gap-filling DNA repair synthesis and ligation in TC-NER / transcription initiation at RNA polymerase I promoter / nucleolar large rRNA transcription by RNA polymerase I / Estrogen-dependent gene expression / transcription by RNA polymerase III / maintenance of transcriptional fidelity during transcription elongation by RNA polymerase II / Dual incision in TC-NER / positive regulation of translational initiation / nuclear-transcribed mRNA catabolic process / RNA polymerase I complex / RNA polymerase III complex / transcription elongation by RNA polymerase I / RNA polymerase II, core complex / tRNA transcription by RNA polymerase III / transcription by RNA polymerase I / translesion synthesis / transcription-coupled nucleotide-excision repair / translation initiation factor binding / transcription initiation at RNA polymerase II promoter / DNA-templated transcription initiation / P-body / transcription elongation by RNA polymerase II / mRNA transcription by RNA polymerase II / ribonucleoside binding / DNA-directed RNA polymerase / mRNA processing / cytoplasmic stress granule / DNA-directed RNA polymerase activity / single-stranded DNA binding / ribosome biogenesis / transcription by RNA polymerase II / nucleic acid binding / protein dimerization activity / single-stranded RNA binding / nucleotide binding / mRNA binding / nucleolus / mitochondrion / DNA binding / zinc ion binding / nucleoplasm / metal ion binding / nucleus / cytoplasm
類似検索 - 分子機能
DNA-directed RNA polymerase II subunit Rpb4-like / RNA polymerase Rpb1 C-terminal repeat / RNA polymerase II, heptapeptide repeat, eukaryotic / Eukaryotic RNA polymerase II heptapeptide repeat. / RNA polymerase Rpb1, domain 6 / RNA polymerase Rpb1, domain 6 / RNA polymerase Rpb4/RPC9, core / DNA-directed RNA-polymerase II subunit / RNA polymerase Rpb1, domain 7 / RNA polymerase Rpb1, domain 7 superfamily ...DNA-directed RNA polymerase II subunit Rpb4-like / RNA polymerase Rpb1 C-terminal repeat / RNA polymerase II, heptapeptide repeat, eukaryotic / Eukaryotic RNA polymerase II heptapeptide repeat. / RNA polymerase Rpb1, domain 6 / RNA polymerase Rpb1, domain 6 / RNA polymerase Rpb4/RPC9, core / DNA-directed RNA-polymerase II subunit / RNA polymerase Rpb1, domain 7 / RNA polymerase Rpb1, domain 7 superfamily / RNA polymerase Rpb1, domain 7 / Pol II subunit B9, C-terminal zinc ribbon / Rpb4/RPC9 superfamily / RNA polymerase RBP11 / RNA polymerase subunit Rpb4/RPC9 / RNA polymerase Rpb4 / Zinc finger TFIIS-type signature. / RNA polymerase Rpb7-like , N-terminal / RNA polymerase Rpb7-like, N-terminal domain superfamily / RNA polymerase subunit Rpb7-like / SHS2 domain found in N terminus of Rpb7p/Rpc25p/MJ0397 / RNA polymerase Rpb2, domain 5 / RNA polymerase Rpb2, domain 5 / HRDC-like superfamily / RNA polymerase Rpb2, domain 4 / RNA polymerase Rpb2, domain 4 / DNA-directed RNA polymerase, M/15kDa subunit / RNA polymerases M/15 Kd subunit / RNA polymerase subunit 9 / DNA-directed RNA polymerase M, 15kDa subunit, conserved site / RNA polymerases M / 15 Kd subunits signature. / DNA-directed RNA polymerase subunit/transcription factor S / : / RNA polymerase, Rpb8 / RNA polymerase Rpb8 / RNA polymerase subunit 8 / RNA polymerase, Rpb5, N-terminal / RNA polymerase Rpb5, N-terminal domain superfamily / RNA polymerase Rpb5, N-terminal domain / DNA-directed RNA polymerase, subunit RPB6 / DNA-directed RNA polymerase subunit RPABC5/Rpb10 / RNA polymerases, subunit N, zinc binding site / RNA polymerase subunit RPB10 / RNA polymerases N / 8 kDa subunit / RNA polymerases N / 8 Kd subunits signature. / RNA polymerase, subunit H/Rpb5, conserved site / RNA polymerases H / 23 Kd subunits signature. / DNA-directed RNA polymerase, 30-40kDa subunit, conserved site / DNA-directed RNA polymerase subunit Rpo3/Rpb3/RPAC1 / RNA polymerases D / 30 to 40 Kd subunits signature. / DNA-directed RNA polymerase Rpb11, 13-16kDa subunit, conserved site / DNA-directed RNA polymerase subunit Rpo11 / RNA polymerases L / 13 to 16 Kd subunits signature. / Zinc finger, TFIIS-type / Transcription factor S-II (TFIIS) / Zinc finger TFIIS-type profile. / C2C2 Zinc finger / DNA-directed RNA polymerase, RBP11-like dimerisation domain / RNA polymerase Rpb3/Rpb11 dimerisation domain / RNA polymerase, subunit H/Rpb5 C-terminal / DNA-directed RNA polymerase subunit Rpo5/Rpb5 / RPB5-like RNA polymerase subunit superfamily / RNA polymerase Rpb5, C-terminal domain / Archaeal Rpo6/eukaryotic RPB6 RNA polymerase subunit / DNA-directed RNA polymerase, 14-18kDa subunit, conserved site / RNA polymerases K / 14 to 18 Kd subunits signature. / Ribosomal protein S1-like RNA-binding domain / S1 RNA binding domain / S1 domain / DNA-directed RNA polymerase, subunit beta-prime / RNA polymerase Rpb6 / RNA polymerase Rpb2, domain 2 superfamily / RNA polymerase, subunit omega/Rpo6/RPB6 / RNA polymerase Rpb6 / RNA polymerase Rpb1, domain 3 superfamily / RPB6/omega subunit-like superfamily / RNA polymerase Rpb1, clamp domain superfamily / RNA polymerase Rpb1, domain 3 / RNA polymerase Rpb1, domain 3 / RNA polymerase, beta subunit, protrusion / RNA polymerase beta subunit / RNA polymerase Rpb1, domain 1 / RNA polymerase Rpb1, domain 1 / DNA-directed RNA polymerase, insert domain / DNA-directed RNA polymerase, RpoA/D/Rpb3-type / RNA polymerase Rpb3/RpoA insert domain / RNA polymerase Rpb3/Rpb11 dimerisation domain / RNA polymerases D / RNA polymerase, alpha subunit / RNA polymerase Rpb1, domain 5 / RNA polymerase Rpb1, domain 4 / RNA polymerase Rpb1, domain 2 / RNA polymerase Rpb1, domain 5 / RNA polymerase Rpb1, domain 4 / RNA polymerase Rpb2, domain 2 / RNA polymerase Rpb2, domain 2 / RNA polymerase, N-terminal / RNA polymerase Rpb1, funnel domain superfamily / RNA polymerase I subunit A N-terminus / DNA-directed RNA polymerase, insert domain superfamily
類似検索 - ドメイン・相同性
DNA-directed RNA polymerase II subunit RPB1 / DNA-directed RNA polymerase II subunit RPB2 / DNA-directed RNA polymerase II subunit RPB3 / DNA-directed RNA polymerase II subunit RPB4 / DNA-directed RNA polymerases I, II, and III subunit RPABC1 / DNA-directed RNA polymerases I, II, and III subunit RPABC2 / DNA-directed RNA polymerases I, II, and III subunit RPABC3 / DNA-directed RNA polymerases I, II, and III subunit RPABC5 / DNA-directed RNA polymerase II subunit RPB9 / DNA-directed RNA polymerase II subunit RPB7 / DNA-directed RNA polymerase II subunit RPB11
類似検索 - 構成要素
生物種Homo sapiens (ヒト)
手法単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / ネガティブ染色法 / 解像度: 36.0 Å
データ登録者Bernecky C / Grob P / Ebmeier CC / Nogales E / Taatjes DJ
引用ジャーナル: PLoS Biol / 年: 2011
タイトル: Molecular architecture of the human Mediator-RNA polymerase II-TFIIF assembly.
著者: Carrie Bernecky / Patricia Grob / Christopher C Ebmeier / Eva Nogales / Dylan J Taatjes /
要旨: The macromolecular assembly required to initiate transcription of protein-coding genes, known as the Pre-Initiation Complex (PIC), consists of multiple protein complexes and is approximately 3.5 MDa ...The macromolecular assembly required to initiate transcription of protein-coding genes, known as the Pre-Initiation Complex (PIC), consists of multiple protein complexes and is approximately 3.5 MDa in size. At the heart of this assembly is the Mediator complex, which helps regulate PIC activity and interacts with the RNA polymerase II (pol II) enzyme. The structure of the human Mediator-pol II interface is not well-characterized, whereas attempts to structurally define the Mediator-pol II interaction in yeast have relied on incomplete assemblies of Mediator and/or pol II and have yielded inconsistent interpretations. We have assembled the complete, 1.9 MDa human Mediator-pol II-TFIIF complex from purified components and have characterized its structural organization using cryo-electron microscopy and single-particle reconstruction techniques. The orientation of pol II within this assembly was determined by crystal structure docking and further validated with projection matching experiments, allowing the structural organization of the entire human PIC to be envisioned. Significantly, pol II orientation within the Mediator-pol II-TFIIF assembly can be reconciled with past studies that determined the location of other PIC components relative to pol II itself. Pol II surfaces required for interacting with TFIIB, TFIIE, and promoter DNA (i.e., the pol II cleft) are exposed within the Mediator-pol II-TFIIF structure; RNA exit is unhindered along the RPB4/7 subunits; upstream and downstream DNA is accessible for binding additional factors; and no major structural re-organization is necessary to accommodate the large, multi-subunit TFIIH or TFIID complexes. The data also reveal how pol II binding excludes Mediator-CDK8 subcomplex interactions and provide a structural basis for Mediator-dependent control of PIC assembly and function. Finally, parallel structural analysis of Mediator-pol II complexes lacking TFIIF reveal that TFIIF plays a key role in stabilizing pol II orientation within the assembly.
履歴
登録2011年10月4日-
ヘッダ(付随情報) 公開2011年10月13日-
マップ公開2011年10月13日-
更新2011年10月17日-
現状2011年10月17日処理サイト: RCSB / 状態: 公開

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構造の表示

ムービー
  • 表面図（断面を密度値に従い着色）
  • 表面レベル: 0.0284
  • UCSF Chimeraによる作画
  • ダウンロード
  • 表面図（半径に従い着色）
  • 表面レベル: 0.0284
  • UCSF Chimeraによる作画
  • ダウンロード
  • あてはめたモデルとの重ね合わせ
  • 原子モデル: PDB-3j0k
  • 表面レベル: 0.0284
  • UCSF Chimeraによる作画
  • ダウンロード
  • 単純化した表面モデル + あてはめた原子モデル
  • 原子モデルPDB-3j0k
  • Jmolによる作画
  • ダウンロード
ムービービューア
構造ビューアEMマップ:
SurfViewMolmilJmol/JSmol
添付画像

emd_5343_1.png

ダウンロードとリンク

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マップ

ファイルダウンロード / ファイル: emd_5343.map.gz / 形式: CCP4 / 大きさ: 15.5 MB / タイプ: IMAGE STORED AS FLOATING POINT NUMBER (4 BYTES)
注釈none
投影像・断面図

画像のコントロール

大きさ
明度
コントラスト
その他
軸Z (Sec.)Y (Row.)X (Col.)
4.29 Å/pix.
x 161 pix.
= 690.69 Å		4.29 Å/pix.
x 161 pix.
= 690.69 Å		4.29 Å/pix.
x 161 pix.
= 690.69 Å

表面

投影像

断面 (1/3)

断面 (1/2)

断面 (2/3)

画像は Spider により作成

ボクセルのサイズX=Y=Z: 4.29 Å
密度

ヒストグラム

ヒストグラム (対数)
表面レベル登録者による: 0.0284 / ムービー #1: 0.0284
最小 - 最大-0.00885565 - 0.0734321
平均 (標準偏差)0.000528866 (±0.00409114)
対称性空間群: 1
詳細

EMDB XML:

マップ形状
Axis orderXYZ
Origin000
サイズ161161161
Spacing161161161
セルA=B=C: 690.69 Å
α=β=γ: 90 °

CCP4マップ ヘッダ情報:

modeImage stored as Reals
Å/pix. X/Y/Z4.294.294.29
M x/y/z161161161
origin x/y/z0.0000.0000.000
length x/y/z690.690690.690690.690
α/β/γ90.00090.00090.000
start NX/NY/NZ-62-62-62
NX/NY/NZ125125125
MAP C/R/S123
start NC/NR/NS000
NC/NR/NS161161161
D min/max/mean-0.0090.0730.001

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添付データ

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試料の構成要素

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全体 : Assembly of VP16-bound human Mediator, RNA polymerase II, and TFIIF

全体名称: Assembly of VP16-bound human Mediator, RNA polymerase II, and TFIIF
要素
  • 試料: Assembly of VP16-bound human Mediator, RNA polymerase II, and TFIIF
  • タンパク質・ペプチド: core Mediator
  • タンパク質・ペプチド: RNA polymerase II
  • タンパク質・ペプチド: TFIIF

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超分子 #1000: Assembly of VP16-bound human Mediator, RNA polymerase II, and TFIIF

超分子名称: Assembly of VP16-bound human Mediator, RNA polymerase II, and TFIIF
タイプ: sample / ID: 1000 / 集合状態: one Mediator complex binds one pol II-TFIIF / Number unique components: 3
分子量理論値: 1.9 MDa

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分子 #1: core Mediator

分子名称: core Mediator / タイプ: protein_or_peptide / ID: 1 / Name.synonym: Mediator / 詳細: bound to GST-VP16 (residues 411 - 490) / 集合状態: 26 subunit complex / 組換発現: No / データベース: NCBI
由来(天然)生物種: Homo sapiens (ヒト) / 別称: human / 細胞: HeLa / Organelle: Nucleus
分子量理論値: 1.2 MDa

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分子 #2: RNA polymerase II

分子名称: RNA polymerase II / タイプ: protein_or_peptide / ID: 2 / Name.synonym: pol II / 詳細: unphosphorylated / 集合状態: 12-subunit complex / 組換発現: No / データベース: NCBI
由来(天然)生物種: Homo sapiens (ヒト) / 別称: Human / 細胞: HeLa / Organelle: Nucleus
分子量理論値: 520 KDa

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分子 #3: TFIIF

分子名称: TFIIF / タイプ: protein_or_peptide / ID: 3 / Name.synonym: TFIIF / 詳細: RAP74 and RAP30 expressed separately then combined / 集合状態: Dimer / 組換発現: Yes
由来(天然)生物種: Homo sapiens (ヒト) / 別称: Human
分子量理論値: 10 KDa
組換発現生物種: Escherichia coli (大腸菌)

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実験情報

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構造解析

手法ネガティブ染色法, クライオ電子顕微鏡法
解析単粒子再構成法
試料の集合状態particle

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試料調製

緩衝液pH: 7.9
詳細: 20 mM HEPES, 0.10 mM EDTA, 150 mM KCl, 0.02% NP-40, 35% glycerol
染色タイプ: NEGATIVE
詳細: grids with adsorbed protein washed 3x with buffer containing 5% trehalose, 20 mM HEPES, 100 mM KCl, and 0.10 mM EDTA, then subjected to cryo-negative staining in a saturated solution (1.2M) ...詳細: grids with adsorbed protein washed 3x with buffer containing 5% trehalose, 20 mM HEPES, 100 mM KCl, and 0.10 mM EDTA, then subjected to cryo-negative staining in a saturated solution (1.2M) of ammonium molybdate (pH 7.5)
グリッド詳細: thin carbon-coated holey carbon 400 mesh copper grid
凍結凍結剤: ETHANE / チャンバー内温度: 90 K / 装置: OTHER
手法: blot for 2 seconds, dry for 3 seconds before plunging

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電子顕微鏡法

顕微鏡FEI TECNAI F20
撮影カテゴリ: FILM / フィルム・検出器のモデル: KODAK SO-163 FILM / デジタル化 - スキャナー: OTHER / デジタル化 - サンプリング間隔: 12.9 µm / 実像数: 106 / 平均電子線量: 15 e/Å2 / Od range: 1 / ビット/ピクセル: 16
電子線加速電圧: 200 kV / 電子線源: FIELD EMISSION GUN
電子光学系照射モード: FLOOD BEAM / 撮影モード: BRIGHT FIELD / Cs: 2.0 mm / 最大 デフォーカス（公称値）: 4.5 µm / 最小 デフォーカス（公称値）: 1.0 µm / 倍率（公称値）: 29000
試料ステージ試料ホルダー: side entry / 試料ホルダーモデル: GATAN LIQUID NITROGEN
実験機器
モデル: Tecnai F20 / 画像提供: FEI Company

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画像解析

詳細The particles were selected interactively at the computer terminal.
CTF補正詳細: each micrograph
最終 再構成アルゴリズム: OTHER / 解像度のタイプ: BY AUTHOR / 解像度: 36.0 Å / 解像度の算出法: FSC 0.5 CUT-OFF / ソフトウェア - 名称: Spider / 使用した粒子像数: 3146

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原子モデル構築 1

初期モデルPDB ID:

1y1v

ソフトウェア名称: Situs
詳細Protocol: rigid body. the TFIIS chain S was removed before fitting
精密化空間: REAL / プロトコル: RIGID BODY FIT
当てはまり具合の基準: contour-based Laplacian correlation
得られたモデル

PDB-3j0k:
Orientation of RNA polymerase II within the human VP16-Mediator-pol II-TFIIF assembly

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万見について

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お知らせ

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2022年2月9日: EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

  • EMDBのヘッダファイルのバージョン3が、公式のフォーマットとなりました。
  • これまでは公式だったバージョン1.9は、アーカイブから削除されます。

関連情報:EMDBヘッダ

外部リンク:wwPDBはEMDBデータモデルのバージョン3へ移行します

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2020年8月12日: 新型コロナ情報

新型コロナ情報

URL: https://pdbj.org/emnavi/covid19.php

新ページ: EM Navigatorに新型コロナウイルスの特設ページを開設しました。

関連情報:Covid-19情報 / 2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

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2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

新型コロナウイルスの構造データ

関連情報:万見生物種 / 2020年8月12日: 新型コロナ情報

外部リンク:COVID-19特集ページ - PDBj / 今月の分子2020年2月：コロナウイルスプロテーアーゼ

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2019年1月31日: EMDBのIDの桁数の変更

EMDBのIDの桁数の変更

  • EMDBエントリに付与されているアクセスコード(EMDB-ID)は4桁の数字(例、EMD-1234)でしたが、間もなく枯渇します。これまでの4桁のID番号は4桁のまま変更されませんが、4桁の数字を使い切った後に発行されるIDは5桁以上の数字(例、EMD-12345)になります。5桁のIDは2019年の春頃から発行される見通しです。
  • EM Navigator/万見では、接頭語「EMD-」は省略されています。

関連情報:Q: 「EMD」とは何ですか？ / 万見/EM NavigatorにおけるID/アクセスコードの表記

外部リンク:EMDB Accession Codes are Changing Soon! / PDBjへお問い合わせ

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2017年7月12日: PDB大規模アップデート

PDB大規模アップデート

  • 新バージョンのPDBx/mmCIF辞書形式に基づくデータがリリースされました。
  • 今回の更新はバージョン番号が4から5になる大規模なもので、全エントリデータの書き換えが行われる「Remediation」というアップデートに該当します。
  • このバージョンアップで、電子顕微鏡の実験手法に関する多くの項目の書式が改定されました(例：em_softwareなど)。
  • EM NavigatorとYorodumiでも、この改定に基づいた表示内容になります。

外部リンク:wwPDB Remediation / OneDepデータ基準に準拠した、より強化された内容のモデル構造ファイルが、PDBアーカイブで公開されました。

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万見 (Yorodumi)

幾万の構造データを、幾万の視点から

  • 万見(Yorodumi)は、EMDB/PDB/SASBDBなどの構造データを閲覧するためのページです。
  • EM Navigatorの詳細ページの後継、Omokage検索のフロントエンドも兼ねています。

関連情報:EMDB / PDB / SASBDB / 3つのデータバンクの比較 / 万見検索 / 2016年8月31日: 新しいEM Navigatorと万見 / 万見文献 / Jmol/JSmol / 機能・相同性情報 / 新しいEM Navigatorと万見の変更点

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