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- EMDB-47432: Local refined map of the asymmetric unit of the CpaF closed struc... -

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基本情報

登録情報
データベース: EMDB / ID: EMD-47432
タイトルLocal refined map of the asymmetric unit of the CpaF closed structure without nucleotides (Apo dataset)
マップデータ
試料
  • 複合体: Closed state of CpaF without nucleotides
    • タンパク質・ペプチド: CpaF
キーワードATPase / MOTOR PROTEIN
機能・相同性: / Type II/IV secretion system protein / Type II/IV secretion system protein / ATP hydrolysis activity / P-loop containing nucleoside triphosphate hydrolase / CpaF
機能・相同性情報
生物種Caulobacter vibrioides (バクテリア)
手法単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 4.0 Å
データ登録者Yen IY / Howell PL
資金援助 カナダ, 1件
OrganizationGrant number国
Canadian Institutes of Health Research (CIHR)PJT-169053 カナダ
引用ジャーナル: Nat Commun / 年: 2025
タイトル: Conformational changes in the motor ATPase CpaF facilitate a rotary mechanism of Tad pilus assembly.
著者: Ian Y Yen / Gregory B Whitfield / John L Rubinstein / Lori L Burrows / Yves V Brun / P Lynne Howell /
要旨: The type IV pilus family uses PilT/VirB11-like ATPases to rapidly assemble and disassemble pilin subunits. Among these, the tight adherence (Tad) pilus performs both functions using a single ...The type IV pilus family uses PilT/VirB11-like ATPases to rapidly assemble and disassemble pilin subunits. Among these, the tight adherence (Tad) pilus performs both functions using a single bifunctional ATPase, CpaF. Here, we determine three conformationally distinct structures of CpaF hexamers with varying nucleotide occupancies by cryo-electron microscopy. Analysis of these structures suggest ATP binding and hydrolysis expand and rotate the hexamer pore clockwise while subsequent ADP release contracts the ATPase. Truncation of the intrinsically disordered region of CpaF in Caulobacter crescentus equally reduces pilus extension and retraction events observed using fluorescence microscopy, but does not reduce ATPase activity. AlphaFold3 modeling suggests that CpaF and other motors of the type IV filament superfamily employ conserved secondary structural features to engage their respective platform proteins. From these data, we propose that CpaF uses a clockwise, rotary mechanism of catalysis to assemble a right-handed, helical Tad pilus, a process broadly applicable to other single motor systems.
履歴
登録2024年10月21日-
ヘッダ(付随情報) 公開2025年4月23日-
マップ公開2025年4月23日-
更新2025年4月30日-
現状2025年4月30日処理サイト: RCSB / 状態: 公開

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構造の表示

添付画像

emd_47432.png

ダウンロードとリンク

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マップ

ファイルダウンロード / ファイル: emd_47432.map.gz / 形式: CCP4 / 大きさ: 91.1 MB / タイプ: IMAGE STORED AS FLOATING POINT NUMBER (4 BYTES)
投影像・断面図

画像のコントロール

大きさ
明度
コントラスト
その他
軸Z (Sec.)Y (Row.)X (Col.)
1.03 Å/pix.
x 288 pix.
= 296.64 Å		1.03 Å/pix.
x 288 pix.
= 296.64 Å		1.03 Å/pix.
x 288 pix.
= 296.64 Å

表面

投影像

断面 (1/3)

断面 (1/2)

断面 (2/3)

画像は Spider により作成

ボクセルのサイズX=Y=Z: 1.03 Å
密度

ヒストグラム

ヒストグラム (対数)
表面レベル登録者による: 0.0343
最小 - 最大-0.07494761 - 0.14921062
平均 (標準偏差)-0.000009410426 (±0.003781215)
対称性空間群: 1
詳細

EMDB XML:

マップ形状
Axis orderXYZ
Origin000
サイズ288288288
Spacing288288288
セルA=B=C: 296.63998 Å
α=β=γ: 90.0 °

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添付データ

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マスク #1

ファイルemd_47432_msk_1.map
投影像・断面図
軸ZYX

投影像

断面 (1/2)
密度ヒストグラム

ヒストグラム

ヒストグラム (対数)

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ハーフマップ: #1

ファイルemd_47432_half_map_1.map
投影像・断面図
軸ZYX

投影像

断面 (1/2)
密度ヒストグラム

ヒストグラム

ヒストグラム (対数)

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ハーフマップ: #2

ファイルemd_47432_half_map_2.map
投影像・断面図
軸ZYX

投影像

断面 (1/2)
密度ヒストグラム

ヒストグラム

ヒストグラム (対数)

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試料の構成要素

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全体 : Closed state of CpaF without nucleotides

全体名称: Closed state of CpaF without nucleotides
要素
  • 複合体: Closed state of CpaF without nucleotides
    • タンパク質・ペプチド: CpaF

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超分子 #1: Closed state of CpaF without nucleotides

超分子名称: Closed state of CpaF without nucleotides / タイプ: complex / ID: 1 / 親要素: 0 / 含まれる分子: all
詳細: Three-helix bundles and N-terminal domains of the asymmetric unit
由来(天然)生物種: Caulobacter vibrioides (バクテリア) / 株: NA1000
分子量理論値: 53.6 kDa/nm

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分子 #1: CpaF

分子名称: CpaF / タイプ: protein_or_peptide / ID: 1 / 光学異性体: LEVO
由来(天然)生物種: Caulobacter vibrioides (バクテリア) / 株: NA1000
組換発現生物種: Escherichia coli (大腸菌)
配列文字列:
DYYHATKTTI FNALLNTIDL SQLAQLDLKQ AGEEIRDIVA ELVAIKNVSM SVAEQEHLVQ DIINDVLGYG PLEPLLARDD IADIMVNGAH RVFIEVGGKV QLTNVRFRDN LQLMNICQRI VSQVGRRVDE SSPICDARLP DGSRVNVIAP PLALDGPTLT IR

UniProtKB: CpaF

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実験情報

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構造解析

手法クライオ電子顕微鏡法
解析単粒子再構成法
試料の集合状態particle

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試料調製

濃度5 mg/mL
緩衝液pH: 8
グリッドモデル: Homemade / 材質: COPPER/RHODIUM / メッシュ: 400 / 支持フィルム - 材質: GOLD / 支持フィルム - トポロジー: HOLEY / 支持フィルム - Film thickness: 360 / 前処理 - タイプ: GLOW DISCHARGE / 前処理 - 時間: 120 sec. / 前処理 - 雰囲気: AIR
凍結凍結剤: ETHANE / チャンバー内湿度: 95 % / チャンバー内温度: 277 K / 装置: LEICA EM GP
詳細CHAPS detergent at a final concentration of 0.05% (w/v) was added to the buffer prior to vitrification

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電子顕微鏡法

顕微鏡TFS KRIOS
撮影フィルム・検出器のモデル: TFS FALCON 4i (4k x 4k)
撮影したグリッド数: 1 / 実像数: 15217 / 平均電子線量: 36.7 e/Å2
詳細: 9227 movies are from one data collection and 5990 movies are from another data collection
電子線加速電圧: 300 kV / 電子線源: FIELD EMISSION GUN
電子光学系照射モード: FLOOD BEAM / 撮影モード: BRIGHT FIELD / Cs: 2.7 mm / 最大 デフォーカス（公称値）: 2.0 µm / 最小 デフォーカス（公称値）: 1.0 µm / 倍率（公称値）: 75000
試料ステージ試料ホルダーモデル: FEI TITAN KRIOS AUTOGRID HOLDER
ホルダー冷却材: NITROGEN
実験機器
モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company

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画像解析

粒子像選択選択した数: 2794604 / 詳細: Combined from both datasets
初期モデルモデルのタイプ: NONE
最終 再構成解像度のタイプ: BY AUTHOR / 解像度: 4.0 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / ソフトウェア - 名称: cryoSPARC (ver. 4.2.2) / 詳細: Particles are C2-symmetry expanded / 使用した粒子像数: 169272
初期 角度割当タイプ: MAXIMUM LIKELIHOOD / ソフトウェア - 名称: cryoSPARC (ver. 4.2.2)
最終 角度割当タイプ: MAXIMUM LIKELIHOOD / ソフトウェア - 名称: cryoSPARC (ver. 4.2.2)
FSC曲線 (解像度の算出)

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万見について

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お知らせ

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2022年2月9日: EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

  • EMDBのヘッダファイルのバージョン3が、公式のフォーマットとなりました。
  • これまでは公式だったバージョン1.9は、アーカイブから削除されます。

関連情報:EMDBヘッダ

外部リンク:wwPDBはEMDBデータモデルのバージョン3へ移行します

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2020年8月12日: 新型コロナ情報

新型コロナ情報

URL: https://pdbj.org/emnavi/covid19.php

新ページ: EM Navigatorに新型コロナウイルスの特設ページを開設しました。

関連情報:Covid-19情報 / 2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

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2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

新型コロナウイルスの構造データ

関連情報:万見生物種 / 2020年8月12日: 新型コロナ情報

外部リンク:COVID-19特集ページ - PDBj / 今月の分子2020年2月：コロナウイルスプロテーアーゼ

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2019年1月31日: EMDBのIDの桁数の変更

EMDBのIDの桁数の変更

  • EMDBエントリに付与されているアクセスコード(EMDB-ID)は4桁の数字(例、EMD-1234)でしたが、間もなく枯渇します。これまでの4桁のID番号は4桁のまま変更されませんが、4桁の数字を使い切った後に発行されるIDは5桁以上の数字(例、EMD-12345)になります。5桁のIDは2019年の春頃から発行される見通しです。
  • EM Navigator/万見では、接頭語「EMD-」は省略されています。

関連情報:Q: 「EMD」とは何ですか？ / 万見/EM NavigatorにおけるID/アクセスコードの表記

外部リンク:EMDB Accession Codes are Changing Soon! / PDBjへお問い合わせ

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2017年7月12日: PDB大規模アップデート

PDB大規模アップデート

  • 新バージョンのPDBx/mmCIF辞書形式に基づくデータがリリースされました。
  • 今回の更新はバージョン番号が4から5になる大規模なもので、全エントリデータの書き換えが行われる「Remediation」というアップデートに該当します。
  • このバージョンアップで、電子顕微鏡の実験手法に関する多くの項目の書式が改定されました(例：em_softwareなど)。
  • EM NavigatorとYorodumiでも、この改定に基づいた表示内容になります。

外部リンク:wwPDB Remediation / OneDepデータ基準に準拠した、より強化された内容のモデル構造ファイルが、PDBアーカイブで公開されました。

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万見 (Yorodumi)

幾万の構造データを、幾万の視点から

  • 万見(Yorodumi)は、EMDB/PDB/SASBDBなどの構造データを閲覧するためのページです。
  • EM Navigatorの詳細ページの後継、Omokage検索のフロントエンドも兼ねています。

関連情報:EMDB / PDB / SASBDB / 3つのデータバンクの比較 / 万見検索 / 2016年8月31日: 新しいEM Navigatorと万見 / 万見文献 / Jmol/JSmol / 機能・相同性情報 / 新しいEM Navigatorと万見の変更点

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