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基本情報
登録情報 | データベース: EMDB / ID: EMD-4104 | |||||||||
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タイトル | Negative stain reconstruction of the ROD(1-1250):Zwilch:ZW10 | |||||||||
![]() | Negative stain 3D reconstruction of ROD1-1250:Zwilch:ZW10 complex | |||||||||
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手法 | 単粒子再構成法 / ネガティブ染色法 / 解像度: 26.0 Å | |||||||||
![]() | Mosalaganti S | |||||||||
![]() | ![]() タイトル: Structure of the RZZ complex and molecular basis of its interaction with Spindly. 著者: Shyamal Mosalaganti / Jenny Keller / Anika Altenfeld / Michael Winzker / Pascaline Rombaut / Michael Saur / Arsen Petrovic / Annemarie Wehenkel / Sabine Wohlgemuth / Franziska Müller / ...著者: Shyamal Mosalaganti / Jenny Keller / Anika Altenfeld / Michael Winzker / Pascaline Rombaut / Michael Saur / Arsen Petrovic / Annemarie Wehenkel / Sabine Wohlgemuth / Franziska Müller / Stefano Maffini / Tanja Bange / Franz Herzog / Herbert Waldmann / Stefan Raunser / Andrea Musacchio / ![]() 要旨: Kinetochores are macromolecular assemblies that connect chromosomes to spindle microtubules (MTs) during mitosis. The metazoan-specific ≈800-kD ROD-Zwilch-ZW10 (RZZ) complex builds a fibrous corona ...Kinetochores are macromolecular assemblies that connect chromosomes to spindle microtubules (MTs) during mitosis. The metazoan-specific ≈800-kD ROD-Zwilch-ZW10 (RZZ) complex builds a fibrous corona that assembles on mitotic kinetochores before MT attachment to promote chromosome alignment and robust spindle assembly checkpoint signaling. In this study, we combine biochemical reconstitutions, single-particle electron cryomicroscopy, cross-linking mass spectrometry, and structural modeling to build a complete model of human RZZ. We find that RZZ is structurally related to self-assembling cytosolic coat scaffolds that mediate membrane cargo trafficking, including Clathrin, Sec13-Sec31, and αβ'ε-COP. We show that Spindly, a dynein adaptor, is related to BicD2 and binds RZZ directly in a farnesylation-dependent but membrane-independent manner. Through a targeted chemical biology approach, we identify ROD as the Spindly farnesyl receptor. Our results suggest that RZZ is dynein's cargo at human kinetochores. | |||||||||
履歴 |
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構造の表示
ムービー |
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構造ビューア | EMマップ: ![]() ![]() ![]() |
添付画像 |
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ダウンロードとリンク
-EMDBアーカイブ
マップデータ | ![]() | 7.5 MB | ![]() | |
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ヘッダ (付随情報) | ![]() ![]() | 11.9 KB 11.9 KB | 表示 表示 | ![]() |
画像 | ![]() | 8.9 KB | ||
アーカイブディレクトリ | ![]() ![]() | HTTPS FTP |
-検証レポート
文書・要旨 | ![]() | 179.7 KB | 表示 | ![]() |
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文書・詳細版 | ![]() | 178.8 KB | 表示 | |
XML形式データ | ![]() | 5.5 KB | 表示 | |
アーカイブディレクトリ | ![]() ![]() | HTTPS FTP |
-関連構造データ
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リンク
EMDBのページ | ![]() ![]() |
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マップ
ファイル | ![]() | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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注釈 | Negative stain 3D reconstruction of ROD1-1250:Zwilch:ZW10 complex | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
投影像・断面図 | 画像のコントロール
画像は Spider により作成 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
ボクセルのサイズ | X=Y=Z: 4.64 Å | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
密度 |
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対称性 | 空間群: 1 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
詳細 | EMDB XML:
CCP4マップ ヘッダ情報:
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-添付データ
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試料の構成要素
-全体 : Heterotrimeric complex of Zw10, Zwilch and ROD with a C-terminal ...
全体 | 名称: Heterotrimeric complex of Zw10, Zwilch and ROD with a C-terminal truncation of 759 amino acids |
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要素 |
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-超分子 #1: Heterotrimeric complex of Zw10, Zwilch and ROD with a C-terminal ...
超分子 | 名称: Heterotrimeric complex of Zw10, Zwilch and ROD with a C-terminal truncation of 759 amino acids タイプ: complex / ID: 1 / 親要素: 0 / 含まれる分子: all |
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分子量 | 実験値: 710 KDa |
-分子 #1: ROD(1-1250)
分子 | 名称: ROD(1-1250) / タイプ: protein_or_peptide / ID: 1 / 光学異性体: LEVO |
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配列 | 文字列: MWNDIELLTN DDTGSGYLSV GSRKEHGTAL YQVDLLVKIS SEKASLNPKI QACSLSDGFI IVADQSVIL LDSICRSLQL HLVFDTEVDV VGLCQEGKFL LVGERSGNLH LIHVTSKQTL L TNAFVQKA NDENRRTYQN LVIEKDGSNE GTYYMLLLTY SGFFCITNLQ ...文字列: MWNDIELLTN DDTGSGYLSV GSRKEHGTAL YQVDLLVKIS SEKASLNPKI QACSLSDGFI IVADQSVIL LDSICRSLQL HLVFDTEVDV VGLCQEGKFL LVGERSGNLH LIHVTSKQTL L TNAFVQKA NDENRRTYQN LVIEKDGSNE GTYYMLLLTY SGFFCITNLQ LLKIQQAIEN VD FSTAKKL QGQIKSSFIS TENYHTLGCL SLVAGDLASE VPVIIGGTGN CAFSKWEPDS SKK GMTVKN LIDAEIIKGA KKFQLIDNLL FVLDTDNVLS LWDIYTLTPV WNWPSLHVEE FLLT TEADS PSSVTWQGIT NLKLIALTAS ANKKMKNLMV YSLPTMEILY SLEVSSVSSL VQTGI STDT IYLLEGVCKN DPKLSEDSVS VLVLRCLTEA LPENRLSRLL HKHRFAEAES FAIQFG LDV ELVYKVKSNH ILEKLALSSV DASEQTEWQQ LVDDAKENLH KIQDDEFVVN YCLKAQW IT YETTQEMLNY AKTRLLKKED KTALIYSDGL KEVLRAHAKL TTFYGAFGPE KFSGSSWI E FLNNEDDLKD IFLQLKEGNL VCAQYLWLRH RANFESRFDV KMLESLLNSM SASVSLQKL CPWFKNDVIP FVRRTVPEGQ IILAKWLEQA ARNLELTDKA NWPENGLQLA EIFFTAEKTD ELGLASSWH WISLKDYQNT EEVCQLRTLV NNLRELITLH RKYNCKLALS DFEKENTTTI V FRMFDKVL APELIPSILE KFIRVYMREH DLQEEELLLL YIEDLLNRCS SKSTSLFETA WE AKAMAVI ACLSDTDLIF DAVLKIMYAA VVPWSAAVEQ LVKQHLEMDH PKVKLLQESY KLM EMKKLL RGYGIREVNL LNKEIMRVVR YILKQDVPSS LEDALKVAQA FMLSDDEIYS LRII DLIDR EQGEDCLLLL KSLPPAEAEK TAERVIIWAR LALQEEPDHS KEGKAWRMSV AKTSV DILK ILCDIQKDNL QKKDECEEML KLFKEVASLQ ENFEVFLSFE DYSNSSLVAD LREQHI KAH EVAQAKHKPG STPEPIAAEV RSPSMESKLH RQALALQMSK QELEAELTLR ALKDGNI KT ALKKCSDLFK YHCNADTGKL LFLTCQKLCQ MLADNVPVTV PVGLNLPSMI HDLASQAA T ICSPDFLLDA LELCKHTLMA VELSRQCQMD DCGILMKASF GTHKDPYEEW SYSDFFSED GIVLESQMVL PVIYELISSL VPLAESKRYP LESTSLPYCS LNEGDGLVLP |
-分子 #2: Zw10
分子 | 名称: Zw10 / タイプ: protein_or_peptide / ID: 2 / 光学異性体: LEVO |
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配列 | 文字列: MASFVTEVLA HSGRLEKEDL GTRISRLTRR VEEIKGEVCN MISKKYSEFL PSMQSAQGLI TQVDKLSED IDLLKSRIES EVRRDLHVST GEFTDLKQQL ERDSVVLSLL KQLQEFSTAI E EYNCALTE KKYVTGAQRL EEAQKCLKLL KSRKCFDLKI LKSLSMELTI ...文字列: MASFVTEVLA HSGRLEKEDL GTRISRLTRR VEEIKGEVCN MISKKYSEFL PSMQSAQGLI TQVDKLSED IDLLKSRIES EVRRDLHVST GEFTDLKQQL ERDSVVLSLL KQLQEFSTAI E EYNCALTE KKYVTGAQRL EEAQKCLKLL KSRKCFDLKI LKSLSMELTI QKQNILYHLG EE WQKLIVW KFPPSKDTSS LESYLQTELH LYTEQSHKEE KTPMPPISSV LLAFSVLGEL HSK LKSFGQ MLLKYILRPL ASCPSLHAVI ESQPNIVIIR FESIMTNLEY PSPSEVFTKI RLVL EVLQK QLLDLPLDTD LENEKTSTVP LAEMLGDMIW EDLSECLIKN CLVYSIPTNS SKLQQ YEEI IQSTEEFENA LKEMRFLKGD TTDLLKYARN INSHFANKKC QDVIVAARNL MTSEIH NTV KIIPDSKINV PELPTPDEDN KLEVQKVSNT QYHEVMNLEP ENTLDQHSFS LPTCRIS ES VKKLMELAYQ TLLEATTSSD QCAVQLFYSV RNIFHLFHDV VPTYHKENLQ KLPQLAAI H HNNCMYIAHH LLTLGHQFRL RLAPILCDGT ATFVDLVPGF RRLGTECFLA QMRAQKGEL LERLSSARNF SNMDDEENYS AASKAVRQVL HQLKRLGIVW QDVLPVNIYC KAMGTLLNTA ISEVIGKIT ALEDISTEDG DRLYSLCKTV MDEGPQVFAP LSEESKNKKY QEEVPVYVPK W MPFKELMM MLQASLQEIG DRWADGKGPL AAAFSSSEVK ALIRALFQNT ERRAAALAKI K |
-分子 #3: Zwilch
分子 | 名称: Zwilch / タイプ: protein_or_peptide / ID: 3 / 光学異性体: LEVO |
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配列 | 文字列: MWERLNCAAE DFYSRLLQKF NEEKKGIRKD PFLYEADVQV QLISKGQPNP LKNILNENDI VFIVEKVPL EKEETSHIEE LQSEETAISD FSTGENVGPL ALPVGKARQL IGLYTMAHNP N MTHLKINL PVTALPPLWV RCDSSDPEGT CWLGAELITT NNSITGIVLY ...文字列: MWERLNCAAE DFYSRLLQKF NEEKKGIRKD PFLYEADVQV QLISKGQPNP LKNILNENDI VFIVEKVPL EKEETSHIEE LQSEETAISD FSTGENVGPL ALPVGKARQL IGLYTMAHNP N MTHLKINL PVTALPPLWV RCDSSDPEGT CWLGAELITT NNSITGIVLY VVSCKADKNY SV NLENLKN LHKKRHHLST VTSKGFAQYE LFKSSALDDT ITASQTAIAL DISWSPVDEI LQI PPLSST ATLNIKVESG EPRGPLNHLY RELKFLLVLA DGLRTGVTEW LEPLEAKSAV ELVQ EFLND LNKLDGFGDS TKKDTEVETL KHDTAAVDRS VKRLFKVRSD LDFAEQLWCK MSSSV ISYQ DLVKCFTLII QSLQRGDIQP WLHSGSNSLL SKLIHQSYHG TMDTVSLSGT IPVQML LEI GLDKLKKDYI SFFIGQELAS LNHLEYFIAP SVDIQEQVYR VQKLHHILEI LVSCMPF IK SQHELLFSLT QICIKYYKQN PLDEQHIFQL PVRPTAVKNL YQSEKPQKWR VEIYSGQK K IKTVWQLSDS SPIDHLNFHK PDFSELTLNG SLEERIFFTN MVTCSQVHFK |
-実験情報
-構造解析
手法 | ネガティブ染色法 |
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![]() | 単粒子再構成法 |
試料の集合状態 | particle |
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試料調製
緩衝液 | pH: 8.5 |
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染色 | タイプ: NEGATIVE / 材質: Uranyl Formate |
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電子顕微鏡法
顕微鏡 | JEOL 1200 |
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撮影 | フィルム・検出器のモデル: TVIPS TEMCAM-F416 (4k x 4k) 平均電子線量: 19.0 e/Å2 |
電子線 | 加速電圧: 120 kV / 電子線源: LAB6 |
電子光学系 | 照射モード: SPOT SCAN / 撮影モード: BRIGHT FIELD |
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画像解析
最終 再構成 | 想定した対称性 - 点群: C1 (非対称) / 解像度のタイプ: BY AUTHOR / 解像度: 26.0 Å / 解像度の算出法: FSC 0.5 CUT-OFF / 使用した粒子像数: 3424 |
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初期 角度割当 | タイプ: PROJECTION MATCHING |
最終 角度割当 | タイプ: PROJECTION MATCHING |