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-基本情報
登録情報 | データベース: EMDB / ID: EMD-31305 | |||||||||
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タイトル | The cryo-EM structure of A. thaliana Pol IV-RDR2 backtracked complex | |||||||||
マップデータ | ||||||||||
試料 |
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キーワード | DNA-directed RNA polymerase IV / RNA- dependent RNA polymerase 2 / RNA-directed DNA methylation pathway / TRANSCRIPTION | |||||||||
機能・相同性 | 機能・相同性情報 stomatal complex patterning / siRNA-mediated long-distance post-transcriptional gene silencing / RNA polymerase IV complex / RNA polymerase V complex / transposable element silencing by siRNA-mediated heterochromatin formation / gene silencing by siRNA-directed DNA methylation / stomatal complex development / siRNA transcription / DNA/RNA hybrid binding / regulatory ncRNA-mediated post-transcriptional gene silencing ...stomatal complex patterning / siRNA-mediated long-distance post-transcriptional gene silencing / RNA polymerase IV complex / RNA polymerase V complex / transposable element silencing by siRNA-mediated heterochromatin formation / gene silencing by siRNA-directed DNA methylation / stomatal complex development / siRNA transcription / DNA/RNA hybrid binding / regulatory ncRNA-mediated post-transcriptional gene silencing / siRNA processing / regulatory ncRNA-mediated gene silencing / RNA polymerase complex / RNA polymerase II activity / regulation of immune response / defense response to fungus / RNA polymerase II, core complex / heterochromatin / ribonucleoside binding / DNA-directed 5'-3' RNA polymerase activity / DNA-directed RNA polymerase / transcription by RNA polymerase II / nucleic acid binding / single-stranded RNA binding / protein dimerization activity / RNA-directed RNA polymerase / RNA-dependent RNA polymerase activity / DNA-templated transcription / nucleolus / DNA binding / zinc ion binding / nucleoplasm / nucleus / metal ion binding / cytoplasm 類似検索 - 分子機能 | |||||||||
生物種 | Arabidopsis thaliana (シロイヌナズナ) / synthetic construct (人工物) | |||||||||
手法 | 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 3.16 Å | |||||||||
データ登録者 | Fang CL / Wu XX | |||||||||
資金援助 | 中国, 1件
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引用 | ジャーナル: Science / 年: 2021 タイトル: Pol IV and RDR2: A two-RNA-polymerase machine that produces double-stranded RNA. 著者: Kun Huang / Xiao-Xian Wu / Cheng-Li Fang / Zhou-Geng Xu / Hong-Wei Zhang / Jian Gao / Chuan-Miao Zhou / Lin-Lin You / Zhan-Xi Gu / Wen-Hui Mu / Yu Feng / Jia-Wei Wang / Yu Zhang / 要旨: DNA methylation affects gene expression and maintains genome integrity. The DNA-dependent RNA polymerase IV (Pol IV), together with the RNA-dependent RNA polymerase RDR2, produces double-stranded ...DNA methylation affects gene expression and maintains genome integrity. The DNA-dependent RNA polymerase IV (Pol IV), together with the RNA-dependent RNA polymerase RDR2, produces double-stranded small interfering RNA precursors essential for establishing and maintaining DNA methylation in plants. We determined the cryo–electron microscopy structures of the Pol IV–RDR2 holoenzyme and the backtracked transcription elongation complex. These structures reveal that Pol IV and RDR2 form a complex with their active sites connected by an interpolymerase channel, through which the Pol IV–generated transcript is handed over to the RDR2 active site after being backtracked, where it is used as the template for double-stranded RNA (dsRNA) synthesis. Our results describe a ‘backtracking-triggered RNA channeling’ mechanism underlying dsRNA synthesis and also shed light on the evolutionary trajectory of eukaryotic RNA polymerases. | |||||||||
履歴 |
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-構造の表示
ムービー |
ムービービューア |
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構造ビューア | EMマップ: SurfViewMolmilJmol/JSmol |
添付画像 |
-ダウンロードとリンク
-EMDBアーカイブ
マップデータ | emd_31305.map.gz | 9.8 MB | EMDBマップデータ形式 | |
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ヘッダ (付随情報) | emd-31305-v30.xml emd-31305.xml | 35.5 KB 35.5 KB | 表示 表示 | EMDBヘッダ |
FSC (解像度算出) | emd_31305_fsc.xml | 10 KB | 表示 | FSCデータファイル |
画像 | emd_31305.png | 113.8 KB | ||
Filedesc metadata | emd-31305.cif.gz | 9.9 KB | ||
その他 | emd_31305_additional_1.map.gz emd_31305_half_map_1.map.gz emd_31305_half_map_2.map.gz | 65.3 MB 65.5 MB 65.5 MB | ||
アーカイブディレクトリ | http://ftp.pdbj.org/pub/emdb/structures/EMD-31305 ftp://ftp.pdbj.org/pub/emdb/structures/EMD-31305 | HTTPS FTP |
-検証レポート
文書・要旨 | emd_31305_validation.pdf.gz | 896.5 KB | 表示 | EMDB検証レポート |
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文書・詳細版 | emd_31305_full_validation.pdf.gz | 896.1 KB | 表示 | |
XML形式データ | emd_31305_validation.xml.gz | 17 KB | 表示 | |
CIF形式データ | emd_31305_validation.cif.gz | 22.5 KB | 表示 | |
アーカイブディレクトリ | https://ftp.pdbj.org/pub/emdb/validation_reports/EMD-31305 ftp://ftp.pdbj.org/pub/emdb/validation_reports/EMD-31305 | HTTPS FTP |
-関連構造データ
-リンク
EMDBのページ | EMDB (EBI/PDBe) / EMDataResource |
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「今月の分子」の関連する項目 |
-マップ
ファイル | ダウンロード / ファイル: emd_31305.map.gz / 形式: CCP4 / 大きさ: 83.7 MB / タイプ: IMAGE STORED AS FLOATING POINT NUMBER (4 BYTES) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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投影像・断面図 | 画像のコントロール
画像は Spider により作成 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
ボクセルのサイズ | X=Y=Z: 1.06 Å | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
密度 |
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対称性 | 空間群: 1 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
詳細 | EMDB XML:
CCP4マップ ヘッダ情報:
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-添付データ
-追加マップ: #1
ファイル | emd_31305_additional_1.map | ||||||||||||
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投影像・断面図 |
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密度ヒストグラム |
-ハーフマップ: #2
ファイル | emd_31305_half_map_1.map | ||||||||||||
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投影像・断面図 |
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密度ヒストグラム |
-ハーフマップ: #1
ファイル | emd_31305_half_map_2.map | ||||||||||||
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投影像・断面図 |
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密度ヒストグラム |
-試料の構成要素
+全体 : A. thaliana Pol IV-RDR2 backtracked complex
+超分子 #1: A. thaliana Pol IV-RDR2 backtracked complex
+分子 #1: DNA-directed RNA polymerase IV subunit 1
+分子 #2: DNA-directed RNA polymerases IV and V subunit 2
+分子 #3: DNA-directed RNA polymerases II, IV and V subunit 3
+分子 #4: DNA-directed RNA polymerases II and IV subunit 5A
+分子 #5: DNA-directed RNA polymerases II, IV and V subunit 6A
+分子 #6: DNA-directed RNA polymerases II, IV and V subunit 8B
+分子 #7: DNA-directed RNA polymerases II, IV and V subunit 9A
+分子 #8: DNA-directed RNA polymerases II, IV and V subunit 10
+分子 #9: DNA-directed RNA polymerases II, IV and V subunit 11
+分子 #10: DNA-directed RNA polymerases II, IV and V subunit 12
+分子 #11: RNA-dependent RNA polymerase 2
+分子 #12: DNA (5'-D(*CP*TP*GP*TP*GP*CP*TP*TP*AP*TP*CP*GP*GP*TP*AP*GP*AP*GP*...
+分子 #14: DNA (33-MER)
+分子 #13: RNA (39-MER)
+分子 #15: RNA (5'-R(*CP*CP*GP*A)-3')
+分子 #16: ZINC ION
+分子 #17: MAGNESIUM ION
-実験情報
-構造解析
手法 | クライオ電子顕微鏡法 |
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解析 | 単粒子再構成法 |
試料の集合状態 | particle |
-試料調製
濃度 | 1.1 mg/mL | |||||||||||||||
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緩衝液 | pH: 7.5 構成要素:
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グリッド | モデル: C-flat-1.2/1.3 / 材質: COPPER / メッシュ: 400 / 支持フィルム - 材質: CARBON / 支持フィルム - トポロジー: HOLEY / 支持フィルム - Film thickness: 120 / 前処理 - タイプ: GLOW DISCHARGE / 前処理 - 時間: 120 sec. / 前処理 - 雰囲気: OTHER | |||||||||||||||
凍結 | 凍結剤: ETHANE / チャンバー内湿度: 95 % / チャンバー内温度: 282.65 K / 装置: FEI VITROBOT MARK III |
-電子顕微鏡法
顕微鏡 | FEI TITAN KRIOS |
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撮影 | フィルム・検出器のモデル: GATAN K2 SUMMIT (4k x 4k) 検出モード: SUPER-RESOLUTION / デジタル化 - 画像ごとのフレーム数: 1-32 / 平均電子線量: 1.95 e/Å2 |
電子線 | 加速電圧: 300 kV / 電子線源: FIELD EMISSION GUN |
電子光学系 | 照射モード: FLOOD BEAM / 撮影モード: BRIGHT FIELD / 最大 デフォーカス(公称値): 2.2 µm / 最小 デフォーカス(公称値): 1.2 µm |
実験機器 | モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company |