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-基本情報
登録情報 | データベース: EMDB / ID: EMD-30307 | |||||||||
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タイトル | Cryo-EM structure of an Escherichia coli RNAP-promoter open complex (RPo) with SspA | |||||||||
マップデータ | ||||||||||
試料 |
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キーワード | Stringent starvation protein A / RNA polymerase / promoter escape / zinc binding domain / GENE REGULATION / TRANSFERASE-DNA complex | |||||||||
機能・相同性 | 機能・相同性情報 sigma factor antagonist complex / response to stress / RNA polymerase complex / submerged biofilm formation / response to starvation / cellular response to cell envelope stress / bacterial-type RNA polymerase core enzyme binding / cytosolic DNA-directed RNA polymerase complex / regulation of DNA-templated transcription initiation / sigma factor activity ...sigma factor antagonist complex / response to stress / RNA polymerase complex / submerged biofilm formation / response to starvation / cellular response to cell envelope stress / bacterial-type RNA polymerase core enzyme binding / cytosolic DNA-directed RNA polymerase complex / regulation of DNA-templated transcription initiation / sigma factor activity / bacterial-type flagellum assembly / glutathione transferase / glutathione transferase activity / bacterial-type flagellum-dependent cell motility / nitrate assimilation / glutathione metabolic process / transcription elongation factor complex / regulation of DNA-templated transcription elongation / transcription antitermination / DNA-templated transcription initiation / cell motility / ribonucleoside binding / DNA-directed 5'-3' RNA polymerase activity / DNA-directed RNA polymerase / response to heat / protein-containing complex assembly / intracellular iron ion homeostasis / protein dimerization activity / response to antibiotic / negative regulation of DNA-templated transcription / DNA-templated transcription / positive regulation of DNA-templated transcription / magnesium ion binding / DNA binding / zinc ion binding / membrane / metal ion binding / cytosol / cytoplasm 類似検索 - 分子機能 | |||||||||
生物種 | Escherichia coli (大腸菌) / Escherichia coli (strain K12) (大腸菌) | |||||||||
手法 | 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 3.68 Å | |||||||||
データ登録者 | Lin W / Feng Y | |||||||||
引用 | ジャーナル: Nucleic Acids Res / 年: 2020 タイトル: Structural basis for transcription inhibition by E. coli SspA. 著者: Fulin Wang / Jing Shi / Dingwei He / Bei Tong / Chao Zhang / Aijia Wen / Yu Zhang / Yu Feng / Wei Lin / 要旨: Stringent starvation protein A (SspA) is an RNA polymerase (RNAP)-associated protein involved in nucleotide metabolism, acid tolerance and virulence of bacteria. Despite extensive biochemical and ...Stringent starvation protein A (SspA) is an RNA polymerase (RNAP)-associated protein involved in nucleotide metabolism, acid tolerance and virulence of bacteria. Despite extensive biochemical and genetic analyses, the precise regulatory role of SspA in transcription is still unknown, in part, because of a lack of structural information for bacterial RNAP in complex with SspA. Here, we report a 3.68 Å cryo-EM structure of an Escherichia coli RNAP-promoter open complex (RPo) with SspA. Unexpectedly, the structure reveals that SspA binds to the E. coli σ70-RNAP holoenzyme as a homodimer, interacting with σ70 region 4 and the zinc binding domain of EcoRNAP β' subunit simultaneously. Results from fluorescent polarization assays indicate the specific interactions between SspA and σ70 region 4 confer its σ selectivity, thereby avoiding its interactions with σs or other alternative σ factors. In addition, results from in vitro transcription assays verify that SspA inhibits transcription probably through suppressing promoter escape. Together, the results here provide a foundation for understanding the unique physiological function of SspA in transcription regulation in bacteria. | |||||||||
履歴 |
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-構造の表示
ムービー |
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構造ビューア | EMマップ: SurfViewMolmilJmol/JSmol |
添付画像 |
-ダウンロードとリンク
-EMDBアーカイブ
マップデータ | emd_30307.map.gz | 28.5 MB | EMDBマップデータ形式 | |
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ヘッダ (付随情報) | emd-30307-v30.xml emd-30307.xml | 20.8 KB 20.8 KB | 表示 表示 | EMDBヘッダ |
画像 | emd_30307.png | 123.6 KB | ||
Filedesc metadata | emd-30307.cif.gz | 8.4 KB | ||
アーカイブディレクトリ | http://ftp.pdbj.org/pub/emdb/structures/EMD-30307 ftp://ftp.pdbj.org/pub/emdb/structures/EMD-30307 | HTTPS FTP |
-検証レポート
文書・要旨 | emd_30307_validation.pdf.gz | 598.9 KB | 表示 | EMDB検証レポート |
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文書・詳細版 | emd_30307_full_validation.pdf.gz | 598.5 KB | 表示 | |
XML形式データ | emd_30307_validation.xml.gz | 5.6 KB | 表示 | |
CIF形式データ | emd_30307_validation.cif.gz | 6.4 KB | 表示 | |
アーカイブディレクトリ | https://ftp.pdbj.org/pub/emdb/validation_reports/EMD-30307 ftp://ftp.pdbj.org/pub/emdb/validation_reports/EMD-30307 | HTTPS FTP |
-関連構造データ
-リンク
EMDBのページ | EMDB (EBI/PDBe) / EMDataResource |
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「今月の分子」の関連する項目 |
-マップ
ファイル | ダウンロード / ファイル: emd_30307.map.gz / 形式: CCP4 / 大きさ: 30.5 MB / タイプ: IMAGE STORED AS FLOATING POINT NUMBER (4 BYTES) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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投影像・断面図 | 画像のコントロール
画像は Spider により作成 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
ボクセルのサイズ | X=Y=Z: 1.307 Å | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
密度 |
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対称性 | 空間群: 1 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
詳細 | EMDB XML:
CCP4マップ ヘッダ情報:
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-添付データ
-試料の構成要素
+全体 : Escherichia coli RNAP-promoter open complex (RPo) with stringent ...
+超分子 #1: Escherichia coli RNAP-promoter open complex (RPo) with stringent ...
+分子 #1: DNA (63-mer)
+分子 #8: DNA (63-mer)
+分子 #2: Stringent starvation protein A
+分子 #3: DNA-directed RNA polymerase subunit alpha
+分子 #4: DNA-directed RNA polymerase subunit beta
+分子 #5: DNA-directed RNA polymerase subunit beta'
+分子 #6: DNA-directed RNA polymerase subunit omega
+分子 #7: RNA polymerase sigma factor RpoD
+分子 #9: MAGNESIUM ION
+分子 #10: ZINC ION
-実験情報
-構造解析
手法 | クライオ電子顕微鏡法 |
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解析 | 単粒子再構成法 |
試料の集合状態 | particle |
-試料調製
緩衝液 | pH: 7.9 |
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凍結 | 凍結剤: ETHANE |
-電子顕微鏡法
顕微鏡 | FEI TITAN KRIOS |
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撮影 | フィルム・検出器のモデル: GATAN K2 SUMMIT (4k x 4k) 検出モード: COUNTING / 平均電子線量: 59.0 e/Å2 |
電子線 | 加速電圧: 300 kV / 電子線源: FIELD EMISSION GUN |
電子光学系 | 照射モード: FLOOD BEAM / 撮影モード: BRIGHT FIELD |
実験機器 | モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company |
-画像解析
初期モデル | モデルのタイプ: PDB ENTRY |
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最終 再構成 | 想定した対称性 - 点群: C1 (非対称) / 解像度のタイプ: BY AUTHOR / 解像度: 3.68 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / ソフトウェア - 名称: RELION (ver. 3.0) / 使用した粒子像数: 60145 |
初期 角度割当 | タイプ: MAXIMUM LIKELIHOOD |
最終 角度割当 | タイプ: MAXIMUM LIKELIHOOD |