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-基本情報
登録情報 | データベース: EMDB / ID: EMD-30215 | |||||||||||||||
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タイトル | Mature 50S ribosomal subunit from RrmJ knock out E.coli strain | |||||||||||||||
マップデータ | mature 50S from mutation strains | |||||||||||||||
試料 |
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キーワード | ribosome assembly / ribosome biogenesis / RIBOSOME | |||||||||||||||
機能・相同性 | 機能・相同性情報 stringent response / transcriptional attenuation / endoribonuclease inhibitor activity / RNA-binding transcription regulator activity / positive regulation of ribosome biogenesis / negative regulation of cytoplasmic translation / translational termination / DnaA-L2 complex / translation repressor activity / negative regulation of DNA-templated DNA replication initiation ...stringent response / transcriptional attenuation / endoribonuclease inhibitor activity / RNA-binding transcription regulator activity / positive regulation of ribosome biogenesis / negative regulation of cytoplasmic translation / translational termination / DnaA-L2 complex / translation repressor activity / negative regulation of DNA-templated DNA replication initiation / mRNA regulatory element binding translation repressor activity / ribosome assembly / assembly of large subunit precursor of preribosome / cytosolic ribosome assembly / response to reactive oxygen species / regulation of cell growth / DNA-templated transcription termination / response to radiation / mRNA 5'-UTR binding / large ribosomal subunit / ribosome binding / 5S rRNA binding / large ribosomal subunit rRNA binding / transferase activity / ribosomal large subunit assembly / cytoplasmic translation / cytosolic large ribosomal subunit / tRNA binding / negative regulation of translation / rRNA binding / ribosome / structural constituent of ribosome / translation / response to antibiotic / negative regulation of DNA-templated transcription / mRNA binding / DNA binding / RNA binding / zinc ion binding / cytosol / cytoplasm 類似検索 - 分子機能 | |||||||||||||||
生物種 | Escherichia coli (大腸菌) / Escherichia coli (strain K12) (大腸菌) | |||||||||||||||
手法 | 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 3.14 Å | |||||||||||||||
データ登録者 | Wang W / Li WQ | |||||||||||||||
資金援助 | 中国, 4件
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引用 | ジャーナル: Proc Natl Acad Sci U S A / 年: 2020 タイトル: Loss of a single methylation in 23S rRNA delays 50S assembly at multiple late stages and impairs translation initiation and elongation. 著者: Wei Wang / Wanqiu Li / Xueliang Ge / Kaige Yan / Chandra Sekhar Mandava / Suparna Sanyal / Ning Gao / 要旨: Ribosome biogenesis is a complex process, and dozens of factors are required to facilitate and regulate the subunit assembly in bacteria. The 2'-O-methylation of U2552 in 23S rRNA by ...Ribosome biogenesis is a complex process, and dozens of factors are required to facilitate and regulate the subunit assembly in bacteria. The 2'-O-methylation of U2552 in 23S rRNA by methyltransferase RrmJ is a crucial step in late-stage assembly of the 50S subunit. Its absence results in severe growth defect and marked accumulation of pre50S assembly intermediates. In the present work, we employed cryoelectron microscopy to characterize a set of late-stage pre50S particles isolated from an Δ strain. These assembly intermediates (solved at 3.2 to 3.8 Å resolution) define a collection of late-stage particles on a progressive assembly pathway. Apart from the absence of L16, L35, and L36, major structural differences between these intermediates and the mature 50S subunit are clustered near the peptidyl transferase center, such as H38, H68-71, and H89-93. In addition, the ribosomal A-loop of the mature 50S subunit from Δ strain displays large local flexibility on nucleotides next to unmethylated U2552. Fast kinetics-based biochemical assays demonstrate that the Δ 50S subunit is only 50% active and two times slower than the WT 50S subunit in rapid subunit association. While the Δ 70S ribosomes show no defect in peptide bond formation, peptide release, and ribosome recycling, they translocate with 20% slower rate than the WT ribosomes in each round of elongation. These defects amplify during synthesis of the full-length proteins and cause overall defect in protein synthesis. In conclusion, our data reveal the molecular roles of U2552 methylation in both ribosome biogenesis and protein translation. | |||||||||||||||
履歴 |
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-構造の表示
ムービー |
ムービービューア |
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構造ビューア | EMマップ: SurfViewMolmilJmol/JSmol |
添付画像 |
-ダウンロードとリンク
-EMDBアーカイブ
マップデータ | emd_30215.map.gz | 116.9 MB | EMDBマップデータ形式 | |
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ヘッダ (付随情報) | emd-30215-v30.xml emd-30215.xml | 50.9 KB 50.9 KB | 表示 表示 | EMDBヘッダ |
画像 | emd_30215.png | 53.3 KB | ||
Filedesc metadata | emd-30215.cif.gz | 10.9 KB | ||
その他 | emd_30215_additional_1.map.gz emd_30215_additional_2.map.gz emd_30215_additional_3.map.gz | 117 MB 117.1 MB 117.1 MB | ||
アーカイブディレクトリ | http://ftp.pdbj.org/pub/emdb/structures/EMD-30215 ftp://ftp.pdbj.org/pub/emdb/structures/EMD-30215 | HTTPS FTP |
-検証レポート
文書・要旨 | emd_30215_validation.pdf.gz | 652.1 KB | 表示 | EMDB検証レポート |
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文書・詳細版 | emd_30215_full_validation.pdf.gz | 651.7 KB | 表示 | |
XML形式データ | emd_30215_validation.xml.gz | 6.6 KB | 表示 | |
CIF形式データ | emd_30215_validation.cif.gz | 7.5 KB | 表示 | |
アーカイブディレクトリ | https://ftp.pdbj.org/pub/emdb/validation_reports/EMD-30215 ftp://ftp.pdbj.org/pub/emdb/validation_reports/EMD-30215 | HTTPS FTP |
-関連構造データ
-リンク
EMDBのページ | EMDB (EBI/PDBe) / EMDataResource |
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「今月の分子」の関連する項目 |
-マップ
ファイル | ダウンロード / ファイル: emd_30215.map.gz / 形式: CCP4 / 大きさ: 125 MB / タイプ: IMAGE STORED AS FLOATING POINT NUMBER (4 BYTES) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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注釈 | mature 50S from mutation strains | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
投影像・断面図 | 画像のコントロール
画像は Spider により作成 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
ボクセルのサイズ | X=Y=Z: 1.08 Å | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
密度 |
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対称性 | 空間群: 1 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
詳細 | EMDB XML:
CCP4マップ ヘッダ情報:
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-添付データ
-添付マップデータ: emd 30215 additional 1.map
ファイル | emd_30215_additional_1.map | ||||||||||||
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投影像・断面図 |
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密度ヒストグラム |
-添付マップデータ: emd 30215 additional 2.map
ファイル | emd_30215_additional_2.map | ||||||||||||
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投影像・断面図 |
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密度ヒストグラム |
-添付マップデータ: emd 30215 additional 3.map
ファイル | emd_30215_additional_3.map | ||||||||||||
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投影像・断面図 |
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密度ヒストグラム |
-試料の構成要素
+全体 : Mature 50S ribosomal subunit from RrmJ knock out E.coli strain
+超分子 #1: Mature 50S ribosomal subunit from RrmJ knock out E.coli strain
+分子 #1: 23S rRNA
+分子 #2: 5S rRNA
+分子 #3: 50S ribosomal protein L2
+分子 #4: 50S ribosomal protein L3
+分子 #5: 50S ribosomal protein L4
+分子 #6: 50S ribosomal protein L5
+分子 #7: 50S ribosomal protein L6
+分子 #8: 50S ribosomal protein L9
+分子 #9: 50S ribosomal protein L10
+分子 #10: 50S ribosomal protein L11
+分子 #11: 50S ribosomal protein L13
+分子 #12: 50S ribosomal protein L14
+分子 #13: 50S ribosomal protein L15
+分子 #14: 50S ribosomal protein L16
+分子 #15: 50S ribosomal protein L17
+分子 #16: 50S ribosomal protein L18
+分子 #17: 50S ribosomal protein L19
+分子 #18: 50S ribosomal protein L20
+分子 #19: 50S ribosomal protein L21
+分子 #20: 50S ribosomal protein L22
+分子 #21: 50S ribosomal protein L23
+分子 #22: 50S ribosomal protein L24
+分子 #23: 50S ribosomal protein L25
+分子 #24: 50S ribosomal protein L27
+分子 #25: 50S ribosomal protein L28
+分子 #26: 50S ribosomal protein L29
+分子 #27: 50S ribosomal protein L30
+分子 #28: 50S ribosomal protein L32
+分子 #29: 50S ribosomal protein L33
+分子 #30: 50S ribosomal protein L34
+分子 #31: 50S ribosomal protein L35
+分子 #32: 50S ribosomal protein L36
-実験情報
-構造解析
手法 | クライオ電子顕微鏡法 |
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解析 | 単粒子再構成法 |
試料の集合状態 | particle |
-試料調製
濃度 | 0.15 mg/mL |
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緩衝液 | pH: 7.5 詳細: Solutions were made fresh form concentrated to avoid microbial contamination. |
グリッド | モデル: Quantifoil R2/2 / 材質: COPPER / メッシュ: 300 / 支持フィルム - 材質: CARBON / 支持フィルム - トポロジー: CONTINUOUS / 支持フィルム - Film thickness: 7000 / 前処理 - タイプ: GLOW DISCHARGE / 前処理 - 時間: 30 sec. / 前処理 - 雰囲気: AIR / 前処理 - 気圧: 0.03 kPa / 詳細: The grid was coated with continuous carbon film. |
凍結 | 凍結剤: ETHANE / チャンバー内湿度: 100 % / チャンバー内温度: 277 K / 装置: FEI VITROBOT MARK IV / 詳細: blot for 2 seconds before plunging. |
詳細 | This sample was monodisperse. |
-電子顕微鏡法
顕微鏡 | FEI TITAN KRIOS |
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詳細 | Preliminary grid screening was performed manually. |
撮影 | フィルム・検出器のモデル: FEI FALCON II (4k x 4k) デジタル化 - サイズ - 横: 4096 pixel / デジタル化 - サイズ - 縦: 4096 pixel / デジタル化 - 画像ごとのフレーム数: 3-28 / 撮影したグリッド数: 1 / 実像数: 1164 / 平均電子線量: 45.0 e/Å2 |
電子線 | 加速電圧: 300 kV / 電子線源: FIELD EMISSION GUN |
電子光学系 | 倍率(補正後): 75000 / 照射モード: SPOT SCAN / 撮影モード: BRIGHT FIELD / Cs: 2.7 mm / 最大 デフォーカス(公称値): -2.0 µm / 最小 デフォーカス(公称値): -1.0 µm / 倍率(公称値): 75000 |
試料ステージ | 試料ホルダーモデル: FEI TITAN KRIOS AUTOGRID HOLDER ホルダー冷却材: NITROGEN |
実験機器 | モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company |
+画像解析
-原子モデル構築 1
初期モデル |
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精密化 | 空間: RECIPROCAL / プロトコル: RIGID BODY FIT / 当てはまり具合の基準: Correlation coefficient | ||||||
得られたモデル | PDB-7bv8: |