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-基本情報
登録情報 | データベース: EMDB / ID: EMD-22361 | |||||||||
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タイトル | Structure of Drosophila ORC bound to AT-rich DNA and Cdc6 | |||||||||
マップデータ | unsharpened cryo-RM map | |||||||||
試料 |
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キーワード | origin recognition complex / DNA replication initiation / REPLICATION / REPLICATION-DNA complex | |||||||||
機能・相同性 | 機能・相同性情報 alpha-heterochromatin / larval feeding behavior / CDC6 association with the ORC:origin complex / septin cytoskeleton / CDK-mediated phosphorylation and removal of Cdc6 / septin cytoskeleton organization / Activation of ATR in response to replication stress / Activation of the pre-replicative complex / eggshell chorion gene amplification / Orc1 removal from chromatin ...alpha-heterochromatin / larval feeding behavior / CDC6 association with the ORC:origin complex / septin cytoskeleton / CDK-mediated phosphorylation and removal of Cdc6 / septin cytoskeleton organization / Activation of ATR in response to replication stress / Activation of the pre-replicative complex / eggshell chorion gene amplification / Orc1 removal from chromatin / DNA amplification / positive regulation of border follicle cell migration / Assembly of the ORC complex at the origin of replication / origin recognition complex / nuclear origin of replication recognition complex / olfactory learning / nuclear pre-replicative complex / DNA replication preinitiation complex / mitotic DNA replication checkpoint signaling / mitotic chromosome condensation / chromosome condensation / DNA replication origin binding / DNA replication initiation / ribonucleoprotein complex binding / heterochromatin / nuclear pore / GTPase activator activity / mitotic spindle organization / learning / DNA-templated DNA replication / mitotic cell cycle / DNA replication / learning or memory / cell division / chromatin binding / protein homodimerization activity / ATP hydrolysis activity / DNA binding / ATP binding / nucleus / metal ion binding / plasma membrane 類似検索 - 分子機能 | |||||||||
生物種 | Drosophila melanogaster (キイロショウジョウバエ) / synthetic construct (人工物) | |||||||||
手法 | 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 3.4 Å | |||||||||
データ登録者 | Schmidt JM / Bleichert F | |||||||||
資金援助 | スイス, 1件
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引用 | ジャーナル: Nat Commun / 年: 2020 タイトル: Structural mechanism for replication origin binding and remodeling by a metazoan origin recognition complex and its co-loader Cdc6. 著者: Jan Marten Schmidt / Franziska Bleichert / 要旨: Eukaryotic DNA replication initiation relies on the origin recognition complex (ORC), a DNA-binding ATPase that loads the Mcm2-7 replicative helicase onto replication origins. Here, we report cryo- ...Eukaryotic DNA replication initiation relies on the origin recognition complex (ORC), a DNA-binding ATPase that loads the Mcm2-7 replicative helicase onto replication origins. Here, we report cryo-electron microscopy (cryo-EM) structures of DNA-bound Drosophila ORC with and without the co-loader Cdc6. These structures reveal that Orc1 and Orc4 constitute the primary DNA binding site in the ORC ring and cooperate with the winged-helix domains to stabilize DNA bending. A loop region near the catalytic Walker B motif of Orc1 directly contacts DNA, allosterically coupling DNA binding to ORC's ATPase site. Correlating structural and biochemical data show that DNA sequence modulates DNA binding and remodeling by ORC, and that DNA bending promotes Mcm2-7 loading in vitro. Together, these findings explain the distinct DNA sequence-dependencies of metazoan and S. cerevisiae initiators in origin recognition and support a model in which DNA geometry and bendability contribute to Mcm2-7 loading site selection in metazoans. | |||||||||
履歴 |
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-構造の表示
ムービー |
ムービービューア |
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構造ビューア | EMマップ: SurfViewMolmilJmol/JSmol |
添付画像 |
-ダウンロードとリンク
-EMDBアーカイブ
マップデータ | emd_22361.map.gz | 80.7 MB | EMDBマップデータ形式 | |
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ヘッダ (付随情報) | emd-22361-v30.xml emd-22361.xml | 30.7 KB 30.7 KB | 表示 表示 | EMDBヘッダ |
FSC (解像度算出) | emd_22361_fsc.xml | 10.7 KB | 表示 | FSCデータファイル |
画像 | emd_22361.png | 143.8 KB | ||
Filedesc metadata | emd-22361.cif.gz | 8.7 KB | ||
その他 | emd_22361_additional.map.gz emd_22361_half_map_1.map.gz emd_22361_half_map_2.map.gz | 11.4 MB 81 MB 81 MB | ||
アーカイブディレクトリ | http://ftp.pdbj.org/pub/emdb/structures/EMD-22361 ftp://ftp.pdbj.org/pub/emdb/structures/EMD-22361 | HTTPS FTP |
-検証レポート
文書・要旨 | emd_22361_validation.pdf.gz | 973.9 KB | 表示 | EMDB検証レポート |
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文書・詳細版 | emd_22361_full_validation.pdf.gz | 973.5 KB | 表示 | |
XML形式データ | emd_22361_validation.xml.gz | 17.6 KB | 表示 | |
CIF形式データ | emd_22361_validation.cif.gz | 23.2 KB | 表示 | |
アーカイブディレクトリ | https://ftp.pdbj.org/pub/emdb/validation_reports/EMD-22361 ftp://ftp.pdbj.org/pub/emdb/validation_reports/EMD-22361 | HTTPS FTP |
-関連構造データ
-リンク
EMDBのページ | EMDB (EBI/PDBe) / EMDataResource |
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「今月の分子」の関連する項目 |
-マップ
ファイル | ダウンロード / ファイル: emd_22361.map.gz / 形式: CCP4 / 大きさ: 103 MB / タイプ: IMAGE STORED AS FLOATING POINT NUMBER (4 BYTES) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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注釈 | unsharpened cryo-RM map | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
投影像・断面図 | 画像のコントロール
画像は Spider により作成 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
ボクセルのサイズ | X=Y=Z: 0.86 Å | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
密度 |
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対称性 | 空間群: 1 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
詳細 | EMDB XML:
CCP4マップ ヘッダ情報:
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-添付データ
-追加マップ: sharpened, masked cryo-EM map
ファイル | emd_22361_additional.map | ||||||||||||
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注釈 | sharpened, masked cryo-EM map | ||||||||||||
投影像・断面図 |
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密度ヒストグラム |
-ハーフマップ: half-map
ファイル | emd_22361_half_map_1.map | ||||||||||||
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注釈 | half-map | ||||||||||||
投影像・断面図 |
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密度ヒストグラム |
-ハーフマップ: half-map
ファイル | emd_22361_half_map_2.map | ||||||||||||
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注釈 | half-map | ||||||||||||
投影像・断面図 |
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密度ヒストグラム |
-試料の構成要素
+全体 : Drosophila ORC bound to AT-rich DNA and Cdc6
+超分子 #1: Drosophila ORC bound to AT-rich DNA and Cdc6
+分子 #1: Origin recognition complex subunit 2
+分子 #2: Origin recognition complex subunit 3
+分子 #3: Origin recognition complex subunit 4
+分子 #4: Origin recognition complex subunit 5
+分子 #5: Origin recognition complex subunit 6
+分子 #6: Origin recognition complex subunit 1
+分子 #7: Cell division control protein
+分子 #8: DNA (34-MER)
+分子 #9: DNA (34-MER)
+分子 #10: ADENOSINE-5'-TRIPHOSPHATE
+分子 #11: MAGNESIUM ION
-実験情報
-構造解析
手法 | クライオ電子顕微鏡法 |
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解析 | 単粒子再構成法 |
試料の集合状態 | particle |
-試料調製
緩衝液 | pH: 7.6 構成要素:
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グリッド | モデル: UltrAuFoil R1.2/1.3 / 材質: GOLD / メッシュ: 300 / 前処理 - タイプ: PLASMA CLEANING / 前処理 - 時間: 10 sec. / 前処理 - 雰囲気: OTHER | ||||||||||||
凍結 | 凍結剤: ETHANE / 装置: FEI VITROBOT MARK IV | ||||||||||||
詳細 | Recombinantly expressed and purified Drosophila ORC and Cdc6 were mixed with DNA and the DNA-bound ternary complex purified by size exclusion chromatography. |
-電子顕微鏡法
顕微鏡 | FEI TITAN KRIOS |
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撮影 | フィルム・検出器のモデル: GATAN K2 SUMMIT (4k x 4k) 検出モード: COUNTING / 平均電子線量: 40.0 e/Å2 |
電子線 | 加速電圧: 300 kV / 電子線源: FIELD EMISSION GUN |
電子光学系 | 照射モード: FLOOD BEAM / 撮影モード: BRIGHT FIELD |
実験機器 | モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company |