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-基本情報
登録情報 | データベース: EMDB / ID: EMD-1927 | |||||||||
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タイトル | Ribosome Assembly Factors Prevent Premature Translation Initiation by 40S Assembly Intermediates | |||||||||
マップデータ | surface render of wild type Pre-40s map | |||||||||
試料 |
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キーワード | pre-40S / Rio2-TAP / 40S intermediate | |||||||||
生物種 | Saccharomyces cerevisiae (パン酵母) | |||||||||
手法 | 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 18.0 Å | |||||||||
データ登録者 | Strunk BS / Loucks CR / Su M / Vashisth H / Cheng S / Schilling J / BrooksIII CL / Karbstein K / Skiniotis G | |||||||||
引用 | ジャーナル: Science / 年: 2011 タイトル: Ribosome assembly factors prevent premature translation initiation by 40S assembly intermediates. 著者: Bethany S Strunk / Cherisse R Loucks / Min Su / Harish Vashisth / Shanshan Cheng / Justin Schilling / Charles L Brooks / Katrin Karbstein / Georgios Skiniotis / 要旨: Ribosome assembly in eukaryotes requires approximately 200 essential assembly factors (AFs) and occurs through ordered events that initiate in the nucleolus and culminate in the cytoplasm. Here, we ...Ribosome assembly in eukaryotes requires approximately 200 essential assembly factors (AFs) and occurs through ordered events that initiate in the nucleolus and culminate in the cytoplasm. Here, we present the electron cryo-microscopy (cryo-EM) structure of a late cytoplasmic 40S ribosome assembly intermediate from Saccharomyces cerevisiae at 18 angstrom resolution. We obtained cryo-EM reconstructions of preribosomal complexes lacking individual components to define the positions of all seven AFs bound to this intermediate. These late-binding AFs are positioned to prevent each step in the translation initiation pathway. Together, they obstruct the binding sites for initiation factors, prevent the opening of the messenger RNA channel, block 60S subunit joining, and disrupt the decoding site. These redundant mechanisms probably ensure that pre-40S particles do not enter the translation pathway, which would result in their rapid degradation. | |||||||||
履歴 |
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-構造の表示
ムービー |
ムービービューア |
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構造ビューア | EMマップ: SurfViewMolmilJmol/JSmol |
添付画像 |
-ダウンロードとリンク
-EMDBアーカイブ
マップデータ | emd_1927.map.gz | 11.6 MB | EMDBマップデータ形式 | |
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ヘッダ (付随情報) | emd-1927-v30.xml emd-1927.xml | 9.9 KB 9.9 KB | 表示 表示 | EMDBヘッダ |
画像 | EMD-1927.png | 82 KB | ||
アーカイブディレクトリ | http://ftp.pdbj.org/pub/emdb/structures/EMD-1927 ftp://ftp.pdbj.org/pub/emdb/structures/EMD-1927 | HTTPS FTP |
-検証レポート
文書・要旨 | emd_1927_validation.pdf.gz | 208.3 KB | 表示 | EMDB検証レポート |
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文書・詳細版 | emd_1927_full_validation.pdf.gz | 207.4 KB | 表示 | |
XML形式データ | emd_1927_validation.xml.gz | 6 KB | 表示 | |
アーカイブディレクトリ | https://ftp.pdbj.org/pub/emdb/validation_reports/EMD-1927 ftp://ftp.pdbj.org/pub/emdb/validation_reports/EMD-1927 | HTTPS FTP |
-関連構造データ
-リンク
EMDBのページ | EMDB (EBI/PDBe) / EMDataResource |
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「今月の分子」の関連する項目 |
-マップ
ファイル | ダウンロード / ファイル: emd_1927.map.gz / 形式: CCP4 / 大きさ: 15.3 MB / タイプ: IMAGE STORED AS FLOATING POINT NUMBER (4 BYTES) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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注釈 | surface render of wild type Pre-40s map | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
投影像・断面図 | 画像のコントロール
画像は Spider により作成 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
ボクセルのサイズ | X=Y=Z: 2.24 Å | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
密度 |
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対称性 | 空間群: 1 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
詳細 | EMDB XML:
CCP4マップ ヘッダ情報:
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-添付データ
-試料の構成要素
-全体 : S. cerevisiae pre-40S ribosomal particle purified by Rio2-TAP
全体 | 名称: S. cerevisiae pre-40S ribosomal particle purified by Rio2-TAP |
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要素 |
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-超分子 #1000: S. cerevisiae pre-40S ribosomal particle purified by Rio2-TAP
超分子 | 名称: S. cerevisiae pre-40S ribosomal particle purified by Rio2-TAP タイプ: sample / ID: 1000 / 詳細: monodisperse / Number unique components: 1 |
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分子量 | 理論値: 1.6 MDa |
-超分子 #1: pre-40s
超分子 | 名称: pre-40s / タイプ: complex / ID: 1 / Name.synonym: pre-40s / 組換発現: No / Ribosome-details: ribosome-eukaryote: SSU 40S |
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由来(天然) | 生物種: Saccharomyces cerevisiae (パン酵母) / 別称: Bakers' yeast |
分子量 | 理論値: 1.6 MDa |
-実験情報
-構造解析
手法 | クライオ電子顕微鏡法 |
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解析 | 単粒子再構成法 |
試料の集合状態 | particle |
-試料調製
濃度 | 1.5 mg/mL |
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緩衝液 | pH: 7.5 詳細: 50mM Tris-CL, 100mM NaCl, 10mM MgCl2, 0.075% NP40, 1mM imidazole, 2mM EGTA, 10mM BME |
グリッド | 詳細: quantifoil |
凍結 | 凍結剤: ETHANE / チャンバー内湿度: 100 % / チャンバー内温度: 85 K / 装置: OTHER / 詳細: Vitrification instrument: Vitrobot / 手法: Blot for 2 seconds before plunging |
-電子顕微鏡法
顕微鏡 | FEI TECNAI F20 |
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温度 | 最低: 89 K / 最高: 89 K / 平均: 89 K |
アライメント法 | Legacy - 非点収差: objective lens astigmatism was corrected at 135,000 times magnification |
撮影 | カテゴリ: CCD フィルム・検出器のモデル: GATAN ULTRASCAN 4000 (4k x 4k) 実像数: 460 / 平均電子線量: 16 e/Å2 |
電子線 | 加速電圧: 200 kV / 電子線源: FIELD EMISSION GUN |
電子光学系 | 倍率(補正後): 66964 / 照射モード: FLOOD BEAM / 撮影モード: BRIGHT FIELD / Cs: 2 mm / 最大 デフォーカス(公称値): 4.0 µm / 最小 デフォーカス(公称値): 1.5 µm |
試料ステージ | 試料ホルダー: Side entry liquid nitrogen-cooled cryo specimen holder 試料ホルダーモデル: OTHER |
実験機器 | モデル: Tecnai F20 / 画像提供: FEI Company |
-画像解析
詳細 | manual particle selection |
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CTF補正 | 詳細: Each micrograph |
最終 再構成 | 想定した対称性 - 点群: C1 (非対称) / アルゴリズム: OTHER / 解像度のタイプ: BY AUTHOR / 解像度: 18.0 Å / 解像度の算出法: FSC 0.5 CUT-OFF / ソフトウェア - 名称: EMAN / 詳細: Final map was filtered to 18A resolution / 使用した粒子像数: 11604 |
最終 角度割当 | 詳細: EMAN convention |
-原子モデル構築 1
初期モデル | PDB ID: 3o2z |
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ソフトウェア | 名称: NAMD |
詳細 | Protocol: MDFF. manual docking of modified 3o2z followed by MDFF. see publication |
精密化 | 空間: REAL / プロトコル: FLEXIBLE FIT / 当てはまり具合の基準: CC |